猪急性腹泻综合征冠状病毒S蛋白多克隆抗体的制备及在检测该病毒感染中的应用

为制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)纤突蛋白(S)的多克隆抗体(PAb),本研究经PCR扩增SADS-Co V S蛋白S1亚基C端结构域(S1-CTD)基因片段(384 bp),并将其克隆至原核表达载体p GEX-6p-1中,构建重组质粒p GEX-6p-1-S1-CTD,经双酶切和测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导表达,通过western blot鉴定重组S1-CTD蛋白(rS1-CTD)的表达及反应原性。结果显示,r S1-CTD以包涵体的形式表达,在40 ku处出现特异性条带。诱导表达后的r S1-CTD经不同浓度尿素重悬并超声离心,SDS-PAGE检测后切胶纯化,得到纯化的重组蛋白。利用BCA试剂盒测得蛋白的浓度为33μg/m L。将该重组蛋白乳化后经3次免疫新西兰大白兔,并在3免一周后采血,分离血清获得S1-CTD蛋白PAb。将SADS-Co V感染Vero E6细胞24 h后,以获得的兔PAb为一抗,分别采用western blot和间接免疫荧光试验(IFA)检测该PAb的反应原性。Western blot结果显示,在约250 ku处出现特异性条带,而阴性对照组无该条带;IFA结果显示,SADS-Co V感染的细胞中出现绿色荧光,而阴性对照细胞无绿色荧光。将SADS-Co V感染仔猪的回肠组织制备病理切片,以制备的PAb为一抗,通过免疫组织化学(IHC)检测SADS-Co V的抗原。结果显示,该组织切片中出现棕色阳性信号,而阴性对照仔猪回肠组织切片则无该棕色信号。表明该PAb可与感染SADS-Co V的仔猪回肠组织中的相应抗原发生特异性免疫反应。综上所述,本实验制备的S1-CTD蛋白PAb具有良好的反应原性和免疫原性,可以用于western blot、IFA、IHC检测体内外SADS-Co V的感染,为后续SADS-Co V检测方法的建立及S蛋白生物学功能的研究奠定基础。

Liddle综合征一例报告

目的探讨Liddle综合征的诊断和治疗。 方法报道 1例 2 7岁男性患者 ,血压升高 4年 ,血压控制不佳 ,检查血钾低、血尿醛固酮低于正常、低肾素 ,肾上腺B超及CT未见异常 ,红细胞电镜扫描示红细胞形态异常。 结果用氨苯喋啶及其他降压药治疗配合低钠饮食 ,使患者血压及生化检测转为正常。 结论根据高血压、低血钾、低醛固酮、生化检测、氨苯喋啶治疗有效及红细胞电镜扫描 ,有助于Liddle综合征的诊断 ;早期诊治可以减少心、脑、肾并发症的发生。

Liddle综合征研究进展

Liddle综合征是一种常染色体显性遗传的单基因高血压病，其临床特征是早发的高血压，低血钾，低肾素，低醛固酮血症，对上皮钠离子通道（ENaC）抑制剂敏感，而对醛固酮抑制剂不敏感。虽然在该综合征的诊断和治疗方面已取得很大进展，但仍有部分患者被误诊以致早年发生心肾功能不全等靶器官损害、脑卒中甚至猝死。近年来，由于分子生物学和分子遗传学的发展，对Liddle综合征发病机制的研究不断深入。该综合征的遗传基础为编码ENaC的基因发生突变引起上皮钠通道过度激活导致肾脏远曲小管对钠水重吸收增强所致，一旦诊断明确，单服阿米洛利即可取得良好的疗效。本文将对Liddle综合征的研究现状作一综述。

Liddle综合征研究进展

Liddle综合征是一种单基因致病型高血压,由于编码远端肾小管上皮钠通道的基因发生功能获得性突变,引起钠重吸收增加,水钠潴留,血压升高,同时伴有低血钾、低肾素、低醛固酮水平。临床常表现为早发高血压,易误诊为"原发性醛固酮增多症",基因检测可以确诊,早期诊断及精准治疗是改善预后的关键。

