HMGB1参与HBSS诱导的Lewis细胞凋亡及其相关机制研究

目的探讨HBSS饥饿缓冲液能否诱导肺癌细胞(Lewis)凋亡及可能的机制。方法 Hank′s平衡溶液(HBSS)饥饿缓冲液作用于Lewis细胞12 h后采用Annexin V/PI流式双染检测细胞凋亡。Lewis细胞在HBSS处理30 min后流式检测ROS的产生,4、8、12 h后通过免疫印迹检测HMGB1蛋白的表达。另外,HBSS刺激Lewis细胞12 h后采用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3的表达。结果 HBSS饥饿缓冲液作用于Lewis细胞12 h后与对照组相比凋亡百分比明显增多。流式结果表明Lewis细胞在HBSS处理30 min后ROS表达量明显上升,免疫印迹检测发现HBSS作用Lewis细胞3 h后HMGB1表达增加,6 h后在细胞培养上清中检测到HMGB1的分泌。另外,HBSS刺激12 h后Caspase-3表达也显著增加,且有统计学意义。结论 HBSS饥饿缓冲液能诱导肺癌细胞(Lewis)凋亡,且凋亡可能依赖于ROS-HMGB1-Caspase-3通路。

蛇葡萄素钠协同卡铂体外诱导肺癌Lewis细胞凋亡研究

目的：考察蛇葡萄素钠（AMP-Na）单用及与卡铂合用对肺癌Lewis细胞增殖的抑制作用,初步探讨AMP-Na抑瘤作用机制。方法：应用MTT法考察AMP-Na单用及与卡铂合用对肺癌Lewis细胞的细胞毒作用;使用流式细胞仪检测凋亡相关基因Bax以及Bcl-2表达。结果：体外细胞毒实验结果表明,AMP-Na在12.5～200.0μg/m L的浓度范围内对肺癌Lewis细胞的增殖具有浓度依赖性的抑制作用,其IC_（50）为63.1μg/m L;6.3、12.5、25.0、50.0μg/m L的AMP-Na与卡铂3.1～25.0μg/m L联合用药对卡铂抑制Lewis细胞的增殖作用具有协同效应;流式细胞仪检测结果显示,AMP-Na 12.5、25.0、50.0、100.0μg/m L单用及与卡铂25.0μg/m L联合应用处理细胞48h后,Bax的表达升高,Bcl-2的表达降低（P〈0.01）,Bcl-2/Bax比率降低。结论：蛇葡萄素钠单用对Lewis细胞的增殖具有一定的抑制作用,与卡铂合用,对Lewis细胞增殖具有协同抑制效应;蛇葡萄素钠可能是通过下调Bcl-2并上调Bax从而促进肿瘤细胞凋亡。

靶向HER2基因shRNA对小鼠Lewis细胞化疗敏感度的影响

目的探讨靶向HER2基因shRNA对小鼠肺腺癌Lewis细胞化疗敏感度的影响。方法应用Lipofectamine 2000将pGPU6/RFP/Neo-erbB-2、pGPU6/RFP/Neo-shNC质粒表达载体快速转染小鼠肺腺癌Lewis细胞;应用RT-PCR、Western blot检测各组HER2 mRNA、蛋白的表达。应用流式细胞术检测未转染对照组、pGPU6/RFP/Neo-shNC组、pGPU6/RFP/Neo-erbB-2组、卡铂组、pGPU6/RFP/Neo-shNC+卡铂组、pGPU6/RFP/Neo-erbB-2+卡铂组的细胞凋亡率。结果 pGPU6/RFP/Neo-erbB-2组HER2 mRNA和蛋白的水平均低于pGPU6/RFP/Neo-shNC组和未转染对照组。pGPU6/RFP/Neo-erbB-2+卡铂组细胞的凋亡率高于其余各组(P均<0.01)。结论 HER2 shRNA能增强小鼠Lewis细胞对卡铂的敏感度。

