EFFECT OF PROCYANIDIN ON CELL CYCLE IN MURINE LEWIS LUNG CARCINOMA

Objective: To investigate the anti-tumor effect of procyanidin (WeiMaiNing, WMN) on a murine Lewis lung carcinoma cell line (3LL) and the influence on the cell cycle. Methods: The inhibitory rate of 3LL growth was detected in the model of murine Lewis lung carcinoma. The effect of the drug on 3LL cell cycle and the influence of the drug on the expression of cyclin D1 protein were investigated by flow cytometry, immunohistochemical staining. Results: The inhibitory rates of WMN in 3LL were 19.14%, 33.59% and 51.56% respectively at dosages 100 mg穔g-1穌-1, 150 mg穔g-1穌-1 and 250 mg穔g-1穌-1. The inhibitory effect was in a dose-dependent manner. We found WMN significantly increased (P<0.01) the number of 3LL cells in G0-G1 phase (35.97% vs. 27.2% at 150 mg穔g-1穌-1 WMN; 40.10% vs. 27.2% at 250 mg穔g-1穌-1 WMN) and decreased the expression of cyclin D1, PCNA protein. Conclusion: WeiMaiNing inhibits the growth of 3LL cells in vivo by decreasing the expression of PCNA and cyclin D1, blocking the cells in G0-G1 phase and preventing the cells transition from G1 to S phase while DNA is replicated.

榄香烯乳联合化疗对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用

目的观察榄香烯乳联合化疗对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用,探讨其抑瘤作用机制。方法 32只C57BL小鼠右腋下接种Lewis肺癌细胞成瘤,随机分为4组:肺癌模型组、化疗组(足叶乙甙3mg/kg+顺铂3mg/kg,6mg/kg)、榄香烯乳组(100mg/kg)、榄香烯乳+化疗组(106mg/kg),每组8只。连续给药7d后,观察脾脏及胸腺指数变化,测定抑瘤率及抑制转移率,并进行组织病理学检测以及透明质酸酶(HAase)和组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白表达测定。结果与单纯化疗组比较,榄香烯乳联合化疗组抑瘤率及抑制转移率明显升高,肺癌小鼠脾脏指数及胸腺指数显著增加,瘤组织细胞形态结构得到改善,TIMP-1蛋白阳性表达率降低明显。结论榄香烯乳联合化疗对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用明显,其作用机制与增强细胞外基质及免疫调节有关。

益气除痰方对脾虚Lewis肺癌小鼠肿瘤生长、生存期及PRDX-1、PRDX-6表达的影响

目的观察益气除痰方对脾虚C57BL/6J小鼠Lewis肺癌肿瘤生长、肺转移、生存期及肿瘤组织中过氧化物氧化还原酶PRDX-1、PRDX-6表达的影响。方法建立C57BL/6J小鼠Lewis肺癌模型30只,脾虚Lewis肺癌模型90只,分为4组,Lewis组(对照组)、脾虚Lewis组(模型组)、益气除痰方低剂量组、高剂量组,每组30只,对照组、模型组予生理盐水0.5mL、治疗组予益气除痰方1.0及3.0g/kg处理,每天1次,灌胃21天后,每组各处死10只检测肿瘤体积、重量、肺转移灶,并用免疫组化法比较各组肿瘤组织PRDX-1,PRDX-6的表达,其余荷瘤鼠观察生存期。结果益气除痰方高剂量组Lewis肺癌小鼠肿瘤体积、瘤重、肺转移灶明显下降,分别为(1.14±0.30)cm3、(0.83±0.26)g、(6.20±2.53)个,而对照组分别为(2.83±0.35)cm3、(2.08±0.28)g、(8.60±1.84)个,模型组分别为(2.29±0.49)cm3、(1.67±0.33)g、(8.70±2.00)个;高剂量组小鼠中位生存期为(29.00±0.89)天,平均生存时间为(29.60±0.53)天,与对照组(22.00±0.75)天、(22.90±0.50)天,模型组(21.00±0.53)天、(20.95±0.44)天比较生存期明显延长;高剂量组免疫组化肿瘤组织PRDX-1、PRDX-6表达量明显下降,分别为0.15±0.03、0.12±0.02,对照组分别为0.52±0.07、0.43±0.06,模型组分别为0.61±0.09、0.56±0.07。高剂量组与对照组、模型组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。高剂量组抑瘤率为50.30%,生命延长率为41.29%,优于低剂量组(P<0.05)。结论益气除痰方能抑制脾虚小鼠Lewis肺癌的生长,延长生存期,其机制可能与降低PRDX-1,PRDX-6的过量表达有一定关系。