Liddle综合征基因型和临床表型分析

目的初步探讨L idd le综合征基因型和临床表型的关系。方法收集两个临床诊断为L idd le综合征的家系,进行基因型的检测和临床表型的研究,对比两个家系基因型和临床表型的差异。结果发现家系1中4例同胞兄弟及侄女的618号密码子均发生CCC→CTC杂合错义突变,使编码的氨基酸脯氨酸被酪氨酸替换。家系2中先证者及其姨母、表弟的618号密码子均发生CCC→TCC杂合错义突变,使编码的氨基酸脯氨酸被丝氨酸替换,并且此家系中这一突变与634号密码子GAC→CAC(Asp→H is)的突变连锁,即家系2中为双突变。两个家系中均具有高血压、低血钾、低血浆肾素活性和低醛固酮血症,不同的是家系1中均有严重的低血钾症状,而家系2中无任何低血钾的症状。结论两个Liddle综合征家系的临床表型的不同可能与基因型的差异有关。

猪急性腹泻综合征冠状病毒S1蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法,本研究通过构建重组真核分泌型表达质粒p CAGGS-S1-His并转染HEK293F悬浮细胞进行可溶性表达S1蛋白。转染重组质粒5 d后的细胞上清利用HisTrapTMExcel亲和层析柱纯化,浓缩后的蛋白经SDS-PAGE、western blot鉴定显示获得了分子量约为130 ku且大于理论大小的重组S1蛋白,表明该蛋白为分泌表达且具有良好的翻译后修饰。利用获得的重组S1蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,初步建立了SADS-CoV S1蛋白抗体的间接ELISA检测方法。该方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)、猪轮状病毒(PoRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)阳性血清均无交叉反应,仅与SADS-CoV阳性血清反应,表明该方法特异性较强;该方法检测SADS-CoV阳性血清,当稀释至1:3 200时仍为阳性,表明该方法具有较高的敏感性;对4份阳性血清的批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的重复性和稳定性;利用该方法和间接免疫荧光试验(IFA)对50份临床样品检测,结果显示该间接ELISA检测到9份阳性样品,41份阴性样品;IFA检出5份阳性样品,45份阴性样品,二者的总符合率为92%。综上表明,本研究建立的间接ELISA检测方法能够特异、灵敏地检测SADS-CoV S1蛋白抗体,可以用于SADS-CoV灭活疫苗的免疫效果评价以及该病原的血清学流行病学调查和免疫水平监测,为SADS-CoV所致疫病的鉴别诊断和防控奠定基础。

Liddle综合征患儿的护理

Liddle综合征是因肾远端小管上皮细胞钠通道的过度激活,对钠和水的重吸收增加,钾排出增加,引起细胞外容量增加的-种罕见的常染色体显性遗传病.其临床表现以高血压、低血钾、代谢性碱中毒及血浆肾素活性、醛固酮水平正常或偏低为特征,故又称遗传性假性醛固酮增多症.

超声联合染色体筛查在Down’s综合征诊断中的应用

目的探究超声联合染色体非整倍体无创DNA产前检测(Non-invasive prenatal genetic testing,NIPT)在Down’s综合征(DS)诊断中的应用。方法回顾性收集2020年6月-2023年6月太康县人民医院收治的疑似DS高危患者210例为研究对象,通过超声、NIPT及两项联合对DS进行诊断,与羊水细胞染色体核型分析结果进行对比,采用ROC曲线分析三者诊断敏感度、特异性、准确性与诊断价值。结果在210例疑似DS患者中,经羊水细胞染色体核型分析证实,DS患者26例(12.38%,26/210),非DS患者184例(87.62%,184/210)。以羊水细胞染色体核型分析结果作为金标准,超声诊断DS的敏感度为69.23%(18/26),特异度为92.93%(171/184),超声诊断DS与羊水细胞染色体核型分析结果相比两者一致性一般(Kappa=0.574);NIPT诊断DS的敏感度为84.62%(22/26),特异度为97.83%(180/184),NIPT诊断DS与羊水细胞染色体核型分析结果相比两者一致性较好(Kappa=0.806);两项联合诊断DS的敏感度为92.31%(24/26),特异度为98.37%(181/184);两项联合诊断DS与羊水细胞染色体核型分析结果相比两者一致性较好(Kappa=0.892)。两项联合检出率明显高于超声检查,且两项联合、NIPT检查诊断误诊率均明显低于超声检查(P<0.05)。ROC曲线分析显示,超声、染色体筛查、两项联合检查诊断DS的AUC为0.811、0.871、0.953,提示两项联合检查对DS的诊断价值更高。结论超声联合染色体筛查进行DS诊断具有高准确性,利于提高孕妇接受度,具有较高临床价值,值得临床推广应用。