shRNA抑制C-erbB-2基因表达对小鼠Lewis细胞凋亡的影响

目的:探讨shRNA抑制C-erbB-2基因表达对小鼠肺腺癌Lewis细胞凋亡的影响。方法:构建4个pGPU6/RFP/Neo-erbB-2质粒和pGPU6/RFP/Neo-shNC。应用Lipofectamine 2000转染pGPU6/RFP/Neo-shNC至小鼠肺腺癌Lewis细胞,应用荧光显微镜观察荧光,确定最佳转染效率。应用RT-PCR检测C-erbB-2 mRNA的水平,应用Western blotting检测该蛋白的表达,筛选干扰效果最好的质粒。应用流式细胞术检测空白组、pGPU6/RFP/Neo-shNC组和最佳干扰组细胞的凋亡率。结果:pGPU6/RFP/Neo-shNC(μg):Lipofectamine(μl)为0.4:1时,转染效果最好。4个pGPU6/RFP/Neo-erbB-2质粒均能降低C-erbB-2 mRNA水平和蛋白的表达,其中干扰效果最好的是pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669,用于后续实验。pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669质粒组的凋亡率高于空白组和pGPU6/RFP/Neo-shNC组(P<0.05)。结论:pGPU6/RFP/NeoerbB-2-mus-3669质粒能抑制小鼠Lewis细胞C-erbB-2基因的表达,诱导细胞凋亡。

shRNA对小鼠Lewis细胞C-erbB-2基因表达的影响

目的:探讨shRNA表达质粒抑制小鼠肺腺癌Lewis细胞C-erbB-2基因的表达。方法:构建pGPU6/RFP/Neo-shNC质粒和4种GPU6/RFP/Neo-erbB-2质粒。按DNA∶LIPOFECTAMINE 2000为1∶2、1∶2.5、1∶3,将pGPU6/RFP/Neo-shNC质粒转染小鼠肺腺癌Lewis细胞,应用荧光显微镜观察转染效率。实验分组:pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-347组、pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-1944组、pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-2310组、pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669组、pGPU6/RFP/Neo-shNC组、空白组,应用RT-PCR技术检测转染前后C-erbB-2 mRNA的水平,应用Western blotting技术检测其蛋白的表达。结果:DNA∶Lipofectamine 2000为1∶2.5时,转染效率最高,后续试验均按此比例进行转染。4种pGPU6/RFP/Neo-erbB-2质粒均能降低C-erbB-2 mRNA和蛋白的表达,其中干扰效果最好的是pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669。结论:pGPU6/RFP/Neo-erbB-2-mus-3669质粒能有效抑制小鼠Lewis细胞C-erbB-2基因的表达。

川芎嗪对小鼠Lewis细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨中药川芎嗪对小鼠Lewis细胞的增殖和凋亡作用的影响。方法采用噻唑蓝法检测川芎嗪对Lewis细胞增殖的抑制作用,倒置显微镜观察药物作用前后细胞形态学的变化情况,流式细胞术(FCM)观察Lewis细胞凋亡指标的变化。结果川芎嗪能够抑制Lewis细胞的体外增殖,12.5、25.0、50.0 mg·L-1组的抑制率分别为29.8%、50.5%、61.3%,其48 h半数抑制浓度(IC50)为33.504 mg·L-1。实验组Lewis细胞经12.5、25.0和50.0 mg·L-1的川芎嗪处理48 h后,其凋亡率分别为(19.23±0.17)%、(30.81±0.46)%、(55.26±0.19)%;对照组为(0.64±0.37)%,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论川芎嗪能够抑制Lewis细胞增殖,其作用可能是通过诱导Lewis细胞凋亡和分化实现的。