Sca-1^+ Lewis肺癌细胞成瘤实验的研究

目的探讨小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)细胞株中Sca-1+细胞的成瘤特性。方法以Sca-1作为磁珠分选细胞的表面标志,从LLC细胞中分离Sca-1+细胞,流式细胞仪鉴定分离的纯度。将分选的Sca-1+细胞、Sca-1-细胞及未分选细胞分别以1×106、5×105、1×105、5×104、2×104密度接种于C57BL/6小鼠腋窝下,观察成瘤时间,4周后处死小鼠,统计成瘤率、平均瘤重及体积。结果分选前Sca-1阳性细胞百分比为(8.06±1.03)%,分选后Sca-1阳性细胞百分比为(93.92±1.07)%。Sca-1+细胞组在2×104个细胞时可以成瘤,而Sca-1-细胞组最少需要5×105个细胞。相同接种量(1×106),4周后处死小鼠,Sca-1+细胞组的瘤重及体积均大于Sca-1-细胞组(P<0.01)。结论Sca-1+细胞的成瘤性较Sca-1-细胞强。

土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤和Lewis肺癌转移的抑制作用

目的:本研究旨在探讨土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤和Lewis肺癌转移的影响。方法:采用裸BALB/c小鼠B16黑色素瘤实验转移和裸BALB/c小鼠Lewis肺癌自发转移模型研究土贝母苷甲对肿瘤转移的影响;采用免疫组织化学法检测土贝母苷甲对转移相关基因CD44v6、ErbB-2和nm23-H1表达的影响。结果:腹腔注射低于全身中毒水平剂量的土贝母苷甲明显减少接种B16黑色素瘤细胞小鼠的肺重和肺转移灶数量,而对小鼠的健康和活力无明显影响;土贝母苷甲(2、3 mg.kg-1.d-1×14 d)和环磷酰胺(50 mg.kg-1.wk-1×2 d)对B16黑色素瘤细胞肺转移的抑制率分别为68.8%、82.8%和49.1%。土贝母苷甲治疗组小鼠Lewis肺癌原发肿瘤的平均瘤重明显低于对照组(P<0.05)。土贝母苷甲(2、3 mg.kg-1.d-1×14 d)和环磷酰胺(50 mg.kg-1.w-1×2 d)治疗组小鼠的肝转移抑制率分别为46.3%、52.0%和54.7%。土贝母苷甲显著下调促转移基因CD44v6和ErbB-2的表达,上调抑转移基因nm23-H1的表达。结论:土贝母苷甲对小鼠B16黑色素瘤的实验性转移和Lewis肺癌的自发性转移都有显著的抑制作用。土贝母苷甲对肿瘤转移的这种抑制作用与其抑制原发肿瘤生长、下调促转移基因CD44v6和ErbB-2及上调抑转移基因nm23-H1的表达有关,提示土贝母苷甲是一个阻止癌扩散和转移的候补化合物。

多次小剂量pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗对小鼠Lewis肺癌的抑瘤作用

目的：探讨多次小剂量pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗对荷Lewis肺癌小鼠的抑瘤效应。方法：将荷瘤小鼠随机分为对照组、10Gy照射组、4次2．5Gy照射组、4次质粒组、质粒＋10Gy组和4次（质粒＋2．5Gy）组。小鼠肿瘤局部注射脂质体包裹的质粒后36h，接受X射线照射，观察各组小鼠治疗后不同时间肿瘤生长速率，18d后计数各组小鼠肺转移结节数，并称量瘤重。结果：治疗后12～18d，4次（质粒＋2．5Gy）组肿瘤生长速率明显低于质粒＋10Gy组（P〈0．001）。治疗后18d，4次（质粒＋2．5Gy）组小鼠肺转移结节数和瘤重明显低于质粒＋10Gy组（分别为P〈0．001和P〈0．01）。结论：多次小剂量pEgr-IFNγ-Endostatin基因-放射治疗的抑瘤效应优于单次大剂量基因-放射治疗。

