ABT-263增敏Lexatumumab诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的研究

目的:研究Bcl-2抑制剂对于死亡受体单克隆抗体Lexatumumab激活诱导三阴性乳腺癌细胞凋亡的增敏效果。方法:体外培养ER、PR和HER-2三阴性细胞株。分为对照组、ABT-263处理组、Lexatumumab处理组、ABT-263+Lexatumumab处理组。用亚致死剂量的ABT-263,或者Lexatumumab,或者二者同时处理细胞,荧光显微镜观察对照组和处理组细胞内细胞核凋亡形态变化情况。然后凋亡细胞计数,统计凋亡率。免疫印迹(Western blotting)法检测细胞凋亡标志性蛋白Caspase 3和PARP切割条带在各组中的表达,以评估Bcl-2抑制作用对死亡受体信号通路诱导细胞凋亡的影响。结果:在荧光显微镜下,可以观察到ABT-263和Lexatumumab单独处理细胞不能够诱导三阴性乳腺癌细胞核出现固缩凝聚现象。抑制剂ABT-263能够显著逆转Lexatumumab诱导的乳腺癌细胞凋亡。结论:Bcl-2抑制剂ABT-263能够增敏单克隆抗体Lexatumumab诱导三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞凋亡。ABT-263和Lexatumumab联合诱导的凋亡作用具有Caspase依赖性。

YM155增敏Lexatumumab诱导肝癌细胞株LH86凋亡的实验研究

目的探讨小分子化合物YM155增敏死亡受体单克隆抗体Lexatumumab激活诱导肝癌细胞株LH86凋亡的效果及分子机制。方法体外培养肝癌LH86细胞株,分为对照组(DMSO)、YM155处理组(1μmol/L)、Lexatumumab处理组(1μg/ml)和YM155(1μmol/L)联合Lexatumumab(1μg/ml)组。荧光显微镜观察上述各组细胞核凋亡形态变化,计数凋亡细胞,计算凋亡率。Western blotting检测各组中细胞凋亡标志性蛋白caspase-3和Bax的表达。结果荧光显微镜下,1μmol/L YM155或1μg/ml Lexatumumab单独处理均未能诱导LH86细胞出现胞核固缩凝聚或染色质断裂,而1μmol/L YM155预处理细胞30 min能够逆转Lexatumumab诱导的肝癌细胞核固缩凝聚和染色质断裂。YM155和Lexatumumab联合处理12 h,细胞凋亡率达60%,高于其余3组(P<0.05)。Western blotting检测显示,仅YM155联合Lexatumumab组出现明显的caspase-3蛋白切割条带;YM155和Lexatumumab单独处理均未能诱导Bax构象变化;经1μmol/L YM155预处理后,Lexatumumab能够有效诱导Bax构象变化激活。结论 YM155能够增敏单克隆抗体Lexatumumab诱导肝癌细胞株LH86细胞凋亡,YM155和Lexatumumab联合处理诱导凋亡可能与Bax构象变化激活相关。

Iressa和Gleevec增敏Lexatumumab诱导肝癌细胞凋亡的研究

[目的]研究酪氨酸激酶抑制剂Gleevec或Iressa增敏DR5激动剂Lexatumumab诱导肝癌细胞凋亡的效果及机制。[方法]体外培养肝癌LH86细胞株。分为对照组、TKI处理组、Lexatumumab处理组、TKI+Lexatumumab处理组。用亚致死剂量的TKI或者Lexatumumab或者TKI+Lexatumumab同时处理细胞,通过荧光显微镜观察对照组和处理组细胞内细胞核凋亡形态变化情况。然后计数凋亡细胞,统计凋亡率。免疫印迹(Western blot)方法检测细胞凋亡标志性蛋白Caspase 3切割条带在各组中的表达,促凋亡蛋白Bim、Bax以及抗凋亡蛋白在各处理组中的表达,以评估TK抑制作用对死亡受体信号通路诱导细胞凋亡的影响。[结果 ]在荧光显微镜下,可以观察到Gleevec、Iressa或Lexatumumab单独处理细胞不能够诱导LH86肝癌细胞核出现固缩凝聚现象。抑制剂Gleevec或Iressa与Lexatumumab联合应用能够显著逆转诱导的肝癌细胞凋亡(Gleevec和Lexatumumab诱导凋亡率:39.23%,P<0.001;Iressa和Lexatumumab诱导凋亡率:37.5%,P<0.0001)。TKI和Lexatumumab诱导的细胞凋亡为Caspase依赖性。TKI和Lexatumumab诱导的细胞凋亡特异性诱导Bcl-2家族蛋白Bim上调。对Bax和Bcl-xl没有影响。[结论]肝癌细胞对Gleevec/Iressa或Lexatumumab单一制剂具有凋亡抗性。酪氨酸激酶抑制剂均能够增敏Lexatumumab诱导的细胞凋亡。这种联合诱导的细胞凋亡作用具有Caspase依赖性。TKI增敏的死亡受体介导的凋亡可能与促凋亡蛋白Bim上调有关。