1例Lemierre’s综合征患者的药物治疗分析与监护

目的为Lemierre’s综合征的早期诊断、药物治疗及用药监护提供参考。方法医师根据患者病情及血宏基因组二代测序检测结果确诊患者为Lemierre’s综合征,临床药师参与了该患者的治疗全过程。治疗过程中,临床药师针对坏死梭杆菌感染,建议予哌拉西林钠他唑巴坦钠联合甲硝唑抗感染治疗;针对左侧颈内静脉炎并血栓形成,建议予依诺肝素钠注射液抗凝治疗。结果医师采纳临床药师建议,患者病情好转,准予带药出院。结论临床药师通过解读血宏基因组二代测序检测结果,同时结合患者病情,协助医师为该患者制定了个体化抗感染治疗及抗凝治疗方案,并进行用药监护,确保了患者用药的安全有效。

16s rRNA测序分析针灸治疗对腹泻型肠易激综合征(肝郁脾虚证)患者肠道菌群的影响

目的:从肠道菌群角度入手,探究针灸调节腹泻型肠易激综合征(IBS)的临床疗效及作用机理。方法:选取我院针灸科收治的肠易激综合征患者40例,按照3∶1比例随机分为针灸治疗组(30例),对照组(10例)。根据《中医消化病诊疗指南》评价临床疗效,应用16s rRNA测序检测治疗前后肠道菌群α多样性以及肠道菌群组成。结果:针灸治疗组患者治疗有效率高于对照组(93.33%vs 60%,P<0.05),对针灸治疗组中有效的28例患者的肠道菌群α多样性和组成差异进行分析:治疗后,反应物种丰富度的Chao指数、反应多样小的Shannon指数均优于治疗前(P<0.05)。在属水平上,与治疗前相比,治疗后双歧杆菌属、乳杆菌属、直肠真杆菌属、肠球菌属、粪杆菌属、拟杆菌属、毛螺菌属、罗氏菌属成为优势菌属(P<0.05)。结论:针灸治疗对腹泻型肠易激综合征(肝郁脾虚证)患者疗效显著。患者治疗前后肠道菌群的变化,提示针灸治疗可能可以通过调节肠道菌群,对腹泻型IBS发挥临床疗效。

Liddle综合征触发蛋白ENaC的PY模体突变型的结合肽段的筛选

Liddle综合征是一种常染色体显性、盐敏感型的高血压综合征,其分子发病机制研究认为是上皮钠离子通道(epithelial Na+channel,ENaC)的β亚基或γ亚基的胞质侧羧基端区域低频率的点突变或缺失突变导致肾远曲小管钠离子重吸收增加.本研究提出了一种从分子水平上治疗Liddle综合征的设想,即构建一种可识别Liddle综合征患者中ENaC蛋白突变的PY模体的人工泛素连接酶E3,使其结合并降解突变的ENaC蛋白,从而使肾远曲小管上皮细胞膜上ENaC的表达数量和活性恢复.而识别PY突变体的E3,可通过用患者中的PY突变体筛选随机多肽文库获得与之结合的随机肽段,用其替换PY模体天然配体蛋白Nedd4的WW结构域,从而得到一个新的人工E3.本研究中以一种Liddle综合征突变型Y620H为诱饵蛋白,筛选新型随机多肽文库,获得了1个至少能与2种PY突变体(Y620H和P618L)特异性结合的随机肽段,为进一步构建可降解ENaC突变体的人工E3积累了重要的实验数据.

