基于LiCl法优化酿酒葡萄叶片的RNA提取

为获得纯度高、质量好的酿酒葡萄植株叶片RNA以用于荧光实时定量分析,为后续以酿酒葡萄叶片RNA为材料研究相关转录水平的调控提供技术保障,以经典酿酒葡萄赤霞珠叶片为试验材料,比较分析了重蒸酚法、Trizol法、改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和LiCl法(基于改良的SDS法)4种方法对酿酒葡萄叶片RNA提取的影响。结果表明,重蒸酚法提取RNA浓度较低,完整性较差,存在部分降解;Trizol法提取的RNA则有部分DNA污染;改良CTAB法提取浓度较高,但蛋白和DNA污染严重;LiCl法提取结果显示,28S的条带亮度是18S的2倍,条带无拖尾,完整性较好,存在DNA污染和少量的蛋白污染。进一步在LiCl法基础上利用醋酸钠、DNAase消化、苯酚抽提法进一步优化,并采用荧光实时定量验证,结果表明,醋酸钠的加入RNA质量无明显改善;然而,经氯仿和水饱和酚(体积比1∶1)抽提2次,氯仿抽提1次,氯仿和水饱和酚(体积比1∶1)抽提1次,并经DNAase进行消化,最终提取出质量浓度为173.611μg/mL、A_(260/280)为1.803纯度高、完整性较好且无蛋白和DNA污染的葡萄叶片总RNA;经实时荧光定量PCR进一步验证,该方法提取的RNA经反转录后获得较好的扩增曲线以及融解曲线,并能够对相关基因进行定量分析。

山药组织总RNA提取方法的比较与分析

采用异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法、Trizol法和CTAB-LiCl法等3种方法,分别对山药叶片和块茎进行总RNA提取效果进行了比较。结果表明,Trizol法难以提取RNA,异硫氰酸胍-巯基乙醇联合变性法提取RNA效果不理想,存在DNA污染,这2种方法不适合于富含多糖类物质的山药组织总RNA的提取;CTAB-LiCl法提取叶片和块茎组织总RNA质量高、完整性好、成功率高,可作为山药类植物总RNA提取的首选方法。

半夏叶片总RNA四种提取方法及效果的比较

目的 针对三叶半夏成熟叶片化学成分复杂，富含多糖、酚类及其他多种化学物质的特点，选择优化一种简便、经济、高效的半夏成熟叶片高质量总RNA提取方法。方法 用4种不同的RNA抽提方法如异硫氰酸胍法、皂土法、CTAB—LiCl法和改进的SDS／酚法提取总RNA，通过电泳、紫外分光光度计检测以及RT-PCR验证等对提取结果进行分析比较。结果 4种方法均能从半夏成熟叶片中提取到总RNA。其中皂土法的提取过程只需3～4h，是其他3种提取方法所用时间的一半。提取1g叶片的成本只有其他3种方法的1／13～1／14。此法提取的总RNA18S、28S带型清晰无弥散，完整性好，无严重的蛋白质和其他杂质污染，A260/A280为1．8～2．O，A260／A230大于2．O，且总RNA的产率高，为365．744μg／g鲜重，提取的总RNA适用于RT-PCR试验。结论 皂土法提取的RNA完全适用于DDRT-PCR、Northern blotting、cDNA文库构建等分子生物学研究，是一种快速、经济，适于抽提半夏总RNA的好方法。

嗜酸乳杆菌表层蛋白提取方法及影响因素的研究

对嗜酸乳杆菌S层蛋白的提取方法进行了改进.用酸性5mol/LLiCl法,中性5mol/LLiCl法和8mol/L尿素法提取嗜酸乳杆菌的表层蛋白,考马斯亮兰法测蛋白浓度,进行常规SDS-PAGE,用Gel-Pro软件进行数据分析,得出其中酸性5mol/LLiCl法提取表层蛋白百分含量最多.分析影响提取条件的因素,设置0、4、室温(25℃)3个温度梯度和10、15、20、25、30min5个时间梯度,进行常规SDS-PAGE,检测提取表层蛋白的效果.Sephadex G-100柱分离中性5mol/LLiCl法和8mol/L尿素法提取嗜酸乳杆菌的表层蛋白获得SA蛋白.酸性5mol/LLiCl法可用于分析各种表层蛋白;中性5mol/LLiCl法和8mol/L尿素法用于提取43kDa的SA蛋白.25℃处理15min得到最大量的表层蛋白.

从茶树种胚中提取总RNA方法的研究

茶树种胚中富含多糖和多酚类化合物,这增加了总RNA的提取难度。试验以茶树种胚为研究对象,通过对几种提取总RNA方法的比较与分析,认为用改进的CTAB-LiCl法提取茶树种胚总RNA的产率较高,质量好,可直接用于cDNA的合成、cDNA-AFLP分析等分子生物学实验操作。

高效海藻DNA提取方法研究

简单、高效的抽提DNA是进行分子生物学研究的基础。选取三种不同海藻纲中的条斑紫菜、条浒苔、钝顶螺旋藻为材料,通过采用改良的CTAB法、LiCl法及试剂盒法抽提基因组DNA并进行比较,以找出适用于各种藻类DNA提取的快速有效方法。结果表明适当提高裂解液与样品比能有效降低材料中多糖与蛋白质、酚类等杂质,提高DNA纯度和得率。经过修改后,三种方法都能有效抽提DNA,其中试剂盒法省时,所得到的DNA纯度最高,但得率较低且成本高。CTAB法与LiCl法也均能得到高质量的DNA,但LiCl法相对而言更简捷有效。此外,抽提前的材料预处理对DNA质量有明显影响。

芳纶1313/芳纶1414纤维混纺织物定量化学分析方法探讨

为了准确、快速、稳定地定量分析芳纶1313与芳纶1414纤维混纺织物,采用正交试验法对LiCl/DMF(N,N-二甲基甲酰胺)法定量分析其混纺织物的试验环境进行了优选方案的设计、分析、选择与验证。该试验结果表明,芳纶1313与芳纶1414纤维混纺织物可采用4.0%的LiCl/DMF(N,N-二曱基曱酰胺)溶液在90℃恒温水浴中振荡溶解60min的方法进行定量分析,LiCl/DMF(N,N-二曱基甲酰胺)溶液对不溶纤维(芳纶1414)的质量修正系数(d)为1.00。该试验表明,采用4.0%的LiCl/DMF(N,N-二甲基甲酰胺)法定量分析芳纶1313/芳纶1414纤维混纺织物有很好的准确性和稳定性。