血管生成在Lewis肺癌生长转移过程中的作用

目的建立能够模拟肿瘤生长、侵袭转移动态全过程的动物模型,利用该模型探讨血管生成与肿瘤生长、转移的关系。方法Lewis肺癌(LLC)在C57BL/6小鼠体内连续传代,观察第2代(早期组)、第8代(中期组)和第15代(晚期组)荷瘤小鼠肿瘤生长和肺转移的情况,采用免疫组织化学法检测各组荷瘤小鼠肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和微血管密度(MVD)的表达。结果(1)早、中、晚期三组小鼠肿瘤随传代次数的增加生长速度加快、侵袭力增强,肺转移率升高。(2)VEGF、HIF-1α和MVD在早、中、晚期三组小鼠瘤组织中的阳性表达均呈升高趋势,差别有统计学意义(P<0.05),且HIF-1α与VEGF、VEGF与MVD的表达均呈正相关。结论Lewis肺癌在小鼠体内连续传代过程中生长速度加快,转移潜能增强,而血管生成在这个动态过程中发挥了重要作用,使肿瘤得以持续生长和扩散转移。

Sca-1^+Lewis肺癌细胞耐药实验研究

目的探讨小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)细胞株中Sca-1+LLC细胞的耐药特性及机制。方法将LLC细胞培养于含有不同浓度丝裂霉素、顺铂、健择、紫杉醇的培养液中,培养72h后分别检测各组Sca-1阳性细胞的比例。以Sca-1作为磁珠分选的表面标志,从LLC细胞中分选Sca-1+LLC细胞和Sca-1-LLC细胞,RT-PCR检测各组ABCG2mRNA表达水平。免疫荧光检测Sca-1+LLC细胞与SP细胞(Hoechst33342拒染)的关系。结果随着抗肿瘤药物浓度的升高,Sca-1阳性细胞的比例随之升高。RT-PCR检测表明Sca-1+LLC细胞表达更高水平的ABCG2mRNA,免疫荧光发现SP细胞只存在于Sca-1+LLC细胞。结论Sca-1+LLC细胞的耐药性较Sca-1-LLC细胞强,与Sca-1+LLC细胞高表达ABCG2有关。

HA14-1对环磷酰胺治疗小鼠Lewis肺癌增敏作用的实验研究

目的观察HA14-1对环磷酰胺(CTX)治疗Lewis肺癌小鼠的化疗增效作用,探讨其可能的作用机制。方法建立Lewis肺癌小鼠肿瘤模型,将40只C57BL/6小鼠随机分为4组:生理盐水组、CTX组、HA14-1组和CTX+HA14-1组,给药7d。于肿瘤接种22d处死小鼠,描绘各组肿瘤体积增长曲线、计算抑瘤率,免疫组织化学方法测定治疗前后Lewis肺癌细胞Bcl-2、Bax和Caspase-9蛋白的表达情况。结果HA14-1组与生理盐水组比较无明显抑制肿瘤体积的作用,CTX组、HA14-1组和CTX+HA14-1组的肿瘤体积较生理盐水组增长慢。HA14-1组的抑瘤率与生理盐水组比较无明显增加(P>0.05);CTX+HA14-1组及CTX组与生理盐水组比较,CTX+HA14-1组与CTX组比较,抑瘤率均明显增加(P<0.05)。CTX组、HA14-1组和CTX+HA14-1组Bcl-2蛋白表达均减少,且CTX+HA14-1组较CTX组Bcl-2蛋白明显减少(P<0.05)。CTX组、HA14-1组和CTX+HA14-1组Bax、Caspase-9蛋白表达增加,与生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.05);CTX+HA14-1组比CTX组Bax、Caspase-9蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论HA14–1可以增加CTX的化疗作用,其作用机制可能是通过抑制Bcl-2蛋白的表达,增加Bax、Caspase-9蛋白表达,从而促使肿瘤细胞凋亡。

