巴豆生物碱对Lewis小鼠肺腺癌细胞生长和凋亡的影响及机制研究

目的通过研究巴豆生物碱(CA)对Lewis小鼠肺腺癌细胞生长及对凋亡相关蛋白(Survivin、Caspase-3、Bax)、YAP蛋白的调控作用,探讨CA对肺腺癌细胞生长和凋亡的影响及其具体的作用机制。方法培养Lewis鼠源性肺腺癌细胞(LLC),复制小鼠皮下成瘤模型,分为5组,每组10只,分别为对照组、低剂量CA组、中剂量CA组、高剂量CA组及顺铂组。皮下成瘤1周后给予药物干预,第22天对5组小鼠取瘤称重,计算抑瘤率并通过光学显微镜观察各组病理形态学的变化,判断CA对瘤体生长的抑制作用;Western blotting检测Survivin、Caspase-3、Bax及YAP蛋白相对表达量;qRT-PCR法检测Survivin、Caspase-3、Bax及YAP mRNA相对表达量。结果中剂量CA组和高剂量CA组小鼠的一般生存状态较对照组、低剂量CA组及顺铂组好。低剂量CA组、中剂量CA组、高剂量CA组及顺铂组肿瘤细胞出现不同程度细胞凋亡现象,对照组肿瘤细胞多为坏死细胞。低剂量CA组、中剂量CA组、高剂量CA组及顺铂组的抑瘤率分别是13.91%、14.83%、27.84%和68.45%,4组抑瘤率比较,差异有统计学意义(P<0.05),各组抑瘤率依次升高,顺铂组肿瘤生长最慢。不同剂量CA组中Survivin mRNA相对表达量低于对照组(P<0.05),CA剂量越高,Survivin mRNA相对表达量越低;而不同剂量CA组中Caspase-3和Bax mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05),CA剂量越高,Caspase-3和Bax mRNA的相对表达量越高;各组YAP mRNA的相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论CA对Lewis肺腺癌小鼠瘤体生长有抑制作用,并引起细胞凋亡。CA通过促进Bax和Caspase-3表达及抑制Survivin表达来调控Lewis小鼠肺腺癌细胞凋亡;其调控机制可能是通过下调Survivin的表达,从而使得Survivin对Caspase-3的抑制作用减弱,而Bax上调可进一步激活Caspase-3,从而诱导Caspase级联效应促进细胞凋亡,为肺腺癌治疗提供了新思路。

骨髓嵌合促进Lewis肺腺癌细胞体内生长及转移的实验研究

目的研究骨髓移植对近交系C57BL/6(C57) 6～8周龄的野生雌性小鼠皮下接种Lewis肺腺癌细胞成瘤及转移能力的影响。方法采用随机数字表法抽取20只野生小鼠作为受体小鼠,通过8 Gy全身照射破坏受体小鼠骨髓造血系统,再通过尾静脉注射向受体小鼠移植正常小鼠的骨髓细胞,建立骨髓嵌合小鼠模型。随后将其分为对照B组和荷瘤组(每组10只),再使用随机数字表法取20只同批次未处理的野生小鼠分为对照A组和荷瘤组(每组10只)。分别向骨髓嵌合小鼠和野生小鼠背部皮下注射Lewis肺腺癌细胞获得皮下荷瘤模型,通过比较起瘤时间,肿瘤增长速度,离体瘤质量及肝、肺的转移情况,评价骨髓移植对C57BL/6小鼠皮下荷瘤模型的影响。结果皮下荷瘤后,骨髓嵌合小鼠较正常小鼠起瘤时间提早2 d,接种后第5天即可触及肿瘤;相同荷瘤时间,骨髓嵌合小鼠肿瘤体积增长更快,且离体瘤质量增加49. 27%(P <0. 01),并可观察到肺部有明显的肿瘤细胞转移。结论骨髓嵌合后C57小鼠相对正常C57小鼠更适于皮下荷瘤造模,其肿瘤生长更大,更容易发生转移。