原发性肾病综合征患儿血清LXA4、S100A4水平与病情、疾病转归的关系

目的探讨原发性肾病综合征(PNS)患儿血清脂氧素A4(LXA4)、S100钙结合蛋白A4(S100A4)水平与病情、疾病转归的关系。方法选取2020年3月至2022年3月南京明基医院收治的168例PNS患儿为研究对象,另选取来南京明基医院体检的150例健康儿童为对照组,将PNS患儿根据疾病活动度分为缓解期组(n=73)与发作期组(n=95)。采用酶联免疫吸附试验检测血清LXA4、S100A4水平。患儿出院后连续随访1年,根据预后情况分为预后良好组(n=138)与预后不良组(n=30)。采用Spearman相关分析血清LXA4、S100A4水平与疾病活动度的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清LXA4、S100A4对PNS患儿预后的预测价值;采用多因素Logistic回归分析PNS患儿预后的影响因素。结果缓解期组、发作期组血清LXA4、S100A4水平高于对照组,且发作期组血清LXA4、S100A4水平高于缓解期组(P<0.05)。PNS患儿血清LXA4、S100A4水平与疾病活动度均呈正相关(r=0.593、0.546,P<0.05)。预后良好组PNS患儿血清LXA4、S100A4水平低于预后不良组(P<0.05)。血清LXA4、S100A4预测PNS患儿疾病转归的曲线下面积(95%CI)分别为0.767(0.756~0.888)、0.846(0.824~0.863),二者联合预测的曲线下面积(95%CI)为0.905(0.879~0.924)。预后不良组病理类型为肾炎型占比、24 h尿蛋白定量、血尿发生占比高于预后良好组,尿蛋白转阴时间长于预后良好组,病理类型为单纯型及总蛋白、IgM水平低于预后良好组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,有血尿发生(OR=2.300,95%CI 1.598~3.312)、24 h尿蛋白定量≥121.25 mg/24 h(OR=2.098,95%CI 1.489~2.956)、LXA4≥95.64 ng/L(OR=2.627,95%CI 1.737~3.973)、S100A4≥248.15 ng/L(OR=2.729,95%CI 1.777~4.192)是PNS患儿预后不良的危险因素(P<0.05)。结论血清S100A4、LXA4水平在PNS患儿中升高,且与疾病活动度及预后相关,有望作为评估PNS病情及预后的潜在标志物。

Liddle综合征家系上皮钠通道β亚单位基因移码突变及临床研究一例

目的:本研究旨在探究一例临床疑似Liddle综合征的先证者及其家系成员上皮钠通道β亚单位基因突变情况、相关的临床表型和二者之间的关联性。方法:收集疑似Liddle综合征先证者及其家系成员的临床资料,进行常规查体和化验检查,主要包括动脉血压水平、血钾、血浆肾素和醛固酮水平测定等。

曹伟云教授治疗Good’s综合征合并支气管扩张验案1例

Good’s综合征是一种免疫缺陷性疾病,属于少见病,关于本病的报道并不多,尤其是采用中药治疗的报道少之又少。Good’s综合征患者因免疫力欠佳,易合并感染,尤以合并支气管扩张伴感染偏多。目前,西医治疗多为对症治疗,急性期予抗生素控制感染,但患者病情易反复。本文主要从曹伟云教授对Good’s综合征合并支气管扩张病的中医病因病机和辨证论治等方面展开论述,认为Good’s综合征合并支气管扩张或因初感外邪、侵犯肺系,或因痰热日久、消耗阴液,或因久病体虚、伤及阴阳引起,在治疗上或予以清热散邪,或予以养阴清热、化痰排脓,或予以补阳养阴,同时根据伴随症进行药物加减,通过整体观念辨证论治,扶正与祛邪动态调整,尤以扶正为要,增强患者的免疫力,改善患者体质,迅速缓解患者临床症状,减少病情发作次数和患者住院次数。

1例Liddle综合征遗传咨询及产前诊断的临床分析

Liddle综合征(Liddle Syndrome)又称假性醛固酮增多症,是一种罕见的单基因致病型高血压,遗传方式为常染色体显性遗传,遗传学基础是编码ENaC的基因(SCNN1B和SCNN1G)发生功能获得性突变,主要特征包括高血压、低钾血症、低肾素及低醛固酮血症等,常于青少年起病。该病常有家族聚集性,也存在散发情况,由Grant Liddle等于1963年首次进行详细描述。现将我们收集的一个家系的临床特点、基因检测结果及产前诊断报告如下。