重组质粒pIRESEgr-IFNγ的构建及其在Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达

目的:构建重组真核表达质粒pIRESEgr-IFNγ并检测其在体外培养的Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达。方法:利用基因重组技术构建含Egr-1启动子的IFNγ表达质粒,脂质体介导体外转染Lewis肺癌细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)检测0、2、5和10Gy X射线诱导IFNγ表达的量效和时程关系。结果:酶切鉴定证实,Egr-1启动子和IFNγ基因正确插入真核表达载体pIRES1neo;2、5和10Gy X射线照射转染该重组质粒的Lewis肺癌细胞,上清中IFNγ表达量明显高于假照组(P<0.001),其中5Gy照射后表达量最高,为假照组的4.39倍。5Gy照射后2、6、12和36h上清中IFNγ表达量逐渐增加(P<0.001),照射后36h表达量为照射前的6.27倍。结论:成功构建了真核表达质粒pIRESEgr-IFNγ,该质粒具有辐射诱导基因表达增强特性。

土贝母苷甲对人脐静脉内皮细胞凋亡和肿瘤诱导的血管生成的影响

研究了土贝母苷甲(下称苷甲)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)凋亡和肿瘤诱导的血管生成的影响。包括:MTT法检测苷甲对HUVECs生长的影响;荧光显微镜观察苷甲作用下HUVECs的形态变化;流式细胞术分析苷甲对HUVECs周期及凋亡的影响;聚碳酸酯膜小室(Transwell model)趋化运动模型检测苷甲对HUVECs运动能力的影响;鸡胚绒毛尿囊膜(chick embryochorioallantoic membrane,CAM)试验检测苷甲对人鼻咽癌细胞(human nasopharyngeal carcinomaCNE-2Zcells,CNE-2Z)诱导的CAM血管生成的影响;免疫组化法检测苷甲对BALB/c裸小鼠Lewis肺癌组织微血管密度(microvessel density,MVD)和血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和血小板源生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)表达的影响。苷甲明显抑制HUVECs的生长,其抑制效果与剂量和作用时间相关,苷甲作用HUVECs24、48、72h其IC50值分别为24.2、21.4、17.9μmol/L;苷甲作用下HUVECs发生周期阻滞,呈现典型的凋亡特征,20.0μmol/L苷甲作用12、24、36hHUVECs的凋亡率分别为11.4%、20.8%、25.3%;20.0μmol/L苷甲处理HUVECs24h,对细胞迁移抑制率为58.4%;苷甲抑制CNE-2Z细胞诱导的CAM血管生成,并与剂量相关;苷甲应用后瘤组织MVD明显减少,VEGF、bFGF、PDGF表达下调。苷甲有明显的抑制血管生成活性,其抑制血管生成作用与诱导血管内皮细胞凋亡,抑制其运动能力,下调VEGF、bFGF和PDGF的表达有关。

肺积1号方影响小鼠肺癌移植瘤细胞周期蛋白D1表达的实验研究

目的观察肺积1号方对Lewis肺癌小鼠移植瘤CyclinD1表达的影响。方法建立Lewis肺癌细胞C57BL/6小鼠移植瘤模型,完全随机分为4组,每组8只:(1)模型组:生理盐水0.4 ml/只灌胃,1次/日,作为阴性对照;(2)肺积1号方小剂量组(肺小组):按照肺积1号方生药20 g/kg给药,用含生药1.0 g/ml的中药混悬液0.4毫升/只灌胃,1次/日;(3)肺积1号方中剂量组(肺中组):按照40 g/kg给药,用含生药2.0 g/m l的中药混悬液0.4毫升/只灌胃,1次/日;(4)肺积1号方大剂量组(肺大组):按照80 g/kg给药,灌服含生药4.0 g/m l的中药混悬液0.4毫升/只,1次/日。连续用药14天,停药1天,次日颈部脱臼法处死各组小鼠,无菌条件下剥取肿瘤组织,免疫组化法检测肺积1号方对肿瘤组织Cyclin D1表达的影响。结果肺积1号方中、大剂量组CyclinD1的表达均较模型组降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论肺积1号方可下调Lewis肺癌肿瘤组织细胞周期蛋白Cyclin D1的表达,可能是肺积1号方的抗肿瘤机制之一。