bFGF单抗协同替吉奥抑制肺癌Lewis细胞的增殖及移植瘤血管新生

目的:探讨碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)单抗与替吉奥(gimeracil and oteracil porassi-um,又称S-1)联合应用体内外抑制小鼠Lewis肺癌细胞增殖、移植瘤生长及转移、肿瘤血管新生的协同作用。方法:CCK-8法检测bFGF单抗及S-1对Lewis细胞增殖的抑制作用。建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌自发转移瘤模型,32只小鼠随机分成生理盐水(NS)组、bFGF单抗组、S-1组和bFGF单抗+S-1组,每组8只;测量瘤体,绘制生长曲线,称瘤质量并计算抑瘤率;计数各组肺表面转移瘤结节;CD31标记血管内皮细胞,计数转移瘤微血管密度(microvessel density,MVD)。结果:bFGF单抗、S-1剂量依赖性抑制Lewis细胞增殖(P<0.05),联合用药组抑制率明显高于单药组(P<0.05或P<0.01)。bFGF单抗组、S-1组以及bFGF单抗+S-1组对Lewis转移瘤的抑瘤率分别为37.8%、47.7%、65.9%,联合组抑瘤率明显高于单药组(P<0.05或P<0.01)。联合组肺表面转移结节、微血管密度明显低于单药组(2.71±0.76vs6.57±0.98、4.71±0.76;21.6±2.9vs33.4±4.9、41.9±6.3;P<0.05或P<0.01)。结论:bFGF单抗联合S-1对Lewis肺癌移植瘤具有协同抑制作用,其机制与抑制细胞增殖及血管新生有关。

pcDNA3.1(+)-mIL-12在Lewis细胞中生物活性的探讨

目的:建立稳定表达小鼠IL-12(mIL-12)的小鼠Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma,LLC)细胞系LLC/mIL-12,为进一步研究mIL-12的免疫调节机制及其抗肿瘤作用奠定基础。方法:构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-mIL-12,脂质体转染LLC细胞并测其表达,流式细胞仪(FCM)观察细胞周期和凋亡,G418筛选获得阳性克隆后大量培养并检测mIL-12活性。结果:pcDNA3.1(+)-mIL-12质粒构建正确并成功转导入LLC细胞,重组质粒在mRNA及蛋白质水平均高表达mIL-12,mIL-12使LLC细胞周期重新分布,并促进其凋亡。LLC/mIL-12细胞培养上清能明显引起刀豆蛋白A(ConA)激活的小鼠脾细胞增殖。结论:成功构建pcDNA3.1(+)-mIL-12真核表达质粒,建立具有mIL-12生物学活性的LLC细胞系。

基于“正虚伏毒”理论探讨金复康有效组分调控NK细胞功能抑制Lewis肺癌细胞的转移

目的:基于“正虚伏毒”理论,探讨金复康中有效的“扶正”和“蠲毒”组分黄芪甲苷Ⅳ联合重楼皂苷Ⅶ抑制Lewis肺癌细胞转移的免疫学机制。方法:C57BL/6J小鼠尾静脉注射Lewis细胞建立肺癌转移动物模型,将小鼠按随机表法随机分为治疗组和对照组(每组8只),治疗组采用金复康有效组分黄芪甲苷Ⅳ(25 mg/kg)联合重楼皂苷Ⅶ(2.5 mg/kg)进行干预,4周后观察小鼠肺和肝转移情况,H-E染色观察肺和肝转移灶病理组织变化,流式细胞术检测外周血和脾组织中NK细胞的比例,ELISA法检测血清中TNF-α、IFN-γ水平,免疫组化法检测转移灶组织中Ki-67蛋白的表达水平,免疫荧光法检测转移灶组织中NK细胞的浸润和IFN-γ分泌水平。免疫磁珠法分选健康小鼠脾内的NK细胞,然后与黄芪甲苷Ⅳ(5μmol/L)、重楼皂苷Ⅶ(0.5μmol/L)及两药联合干预后的Lewis细胞共培养,流式细胞术检测共培养后NK细胞的脱颗粒水平,LDH法检测NK细胞对Lewis细胞的杀伤活性。结果:与对照组相比,经黄芪甲苷Ⅳ联合重楼皂苷Ⅶ干预后的小鼠肺转移和肝转移灶的数目明显减少(均P<0.05),且转移负荷也显著降低(均P<0.05);转移灶中Ki-67蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),转移灶组织中NK细胞的浸润水平显著增加,且IFN-γ从NK细胞的胞内释放至胞外。此外,模型小鼠脾组织中的NK细胞比例显著降低(P<0.05)而外周血中的NK细胞水平却显著升高(P<0.05),小鼠血清中IFN-γ的水平显著减少而TNF-α的水平却显著升高(均P<0.05)。体外研究发现,黄芪甲苷Ⅳ和重楼皂苷Ⅶ单药或联合干预后,NK细胞的脱颗粒水平显著增加(P<0.05),但并未提高NK细胞对Lewis细胞的杀伤活性(P>0.05)。结论:金复康中的有效组分黄芪甲苷Ⅳ联合重楼皂苷Ⅶ可通过促进NK细胞浸润到肿瘤组织内和增强IFN-γ分泌以抑制Lewis肺癌细胞的肺转移和肝转移,研究结果为“正虚伏毒”理论提供了科学依据。