p73基因对人肺腺癌细胞H1299化疗敏感性的影响

背景与目的:实验证明野生型p53基因能增强大多数非小细胞肺癌的化疗敏感性。p53基因的同源体p73与其在结构和功能上都具有高度的相似性。本研究拟探讨p73基因对人肺腺癌细胞株H1299化疗敏感性的影响。方法:通过脂质体介导将p73α基因导入人肺腺癌细胞株H1299,G418筛选获得稳定表达P73α的阳性细胞克隆。Westernblot检测转染细胞中P73α蛋白的表达;MTT法检测细胞存活率,观察转染细胞对阿霉素、顺铂的敏感性变化;采用流式细胞仪和TUNEL法检测.p73646化疗药诱导前后转染细胞凋亡的变化;克隆形成实验观察细胞生物学性状的变化。结果:转染p73α基因的H1299细胞可以稳定高表达P73α蛋白。MTT实验提示顺铂和阿霉素的IC50值分别减少了86.2%和99.2%,转染细胞在原本没有明显抑制和杀伤作用的药物浓度(1.25μmol/L的顺铂或0.05μmol/L的阿霉素)作用下生长明显受到抑制。流式细胞术显示p73α基因转染后顺铂诱导的细胞凋亡率从10.1%升高到38.4%(P<0.01),阿霉素诱导的细胞凋亡率从12.1%升高到49.3%(P<0.01)。克隆形成实验显示p73α基因转染能明显降低化疗后H1299细胞的克隆形成数(P<0.01),对顺铂和阿霉素的化疗增效倍数分别为1.8和2.6倍。结论:转染p73基因可以提高H1299细胞对阿霉素、顺铂等化疗药的敏感性。该作用可?

藏红花素逆转人肺腺癌细胞A549恶性生物表型的分子机制研究

目的目前已有研究表明藏红花素(Crocin)能抑制多种肿瘤生长,促进肿瘤细胞的凋亡。文中研究藏红花素对人肺腺癌细胞株A549恶性生物学表型的影响及其分子机制。方法体外培养人肺腺癌A549细胞,分别用不同浓度藏红花素(1.0、4.0、16.0 mg/ml)处理细胞,并将藏红花素与顺铂、培美曲塞(pemetrexed)单独及联合作用于A549细胞,用MTT法测定细胞增殖情况及肿瘤细胞对化疗药物的敏感性的影响,流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡变化,半定量RT-PCR方法检测凋亡相关分子p53、bax、bcl-2的mRNA表达。结果藏红花素对细胞增殖有显著抑制作用,且呈剂量依赖关系。藏红花素对顺铂及培美曲塞细胞毒作用有显著增敏作用。流式细胞仪检测显示:藏红花素作用48 h后,细胞的凋亡率随浓度而增加。藏红花素还可诱导细胞周期阻滞在G0/G1期,并表现出一定的浓度依赖关系。藏红花素联合化疗药物与化疗药单药相比可增加细胞的凋亡率(P<0.01),对细胞周期分布亦有影响,能够明显诱导细胞阻滞,藏红花素与顺铂合用可引起G0/G1期细胞增多(P<0.05),藏红花素与培美曲塞合用可引起S期细胞增多(P<0.05)。半定量RT-PCR结果显示藏红花素能分别显著上调肺腺癌细胞中p53 mRNA表达,下调bcl-2 mRNA表达(P<0.05),并呈现一定的剂量依赖性。而对bax mRNA表达则无显著影响(P>0.05)。结论藏红花素能显著抑制肺腺癌细胞增殖,并诱导细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡增加,且能增强肺腺癌细胞的化疗敏感性,其分子机制可能与抑癌基因p53表达上调及癌基因bcl-2表达下调相关。