威麦宁对小鼠Lewis肺癌细胞周期的影响

目的 复制小鼠Lewis肺癌模型,检测威麦宁的抑瘤率。方法 采用流式细胞术分析、免疫组化法检测药物对模型鼠肿瘤细胞周期及对CyclinD1表达的影响。结果 威麦宁浓度在 1 0 0、1 5 0、2 0 0、2 5 0mg/(kg·d)时,对小鼠Lewis肺癌的抑制率分别为 1 9 1 4 %、33 5 9%、4 0 6 3%、5 1 5 6 %,药物对肿瘤的抑制作用具有剂量依赖性;药物可将肿瘤细胞阻滞在G0 ～G1期,并降低肿瘤细胞CyclinD1的表达(P <0 0 1)。结论 威麦宁可能是通过降低肿瘤细胞CyclinD1的表达,将肿瘤细胞阻止于G0 ～G1期,使细胞不能进入S期进行DNA复制,从而抑制肿瘤的生长。

Avasimibe对Lewis肺癌小鼠抗肿瘤作用研究

[目的]观察Avasimibe对Lewis肺癌小鼠模型肿瘤生长及转移的抑制作用,探索其可能的作用机制。[方法]选择24只C57BL/6小鼠,左前肢腋下接种Lewis肺癌细胞(LLC)构建Lewis肺癌小鼠模型,随机分成对照组、环磷酰胺(CTX)组、Avasimibe组、CTX+Avasimibe四组,每组6只。于接种肿瘤后第10d分别向Lewis肺癌小鼠模型腹腔注射生理盐水、CTX溶液、Avasimibe、CTX+Avasimibe溶液。至造模后35d,观察各组小鼠生存状态及移植瘤生长情况,称量小鼠体重、瘤重、胸腺重,计算抑瘤率、胸腺指数,观察肝肺转移情况,Western blot检测瘤组织ACAT-1的表达。[结果]与对照组比较,小鼠未出现体重减轻,各组瘤重均降低,CTX+Avasimibe组瘤重低于CTX组及Avasimibe组。四组抑瘤率分别为0、53.45%、51.51%和62.22%,与对照组比较,其余三组抑瘤率升高;与CTX组及Avasimibe组比较,CTX+Avasimibe组抑瘤率升高;与对照组比较,CTX组胸腺重显著性降低,Avasimibe组胸腺重显著性升高,CTX组胸腺指数显著性降低,与CTX组相比,Avasimibe组及CTX+Avasimibe组的胸腺重及胸腺指数均显著性增加。对照组小鼠出现肝肺转移,CTX组、Avasimibe组及CTX+Avasimibe组未见肝肺转移情况;与对照组和CTX组比较,Avasimibe组及CTX+Avasimibe组ACAT-1蛋白表达降低。[结论] Avasimibe在Lewis肺癌小鼠体内可有效发挥抑制肿瘤生长及转移的作用,而且还可以提高小鼠的免疫功能,这为肺癌治疗提供一个新靶点。

新型2-胺基-1,3,4-噻二唑类化合物的合成及其抗肿瘤活性的研究

设计合成了一系列新型的N1-(5-取代基-1,3,4-噻二唑-2-基)-N3-取代苯基-脲类化合物,并测定了它们的抗肿瘤活性.标题化合物对肿瘤转移的生物活性实验是以荷Lewis肺癌小鼠为模型的.生物活性表明部分标题化合物对肿瘤的转移和肿瘤生长具有较好的抑制作用.其结构经元素分析、红外光谱及1H NMR确证.

小剂量X射线全身照射提高小鼠抗瘤能力的整体和离体研究

本文作者利用肿瘤血道转移和自发转移模型，从整体和离体两方面观察７５ｍＧｙＸ射线全身照射对小鼠抗瘤能力的影响。结果发现：①与假照组相比，照射组小鼠Ｂ１６黑色素瘤血道肺转移结节数明显降低（Ｐ＜０．０１）；过继转移至同系小鼠体内的脾细胞，可明显抑制Ｌｅｗｉｓ肺癌（ＬＬＣ）的局部生长和自发肺转移（Ｐ＜０．０５～０．０１）。②与假照组相比，体外检测照射组小鼠脾细胞对ＣｏｎＡＩＬ－２反应性增强（Ｐ＜０．０１），ＮＫ活性明显提高（Ｐ＜０．０１）；体内检测其巨噬细胞功能也显著增强（Ｐ＜０．０１），１２５ＩＵｄＲ标记黑色素瘤细胞在肺内的存留率显著降低（Ｐ＜０．０１）。上述结果提示，小剂量辐射可明显提高小鼠的抗瘤能力；机体免疫功能的增强可能是其抗肿瘤效应的主要机理之一。