苗药吉祥草配伍余甘子抗Lewis肺癌细胞增殖组分的筛选

目的:探索吉祥草和余甘子配伍后治疗非小细胞肺癌的药效物质,为吉祥草配伍余甘子在抗肿瘤制剂开发方面的研究提供实验依据。方法:采用鲜药榨汁、传统水煎、渗漉为提取方法制得吉祥草配伍余甘子的不同提取物,以Lewis肺癌细胞体外实验模型作为评价手段,优选药材的最佳提取方法;通过膜分离技术,将最佳提取方法的提取物分段截留得到不同分子量区间段组分,以Lewis肺癌细胞体外实验模型作为评价手段优选最佳的分子量区间段。结果:吉祥草配伍余甘子对Lewis肺癌细胞增殖抑制作用的最佳提取方法为95%乙醇渗漉法。95%乙醇渗漉提取物对Lewis肺癌细胞增殖抑制作用的最佳分子量区间段组分为分子量10~30 KD与分子量≤1 KD组分。结论:苗药吉祥草配伍余甘子对Lewis肺癌细胞具有增殖抑制作用,抑制作用最佳组分为95%乙醇渗漉的分子量10~30 KD与分子量≤1 KD组分。

重组腺病毒Ad-CMV-TK的构建及其对Lewis细胞的抑制作用

目的构建重组腺病毒Ad-CMV-TK,并检测Ad-CMV-TK/GCV系统对小鼠Lewis肺癌细胞的抑制作用。方法PCR扩增HSV-TK基因,以复制缺陷型腺病毒为载体构建重组腺病毒Ad-CMV-TK,在HEK293细胞中包装,CsCl2梯度离心法纯化后,感染Lewis肺癌细胞,Western blot检测HSV-TK蛋白的表达;MTT法检测Ad-CMV-TK/GCV系统对Lewis细胞的体外抑制作用;同时检测Ad-CMV-TK/GCV系统对C57荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果重组腺病毒Ad-CMV-TK感染的Lewis细胞可特异地表达HSV-TK蛋白,Ad-CMV-TK/GCV系统在体外能明显抑制Lewis细胞的生长,当GCV浓度为100μmol/L时,Lewis细胞的存活率仅为16%;在体内能明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,与Ad-Blank/GCV对照组和PBS对照组相比,差异具有统计学意义。结论已成功构建了重组腺病毒Ad-CMV-TK,Ad-CMV-TK/GCV系统在体内及体外对小鼠Lewis肺癌细胞均有明显的抑制作用,为进一步研究其抗肿瘤机制及应用奠定了基础。