低温热疗对肺腺癌细胞放射敏感性的影响

目的:研究低温热疗(≤42℃)对肺腺癌细胞株SPC A 1的放射增敏作用及其对生长周期的影响。 方法: 集落形成率实验观察低温热疗的放射增敏作用;流式细胞仪观察细胞生长周期的变化。 结果:单纯放射时细胞的 Do、Dq值分别为1.693、2.453Gy,放射合并41.5℃加热时Do、Dq值分别为1.390、1.426Gy,热增敏比为1.218。放 射及热放射后细胞周期出现了再分布。未处理组流式细胞仪检测到S期细胞比例为14.81%,照射6Gy后48、72h 分别为18.80%和31.91%;照射后立即41.5℃加热1h,48、72h的S期细胞分别为5.89%和9.08%。 结论:低 温热疗对肺腺癌细胞系有放射增敏作用,低温热疗能去除放射引起的细胞S期阻滞,其机制可能与加热抑制了肿 瘤细胞对放射所致亚致死损伤和潜在致死损伤的修复能力有关。

白细胞介素-18转导人肺腺癌细胞及其致瘤性的研究

目的 探讨白细胞介素 - 18(IL - 18)基因转导对肺癌细胞系 PG细胞肿瘤原性的影响。方法 将携带人白介素 - 18的质粒 pc DNA3.1- h IL- 18转染到肺癌细胞系 PG中 ,通过药物新霉素 (G- 4 18Sulfate)进行筛选 ,利用RT- PCR、EL ISA方法对 IL- 18的表达水平进行检测。同时对裸鼠行皮下致瘤试验 ,观察 IL- 18转染前后 PG细胞致瘤性的改变。结果 IL- 18基因成功的转导入 PG细胞中 ,且能持续表达 ,转入 IL- 18基因的 PG细胞上清液 IL-18的生物学活性为 (187.5± 12 .3) U/ ml,接种裸鼠后无肿瘤长出。结论 PG细胞转入 IL- 18基因后将失去致瘤性 ,提示 IL - 18基因转导的

鼻咽癌、肺腺癌和乳腺腺癌细胞XRCC4基因保守性研究

目的 研究不同人类肿瘤细胞 XRCC4基因的保守性 ,探讨其与肿瘤放射敏感性的关系。方法 常规集落形成方法测定人类肿瘤鼻咽鳞癌 (CNE)、肺腺癌 (SPC- A1)和乳腺腺癌 (MCF- 7)不同剂量照射后的细胞存活率 ,采用聚合酶链式反应和克隆技术测定三种细胞 XRCC4基因序列 ,分析它们的保守性变化和突变对基因产物亲疏水性的影响。结果 三种细胞存活参数比较存在较大差异 ,CNE细胞较 SPC- A1和 MCF- 7细胞显示出较高的放射敏感性。CNE、 SPC- A1和 MCF- 7细胞 XRCC4基因同源性分别为 :99.94 %、 99.97%和 99% ,存在包括碱基插入、缺失和颠换等突变形式。其中 ,CNE和 MCF- 7细胞 6 bp的 TTCTAG插入突变导致的氨基酸序列变化影响该基因产物的亲疏水结构。结论 XRCC4基因产物在非同源性末端连接途径中起重要的协调作用 ,CNE和 MCF- 7细胞该基因的同源性低于 SPC- A1细胞 ,两者的 6 bp插入突变是影响肿瘤细胞 DNA双链断裂损伤修复能力和肿瘤放射敏感性的因素之一。

