基于液体射流破碎法制备粒径可控的聚乙烯醇微球

在工业生产中,聚乙烯醇(polyvinyl alcohol,PVA)微球多采用机械搅拌法制备,得到的微球粒径不可控、粒径分布宽、小粒径(100~300μm)微球产率低。为改善上述问题,本研究将液体射流破碎法应用于油包水(W/O)微球制备体系,制备了粒径可控、粒径分布窄的PVA水凝胶微球。本研究系统研究了分散相流速、PVA浓度、加料装置内径及稳定剂浓度对微球粒径和粒径分布的影响。最终,采用分散相流速为40 mL/min、PVA浓度为7.0%、加料装置内径为400μm及稳定剂浓度为11.5%的条件,制备了平均粒径为146.00μm,粒径分布为1.63的PVA微球。该方法得到的小粒径微球产率高、批次间重复性良好、装置简单,可实现微球的规模化生产。

高效阴离子交换色谱分离-脉冲安培检测法测定烟草料液中的糖、糖醇和醇类化合物

建立了高效阴离子交换色谱分离-脉冲安培检测法测定烟草料液中的糖、糖醇以及醇类化合物的方法。以NaOH为淋洗液，在CarboPac MA1阴离子交换柱上等度分离了肌醇、甘油、丙二醇、半乳糖醇、木糖醇、山梨醇、甘露醇、葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露糖和半乳糖等12种化合物。对影响分离和检测的条件进行了优化，并在此优化条件下分析了烟草料液中的糖、糖醇以及醇类化合物。12种化合物的检出限为2．0～216μg／L（25．0μL进样，以3倍信噪比计算检出限）。12种化合物浓度为1～5mg／L的标准溶液连续7次进样的RSD为0．7％～4．3％。方法对烟草料液中12种化合物的加标回收率为80％～108％。方法灵敏、高效、简便、快捷。

液质饲料喂养制备酒精性心肌病小鼠模型

目的利用液质饲料喂养的方法建立酒精性心肌病小鼠模型,为酒精性心肌病机制研究提供良好动物模型。方法利用含有酒精的液体饲料和不含酒精的对照饲料喂养16周龄C57小鼠(酒精组n=21;不含酒精组n=9),含有酒精的饲料酒精浓度由4.8%逐步升高至5.4%,共喂养8周,每周进行体重测量,监测死亡率,8周后进行心脏超声心动图检测以及病理学检测。结果酒精喂食组从第二周体重开始降低,一直持续到第八周体重较对照组均有明显的减轻;同时酒精组小鼠在酒精喂食期间死亡7只(占33.3%),而对照组没有死亡现象;心脏超声结果显示,酒精组小鼠较对照组心室前壁、后壁均显著变薄,心室内径增大,并且心脏射血分数和短轴缩短率显著变小;酒精组小鼠心脏/体重指数较对照组显著增大,同时HE染色结果也证实酒精组小鼠心脏明显增大。结论经过8周的酒精液质饲料喂养后,小鼠心脏呈现整体变大,左室壁变薄,心功能变差等酒精性心肌病的典型病理特征。因此,通过此方法能够成功制备酒精性心肌病小鼠模型。

CYP2E1在小鼠酒精性肝纤维化中的作用研究

目的探讨CYP2E1在酒精性肝纤维化(ALF)过程中的作用。方法取健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为2组:正常组(n=10)和实验组(n=40),正常组用Lieber-DeCarli液体饲料饲养小鼠8周,实验组用Lieber-DeCarli液体酒精饲料饲养,4周后联合5%CCl 4-橄榄油2 ml/kg进行腹腔注射,2次/周,进行ALF造模,共8周。分别于0、2、4、6、8周每组各取4只小鼠进行眼球采血以检测血清中ALT活性;颈椎脱臼处死小鼠取肝,HE染色观察肝组织病理学形态改变和坏死得分;蛋白免疫印迹法检测CYP2E1的表达水平。结果与正常组相比,实验组肝功能指标和肝纤维化水平逐渐升高,在造模第4周时出现最严重肝损伤(P<0.01)。随着造模时间的延长,肝脏出现不同程度的损伤修复现象,且CYP2E1表达量逐渐降低。结论CYP2E1的表达在ALF形成过程中起一定的作用。

解整合素-金属蛋白酶9在小鼠酒精性肝纤维化过程中的表达

目的研究解整合素-金属蛋白酶9(ADAM9)在小鼠酒精性肝纤维化过程中的表达。方法将50只健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组10只,实验组40只。正常小鼠采用Lieber-DeCarli TP4030C对照液体饲料饲养小鼠8周,实验小鼠采用Lieber-DeCarli TP4030A酒精液体饲料喂养4周后联合5%四氯化碳橄榄油溶液2 ml/kg,腹腔注射,2次/周,总共8周诱导小鼠酒精性肝纤维化模型。分别于0、2、4、6、8周各取4只小鼠摘除眼球取血并分离血清,检测谷草转氨酶(AST)活性;颈椎脱臼处死小鼠并取肝,用免疫组化法测定0、2、4、6、8周小鼠肝组织中ADAM9蛋白的表达变化。结果小鼠经Lieber-DeCarli液体饲料喂养后0、2、4、6、8周AST活性分别为(110±14)U/L、(163±52)U/L、(200±26)U/L、(229±17)U/L、(509±111)U/L,从酶活性可以看出,酒精液体饲料喂养2周后,血清AST活性开始上升,随着喂养时间的增加,血清AST活性持续升高,8周达到最高值(P<0.01)。免疫组化结果显示,酒精液体饲料喂养2周后,ADAM9的蛋白表达量上升,随着喂养周数不断增加,ADAM9的蛋白表达量持续升高,8周达到最高值(P<0.01)。结论 ADAM9在小鼠酒精性肝纤维化过程中表达不断升高且变化显著,与肝纤维化的发展进程密切相关,可能起到促进肝纤维化的作用。

热休克蛋白70在小鼠酒精性肝纤维化过程中的表达

目的探讨热休克蛋白70(HPS70)在酒精性肝纤维化过程中的表达。方法按照体重将雄性C57BL/6J小鼠随机分为2组:正常组10只和模型组40只。模型组用Lieber-DeCarli酒精液体饲料喂养,取0,2,4,6和8周5个时间点造模。4周后腹腔注射5%CCl_4橄榄油2 mL·kg^-1,2次/周,造成酒精性肝纤维化模型。每个时间点各杀4只小鼠并分离血清,检测谷草转氨酶(GOT)活性,苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织病理形态改变和坏死积分,用蛋白质印迹法检测小鼠肝组织中HSP70蛋白的相对表达量(相对灰度值)。结果随着时间增加,小鼠血清GOT酶活性和HE染色坏死积分逐渐升高,第8周达到最高;在第8周,正常组和模型组的GOT分别是(110±14)和(509±111)U·L^-1;这2组的肝组织坏死积分分别是0和2分。肝中HSP70的蛋白表达量在第4周达到最高值;正常组和第4周模型组的HSP70的蛋白表达量分别是1.02±0.22和4.62±1.2。随着损伤修复,HSP70表达量逐渐降低。上述指标:模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论HSP70的表达与酒精性肝纤维化发生发展密切相关。