蝎毒提取物对Lewis细胞及DU-145细胞转移的抑制作用

目的观察蝎毒提取物对Lewis肺癌细胞肺转移和前列腺癌细胞株DU-145骨转移的抑制作用。方法 C57BL/6小鼠尾iv Lewis肺癌细胞(实验分模型组和给药组),裸鼠尾iv CM-DiI标记DU-145细胞(实验分模型组、对照组和给药组),给药组均每天ig给予蝎毒提取物300 mg/kg 1次,C57BL/6小鼠给药12 d,裸鼠给药24 d,模型组和对照组给予等量生理盐水,肉眼及镜检观察肺转移灶Lewis肺癌细胞肺转移情况,活体成像系统观察DU-145细胞骨转移的情况。在体外实验,免疫组化法检测Lewis细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达,免疫组化法和Western blotting检测DU-145细胞MMP-9、NF-κB、基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)、IκB-α蛋白表达。结果接种Lewis肺癌细胞后,蝎毒提取物组平均癌细胞肺转移灶数为3.2±1.2,而模型组为13.5±5.3,差异显著(P<0.01)。活体成像检测显示,接种DU-145细胞30 d后,对照组未见荧光团,模型组8只裸鼠中有6只肩胛骨、骨盆、肋骨及胫骨显示有大量荧光团存在,蝎毒提取物组仅有3只裸鼠出现明显荧光团。免疫组化法和Western blotting检测显示,与对照组相比,蝎毒提取物给药后DU-145细胞MMP-9、NF-κB蛋白表达下调(P<0.01),TIMP-1表达上调(P<0.01),免疫组化检测亦显示IκB-α蛋白表达上调(P<0.05)。结论蝎毒提取物抑制Lewis肺癌细胞肺转移和DU-145细胞骨转移,其作用是通过NF-κB和TIMP-1途径抑制MMP-9表达实现的。

蛇葡萄素钠协同卡铂对肺癌Lewis细胞增殖的抑制作用

目的：研究蛇葡萄素钠（AMP-Na）协同卡铂对肺癌Lewis细胞增殖的抑制作用。方法：以6.25、12.5、25、50、100μg/ml AMP-Na＋3.125、6.25、12.5、25、50μg/ml卡铂培养细胞4 h,测定细胞活力并计算抑制率与半数抑制浓度（IC50）。以12.5、25、50、100μg/ml AMP-Na＋12.5μg/ml卡铂培养细胞12 h,流式细胞仪检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）表达。结果：系列质量浓度AMP-Na与系列质量浓度卡铂联用后对细胞生长有明显抑制作用,随质量浓度的升高,卡铂对Lewis细胞的IC50逐渐降低;AMP-Na质量浓度范围在6.25~50μg/ml时,与3.125~25μg/ml卡铂联用后,对Lewis细胞增殖的协同抑制作用最强。AMP-Na与卡铂联合培养细胞12 h后,细胞Caspase-3表达明显增强。结论：AMP-Na与卡铂合用对Lewis细胞增殖具有协同抑制效应,其机制可能与AMP-Na激活细胞Caspase-3,从而诱导细胞凋亡有关。

回药爱康方含药血清抑制Lewis肺癌细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的观察回药爱康方(HAKF)含药血清对Lewis肺癌细胞(LLC)增殖抑制作用,探讨回药爱康方抗Lewis肺癌的作用机制。方法采用血清药理学方法,用SD大鼠分为健康对照(NS)组,爱康方低剂量(AKL)组,爱康方中剂量(AKM)组,爱康方高剂量(AKH)组,环磷酰胺(CTX)组,爱康方低剂量联合环磷酰胺(AKL+CTX)组,爱康方中剂量联合环磷酰胺(AKM+CTX)组,爱康方高剂量联合环磷酰胺(AKH+CTX)组,共8组,制备含药血清,用各组含药血清培养LLC细胞,采用MTT法测各组血清对LLC增殖的影响,流式细胞(FCM)Annen V-FITC/PI标记法检测细胞凋亡率。结果回药爱康方含药血清能够抑制LLC增殖,且呈剂量和时间依赖性,爱康方高剂量组20%含药血清作用72 h抑制率达26.92%,高剂量联合CTX抑制率最高达54.71%;与对照组比较,各组血清均具诱导LLC细胞凋亡的作用,并与剂量和时间呈正相关,爱康方高剂量联合CTX作用最强,作用72 h时,细胞凋亡率下降,而坏死率升高。结论回药爱康方可抑制Lewis肺癌细胞增殖,并诱导其凋亡,爱康方可以增强环磷酰胺对细胞的抑制作用。