胰岛素对人肺腺癌细胞A549的化疗增敏作用

目的探讨用胰岛素提高人肺腺癌细胞A549生长代谢水平后对其化疗敏感性的影响。方法采用MTT法检测顺铂对A549细胞抑制率达30%时的药物浓度(IC30),检测胰岛素促进细胞增殖的最佳作用浓度和最佳作用时间,并检测不同浓度及不同时间胰岛素作用后对A549细胞化疗敏感性的影响。用流式细胞仪测定胰岛素对A549细胞周期的影响。结果顺铂的IC30约为36.87μg/ml;胰岛素促进细胞增殖的最佳作用浓度为4.0～16mU/ml,取8mU/ml为终浓度时,胰岛素促进细胞增殖的最佳作用时间为8～16h;胰岛素(2.0～16.0mU/ml,8～16h)可增强顺铂(36.87μg/ml)的细胞毒作用(P<0.01)。流式细胞仪分析显示,胰岛素(8mU/ml)作用4～12h,S期细胞随作用时间延长而逐渐增多,但作用16h后S期细胞数目又逐渐接近于对照组水平。结论胰岛素可通过提高人肺腺癌细胞A549的生长代谢水平而提高顺铂对该细胞的抑制率,且该作用呈时间和浓度依赖性。

胰岛素对人肺腺癌细胞A549化疗增敏作用机制的研究

目的探讨胰岛素对化疗药物顺铂(DDP)敏感性的影响和机制。方法选用人肺腺癌细胞A549为靶细胞,采用MTT法检测顺铂对A549细胞抑制率达30%时的药物浓度(IC30),检测胰岛素不同浓度或作用不同时间后,对A549细胞化疗敏感性的影响。流式细胞仪检测不同加药处理组的周期时相变化情况。Western Blot印迹方法检测不同加药处理组的细胞周期蛋白CyclinA和CyclinD1的表达情况。结果顺铂的IC30约为36.87μg/mL;胰岛素(2.0～16.0mU/mL;8h～16h)可增强顺铂(36.87μg/mL)的细胞毒作用(P<0.01)。流式分析显示DDP能引起A549的S期细胞阻滞,胰岛素可增加DDP对A549的S期细胞阻滞。Western Blot印迹方法检测显示单用顺铂组较对照组比较,CyclinA的表达明显增强,CyclinD1的表达变化不明显。胰岛素联合顺铂组较单用顺铂组比较,CyclinA、CyclinD1的表达变化均不明显。结论胰岛素具有化疗增效作用,胰岛素用药的时机选择是实现增效的关键。其机制可能为:胰岛素能够使A549的S期细胞比例增加,与DDP有协同作用。顺铂对人肺腺癌细胞株A549细胞周期的影响表现为S期的阻滞,CyclinA的表达增强在其作用机制上起着重要的作用。

表皮生长因子受体单克隆抗体对辐射诱导肺腺癌细胞SPC-A-1的增敏作用

目的:探讨表皮生长因子受体单克隆抗体(C225)作为靶向治疗药物联合放射治疗对肺腺癌细胞系(SPC-A-1)的增敏作用,为临床综合治疗非小细胞肺癌提供理论依据。方法:SPC-A-1细胞体外传代培养6代以上,取对数生长期细胞进行实验。SPC-A-1细胞分为对照组(PBS)、照射组(4 Gy)、C225组(100 nmol.L-1)和照射+C225组(4Gy+100 nmol.L-1),Hoechst 33258染色后采用荧光显微镜观察细胞凋亡情况。SPC-A-1细胞分别给予0、2、4和8 Gy 6-MV X射线照射后继续培养72 h,收集细胞,分为照射组和实验组(照射+C225组),用流式细胞仪检测细胞凋亡率。SPC-A-1细胞分为对照组(PBS)、C225组(100 nmol.L-1)、照射组(8 Gy)和照射+C225组(8 Gy+100 nmol.L-1),作用48 h后,采用流式细胞仪检测细胞周期。结果:Hoechst33258染色后,照射+C225组凋亡细胞数明显高于照射组和C225组;细胞凋亡实验,实验组细胞凋亡率明显高于相应剂量照射组(P<0.05)。细胞周期检测,与对照组比较,C225组G0+G1期细胞增加(P<0.05),照射组G2+M期细胞增加(P<0.05),而照射+C225组G0+G1和G2+M期细胞均增加(P<0.05);与对照组比较,C225组、照射组及照射+C225组S期细胞均下降(P<0.05)。结论:C225对SPC-A-1细胞系有放射增敏作用,其机制可能与诱导细胞凋亡和细胞周期G0+G1期阻滞有关。

