小分子靶向肽与力达霉素辅基蛋白偶联方法研究

目的:建立小分子靶向肽(RGD)_2C肽同时与力达霉素辅基蛋白氨基和羧基联接的方法。方法:先用交联剂SPDP与力达霉素辅基蛋白氨基端氨基反应,再用交联剂HPDP与力达霉素羧基在交联剂EDC存在时反应,最后将联接有SPDP与HPDP的力达霉素辅基蛋白与(RGD)_2C肽反应。上述三个过程分别用Sephadex G15葡聚糖凝胶柱纯化以除去小分子物质。以基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱检测联接结果。结果:在本实验条件下,小分子靶向肽(RGD)_2C肽同时与力达霉素辅基蛋白氨基与羧基成功联接,总的联接比为1:1和2:1。结论:采用交联剂SPDP和HPDP,可使小分子靶向肽同时与力达霉素氨基和羧基成功联接。

靶向CD123的重组白细胞介素-3-力达霉素融合蛋白对白血病M07e细胞的杀伤机制

目的 研究白细胞介素-3-力达霉素（IL-3-LDM）融合蛋白靶向杀伤CD＋123 肿瘤细胞的作用机制。方法 用CCK-8检测IL-3-LDM融合蛋白靶向杀伤人类原巨核细胞白血病MO7e细胞的作用，用IC20浓度的IL-3-LDM及LDM分别与MO7e靶细胞培养后，利用AnnexinV-FITC及碘化丙啶（PI）染色经流式细胞分选术检测分析细胞凋亡率和周期分布变化。结果 LDM、IL-3-LDM对MO7e细胞的IC50分别为116、50 pmol／L。经IC20浓度的IL-3-LDM（12 pmol／L）融合蛋白与LDM（30 pmol／L）分别处理MO7e细胞后，在24、48、72 h分别检测到细胞凋亡率呈逐渐上升趋势（IL-3-LDM组分别为26.1 %、59.3 %和62.1 %，LDM组分别为34.4 %、43.3 %和55.2 %），且细胞在处理48和72 h后出现明显的G2／M期阻滞现象，与没有靶向的LDM药物作用机制一致。结论 IL-3-LDM融合蛋白作用机制与LDM一致，通过引起细胞G2／M期阻滞导致细胞凋亡进而死亡，证明IL-3靶向作用及其携带的高效药物LDM杀伤作用的有效性。

力达霉素联合利妥昔单抗对人B细胞淋巴瘤的治疗作用

研究力达霉素与利妥昔单抗联合抗人B细胞淋巴瘤的作用和机制。采用MTS法检测细胞的增殖抑制率,采用Annexin V-FITC/PI法进行细胞凋亡检测,Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白的表达量变化,最后用人B细胞淋巴瘤裸鼠模型验证该联合方案对淋巴瘤的体内抑制作用。结果表明,利妥昔单抗与力达霉素联合效果显著,增殖抑制作用和细胞凋亡比率显著多于单独用药组,信号通路分析表明凋亡相关蛋白表达升高,凋亡抑制蛋白表达下降。联合用药组荷瘤小鼠生存时间明显高于对照组和单独用药组,体内脾脏转移程度低于对照组和单独用药组。研究表明力达霉素与利妥昔单抗对人B细胞淋巴瘤的体内、体外增殖有协同抑制作用,这种联合协同机制可能与增加肿瘤细胞的凋亡有关。