蛇葡萄素钠体外协同卡铂抗小鼠肺癌Lewis细胞的作用

目的:研究蛇葡萄素钠单用及与卡铂联合用药对小鼠肺癌Lewis细胞的体外抗肿瘤作用,初步探讨蛇葡萄素钠抑瘤作用机制。方法:应用MTT比色法测定蛇葡萄素钠单用及与卡铂联合用药对小鼠肺癌Lewis细胞增殖的抑制作用;使用流式细胞仪检测蛇葡萄素钠单用及与卡铂合用诱导细胞凋亡作用。结果:MTT实验结果表明,蛇葡萄素钠单用在12.5、25、50、100μg/ml浓度范围内对小鼠肺癌Lewis细胞的增殖具有浓度依赖性的抑制作用;6.25~50μg/ml的蛇葡萄素钠与卡铂3.12~25μg/ml联合用药对卡铂抑制Lewis细胞的增殖作用具有协同效应;流式细胞仪结果表明,蛇葡萄素钠25、50、100μg/ml与卡铂25μg/ml联合应用时,凋亡率显著增高。结论:蛇葡萄素钠单用在一定的浓度范围内对Lewis细胞增殖具有浓度依赖性抑制作用,蛇葡萄素钠与卡铂合用可以增强卡铂的活性,有协同抑制作用,蛇葡萄素钠可能是通过诱导凋亡而发挥其抗肿瘤作用。

节律基因mPER1对小鼠Lewis肺癌细胞迁移的影响

目的通过节律基因mPeriod1(mPer1)过表达,研究mPer1对小鼠Lewis肺癌细胞迁移的影响。方法采用脂质体介导法将mPer1基因转染入Lewis细胞。通过RT-PCR检测mPer1在Lewis细胞中的表达;采用Chemico公司QCM(tm)24-Well Colorimetric Cell Migration Assay检测细胞迁移的变化。结果与pcDNA3.1空质粒相比,pcDNA3.1-mPer1转染组mPer1表达增加,其迁移率与对照组比较明显下降。结论节律基因mPer1过表达能够抑制Lewis肺癌细胞的迁移。

^(60)Coγ射线诱发Lewis肺癌细胞Fas基因蛋白表达及其与细胞凋亡的关系

目的:研究６０Ｃｏ γ射线对Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞Ｆａｓ基因蛋白表达的影响及其诱发细胞凋亡的分子机制。方法:采用免疫电镜技术,对受照Ｌｅｗｉｓ细胞的小鼠移植瘤组织进行Ｆａｓ基因蛋白的超微结构定位观察。结果:受照Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞的小鼠移植瘤组织,癌细胞呈Ｆａｓ基因蛋白阳性表达,阳性产物分布于细胞膜表面;而未受照射的对照组Ｌｅｗｉｓ细胞的移植瘤组织,癌细胞Ｆａｓ蛋白全部阴性。结论:γ射线诱发Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞发生凋亡主要依赖于Ｆａｓ蛋白表达的上调及Ｆａｓ介导的凋亡信号传导途径的激活。