转染白喉毒素基因对人肺腺癌细胞的影响

目的 探讨白喉毒素A基因对人肺腺癌细胞 (A5 4 9)的影响。方法 对转染白喉毒素A基因的人肺腺癌细胞 (A5 4 9/DTA) ,转空载体的人肺腺癌细胞 (A5 4 9/DTA-)野生型A5 4 9细胞 ,采用MTT法测定四环素作用 72h后的细胞存活率。动物实验 :12只裸鼠随机分为转基因组、空载体组和对照组 ,每组 4只 ,将 1.2× 10 7A5 4 9/DTA细胞 ,A5 4 9/DTA-细胞及野生型A5 4 9细胞分别接种于相应的裸鼠皮下 ,给裸鼠饮含四环素(1μg/ml)的水 ,成瘤后 ,每周 2次测量瘤体大小 ,计算瘤体重量。 结果 A5 4 9/DTA细胞存活率较A5 4 9/DTA-细胞 ,A5 4 9细胞存活率明显下降 (P <0 .0 1) ,而A5 4 9/DTA-细胞与A5 4 9细胞存活率无差别 (P >0 .0 5 )。空载体组与对照组的裸鼠全部长出肿瘤 ,且肿瘤生长迅速 ,而转基因组有 1只裸鼠未长出肿瘤 ,肿瘤生长缓慢 ,前者瘤体的重量是后者的 3倍。结论 体外转染白喉毒素A基因可杀伤人肺腺癌细胞并降低人肺腺癌细胞的致瘤性。

肺腺癌细胞株SPC-A-1细胞存活曲线参数的测定

目的:测定肺腺癌细胞株SPC-A-1细胞存活曲线参数。方法:将细胞分为单纯放射组和放射合并加热组,单纯放射组分别给予高能X线2、4、6、8Gy单剂量照射,放射合并加热组除给予相同剂量照射外,还于照射结束后立即加热,41.5℃,1h。集落形成率实验检测两组细胞在不同情况下的细胞存活分数,分别根据多靶单击模型和线形二次模型拟合绘制细胞存活曲线,求出D0、Dq及α/β比等细胞存活曲线参数,并获得照射2Gy时的存活分数SF2。结果:多靶单击模型中,单纯放射组细胞的D0、Dq值分别为1.693、2.453Gy,放射+加热组D0、Dq值分别为1.390、1.426Gy,SF2值由0.793降为0.532;线形二次模型中,细胞的α/β值由0.992Gy增至7.725Gy,SF2值则由0.743降为0.459。结论:尽管加热可以提高肺腺癌细胞株SPC鄄A鄄1的放射敏感性,但D0及SF2的值表明其对放射仍较抗拒。

Lewis全细胞肿瘤疫苗防治C57BL/6小鼠Lewis肺癌的实验研究

目的探讨Lewis全细胞肿瘤疫苗对小鼠Lewis肺癌的防治作用。方法用Lewis全肿瘤疫苗免疫C57小鼠4次,其中首次免疫用含弗氏佐剂油剂疫苗,第4次免疫的同时在小鼠右腋下接种Lewis肺癌细胞,定期观察小鼠成瘤情况及小鼠免疫状态变化。用流式细胞术检测疫苗组和对照组小鼠外周血CD4+T细胞,CD8+T细胞及CD19+B细胞百分比,以及CD4/CD8的变化。结果疫苗组与对照组小鼠成瘤率、成瘤时间、肿瘤大小差异均无显著性;疫苗组与对照组相比,其外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的百分比差异无显著性,CD4/CD8比值的差异也无显著性,疫苗组外周血CD19+B淋巴细胞百分比略高于对照组,差异有显著性(P=0.014)。结论用Lewis肿瘤全细胞疫苗不能提高C57BL/6小鼠的T淋巴细胞免疫功能,可以提高其B淋巴细胞免疫,但不能使小鼠获得有效的免疫保护。