爱康方含药血清对小鼠Lewis细胞PI3K和AKT mRNA水平的影响研究

目的观察爱康方含药血清对小鼠Lewis细胞磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶(AKT)mRNA水平的影响。方法参照课题组前期制备含药血清方法,将SD大鼠分为生理盐水对照组(NS组),爱康方低、中、高剂量组,环磷酰胺组(CTX组),爱康方低、中、高剂量联合CTX组(低剂量+CTX组、中剂量+CTX组、高剂量+CTX组),每组10只,制备含药血清。20%最佳含药血清干预细胞,实验组为低、中、高剂量组,CTX组,低、中、高剂量+CTX组,对照组为NS组,空白对照组只加DEME培养基,干预24、48 h后采用RT-qPCR法检测PI3K、AKT mRNA水平。结果24 h时各实验组PI3K mRNA水平明显降低,低剂量+CTX组最为明显。48 h时NS组PI3K mRNA水平高于空白对照组,低剂量、CTX组仅稍低于空白对照组,余实验组PI3K mRNA水平明显降低。24 h时除低剂量组,各实验组AKT mRNA水平均明显低于空白对照组,48 h各实验组AKT mRNA水平亦降低。结论爱康方使Lewis细胞PI3K、AKT mRNA水平降低,且与CTX联合发挥协同作用,推测该作用可能与PI3K/AKT信号通路有关。

黄芪多糖联合顺铂对小鼠Lewis肺癌细胞肺转移的影响

目的观察黄芪多糖(APS)联合顺铂(DDP)对小鼠Lewis肺癌细胞肺转移、核因子(NF)-κB、P38、P53及Caspase-9表达的影响。方法将90只Lewis小鼠随机分为模型组、顺铂组(6mg/kg DDP)、APS组(50、100、200)mg/kg,联合用药组[1/2 DDP+APS,即:(3+25、3+50、3+100)mg/kg]。各组均于造模第2天起用药,APS每日1次,DDP每周1次,连续20d。观察肿瘤肺转移情况,采用Real-time PCR法和Western blotting法检测肿瘤组织中NF-κB、P38、P65蛋白和基因,并用免疫组织化学检测Caspase-9的表达。结果与模型组相比,各治疗组均可降低肺转移灶数目(P<0.05或P<0.01);除P38外,APS中、高剂量组可使小鼠Lewis肺癌组织中NF-κB p65、P53表达降低,Caspase-9表达增高;联合用药高剂量组作用则接近DDP组。结论 APS可抑制小鼠Lewis肺癌细胞的转移,抑制NF-κB和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的激活,这可能是其抑制肿瘤转移的机制之一;APS与减半剂量的DDP铂类化疗药物联合使用时,作用增强,APS对DDP有增效减毒作用。

柴胡龙牡汤对小鼠Lewis肺癌细胞凋亡的影响及其机制的实验研究

目的:柴胡龙牡汤由张仲景《伤寒论》中柴胡加龙骨牡蛎汤加减而成。临床用于治疗非小细胞肺癌安全有效,在改善症状、稳定病灶、提高生活质量及延长生存期等方面均显示了一定的作用。其体外实验研究也已证实该方具有诱导人肺腺癌细胞凋亡及下调VEGF表达的作用。本实验旨在探析柴胡龙牡汤的体内抗肿瘤作用机理。方法:通过透射电镜下观察超微结构的变化,判断柴胡龙牡汤是否可诱导细胞凋亡,通过检测与凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的变化,以及瘤组织中肿瘤坏死因子(TNFα)的变化,探讨柴胡龙牡汤诱导Lewis肺癌细胞凋亡的分子作用机制。结果:1中药组镜下可见肿瘤细胞以凋亡变化为主;化疗组、综合组电镜下均可见到坏死细胞和典型凋亡细胞及凋亡小体。2模型组、化疗组TNFα表达呈阴性,染色结果均为(-);TNFα在中药组和综合组中均有表达,但二者相比较无显著性差异(P﹥0.05),阳性细胞数均在30%左右,TNFα染色结果为(++)。3中药组、化疗组和综合组,都可不同程度的降低Bcl-2蛋白的表达,并使Bax及Caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2/Bax的比值降低,与模型组相比有显著、极显著性差异(P﹤0.05,P﹤0.01)。结论:1柴胡龙牡汤可诱导Lewis肺癌细胞凋亡,对顺铂化疗具有协同增效作用;2柴胡龙牡汤可诱导TNFα产生,下调Bcl-2蛋白的表达,明显增加Bax及Caspase-3的表达,从而使Bcl-2/Bax的比值降低,最终导致细胞凋亡。