中药金安粉针剂对人高、低转移性肺癌细胞系作用的异质性研究

目的:研究中药金安粉针剂对体外培养人肺高转移性巨细胞癌系(PG)和人低转移性肺腺癌细胞系(PAa)作用的异质性及其机制. 方法:体外培养PG、PAa细胞,分为三组:对照组(C)、顺铂组(DDP)和金安组(JA).采用四唑盐(MTT)法测定金安对PG、PAa的杀伤作用;提取了肿瘤细胞的DNA,电泳检测是否有DNA Ladder出现,以及用活细胞双荧光法观察肿瘤细胞的核形变化和应用TUNEL法检测了两种细胞的凋亡指数,此外用流式细胞仪检测了金安对PG、PAa细胞周期的影响以及应用Annexin V染色检测了两种细胞的早、晚期凋亡率.

人肺癌细胞γ-干扰素基因的转染及特性分析

目的 :建立转基因 A5 49细胞株 ,从特性上进行分析 ,探讨其作为抗肿瘤瘤苗的可能性。方法 :将 p L XSN质粒与人 IFN-γ基因体外重组 ,转染入人肺腺癌细胞株 A5 49中 ,经筛选获得稳定表达γ-干扰素的 A5 49- IFN-γ细胞株 ,对其生长特性、细胞表面 MHC分子表达变化、IFN-γ的分泌量及致瘤性等方面进行了探讨。结果 :转基因细胞株与原细胞株相比较 ,生长状态没有明显的变化 ,转基因细胞株可稳定表达并向细胞外分泌γ-干扰素 ;而且其细胞表面 MHC- 和 MHC- 分子表达明显增加 ,提示其免疫原性增强 ;裸鼠实验表明其致瘤性下降。结论 :该转基因细胞株有可能成为治疗肺癌的转基因瘤苗。

miR-148a抑制肺腺癌细胞的迁移和侵袭

肺癌是中国发病率最高的恶性肿瘤[1],由于其早期症状隐匿,手术后易复发且放化疗敏感性低等生物学特点,肺癌已成为危害中国人民群众身体健康的重大公共卫生问题[2]。肺癌病理类型复杂,其中肺腺癌（lung adenocarcinoma）是女性和非吸烟者较为常见且恶性程度较高的病理类型之一[3],

气功“外气”对人体肺腺癌细胞(SPC-A_1)的影响

气功,可以应用于肺癌的治疗。《气功“外气”对人体肺腺癌细胞(SPC-A_1)的影响》就是这方面的研究结果。

一种改良的间歇性低氧细胞模型方法

目的:研制细胞氧舱,建立间歇性低氧(intermittent hypoxia,IH)细胞模型并进行验证。方法:定制细胞实验舱和空气模拟对照舱,根据氧分压-时间曲线设计间歇低氧模式。将人肺腺癌细胞A549随机分为正常对照(Con)组、间歇低氧6 h(6IH)组、间歇低氧9 h(9IH)组、空气模拟对照6 h(6AC)组、空气模拟对照9 h(9AC)组、持续低氧4 h(4SH)组、持续低氧6 h(6SH)组。暴露结束后光镜下观察细胞形态改变,real-time PCR、免疫组化法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的mRNA和蛋白表达变化。结果:该模型间歇低氧模式为5%O_260 min-20%O_230 min,6个循环。与Con组比较,6AC、9AC组为原本细胞形态,6IH、9IH和6SH组部分细胞出现突起、变圆,胞质中出现较多黑色颗粒,细胞边界模糊,而4SH组未见明显异常。与6IH组比较,9IH组HIF-1α的mRNA和蛋白表达量明显增加(P<0.05);6IH和9IH组HIF-1α的mRNA和蛋白分别高于4SH和6SH组(P<0.05);6AC、9AC组与Con组比较差异不显著。结论:5%O_260 min-20%O_230 min的间歇性低氧-复氧细胞模式能模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征病理生理过程,是研究该疾病较理想的细胞模型。