基于抗氧化活性百合提取工艺研究

目的:研究百合抗氧化活性成分及其制备工艺。方法:采用热回流提取法制备百合提取物,以抗氧化活性为筛选指标,正交试验法优选百合提取工艺;DPPH法和羟自由基清除法评价百合提取物的抗氧化能力;比色法检测百合多糖、黄酮、多酚含量;对百合抗氧化活性与多糖、黄酮、多酚成分进行相关性分析。结果:百合抗氧化物质的最佳提取条件为溶剂20%乙醇、固液比1∶12、提取时间100 min,百合对DPPH自由基的清除率为88.2%,百合对DPPH自由基的能力与黄酮呈显著强正相关。结论:百合具有较强的抗氧化活性,主要活性成分是黄酮。

不同植物生长调节剂对卷丹百合扦插繁殖效果的影响

本试验选取生长健壮、无病虫害的优良卷丹鳞茎为试验材料,比较不同浓度(100、300、500 mg/L)IAA、IBA、KT、6-BA处理对卷丹扦插繁殖的鳞茎发生率、繁殖系数、生根数、根长以及新生小鳞茎直径的影响。结果表明,生长调节剂种类与浓度共同影响卷丹鳞片的扦插繁殖效果,其中不同生长调节剂种类之间的影响差异更为明显。与IAA、6-BA、KT相比,IBA处理卷丹的繁殖效果较好,且以100 mg/L IBA处理效果最佳。与6-BA和KT处理相比,IAA和IBA处理卷丹鳞茎发生率较高,其中300 mg/L IBA处理的鳞茎发生率高达100%。

不同温度处理对卷丹百合珠芽生理生化指标的影响

以卷丹百合珠芽为材料,研究其在5、10、15、20℃4种温度处理下,珠芽内部的生理指标变化以及不同温度处理对出苗情况的影响。结果表明,不同温度处理一段时间后,珠芽的组织含水量均有所下降,且温度越高下降速度越快;珠芽可溶性蛋白含量随处理时间的延长逐渐增加,5℃处理56 d后其含量高于其他处理,但不同温度处理之间无显著差异。温度对可溶性糖含量的影响较大,20℃处理下珠芽可溶性糖在前14 d有所下降,随后逐步回升;而3个低温处理下可溶性糖含量在前14 d没有明显下降,14~28 d显著上升,从28 d开始迅速下降并在42 d时到达最低值。与此同时,珠芽内的淀粉含量从14 d开始迅速上升,28 d时达到峰值,处理温度越低上升幅度越小,处理结束时5℃处理珠芽淀粉含量最低。将不同温度处理的珠芽分别在处理14、28、42和56 d后进行栽植,结果表明,5℃处理56 d的珠芽出苗速度最快,且出苗率最高(56.67%)。综上所述,利用卷丹百合珠芽进行繁殖,5℃冷藏处理56 d是最佳选择。

卷丹种球分级标准研究

为了研究卷丹种球分级标准,以湖南、湖北、贵州、重庆等卷丹主产区的种球资源为材料,测定种球和籽球周径、重量、鳞茎高等指标,并将各项数据进行主成分分析、K-均值聚类分析,以周径和重量为主要分级依据,建立了卷丹种球和籽球Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分级标准,对不同等级种球和籽球进行田间种植试验。结果表明,Ⅰ级种球长势好,产量较高,Ⅲ级种球长势差,产量较低。为保证高产;卷丹生产用种球应控制在Ⅱ级以上。此方法制定的质量分级标准科学、可行,可作为卷丹种球质量控制标准,为卷丹规范化栽培提供参考。

卷丹百合组培技术研究

以卷丹百合鳞片为外植体,通过调节不同激素的质量浓度,确定卷丹百合组织培养快繁体系。结果表明:用卷丹百合的内部鳞片作为外植体感染率最低,诱导培养基配方为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L;增殖培养基配方为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L;生根培养基配方为:1/2MS+NAA 0.5 mg/L+蔗糖60 g/L+琼脂7 g/L,为日后生理抗性研究及分子研究提供前期基础。

土壤镉污染对卷丹百合生长和镉分布的影响

为探究卷丹百合对镉污染的响应,开展不同镉浓度梯度(2.5、3、3.5、4 mg·kg^(-1))的盆栽试验,研究了不同浓度镉污染卷丹百合种球萌发、生长速率、生物量积累、生理响应和各器官镉含量的影响,分析了镉分布规律及各器官镉含量与土壤镉浓度的关系。结果表明:(1)C4(4 mg·kg^(-1))镉浓度显著降低卷丹百合发芽率、发芽势、生长速率,C2(3 mg·kg^(-1))、C3(3.5 mg·kg^(-1))镉浓度分别增加了百合鳞茎生物量的13.84%和38.96%。(2)随土壤镉浓度增加,丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性呈先升后降再升趋势,过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性随镉浓度的增加呈先增后降趋势,C4浓度对SOD、CAT和POD具有抑制作用,对MDA的含量有促进作用。(3)各器官镉含量随土壤镉浓度的增加而增加,同一镉污染下,镉分布规律为地上茎>叶>花>根>鳞茎;与对照相比,各器官镉富集系数均显著下降,地下部转运系数显著上升,而地上部各器官转运系数呈下降趋势。(4)土壤镉含量与卷丹百合各器官都具有极显著正相关性,且土壤镉与鳞茎镉含量的相关性最高。综上所述,卷丹百合耐镉性能较好;卷丹百合通过调节生理特性、生物量以及镉富集和转运能力等方式来降低土壤镉污染的危害;鉴于土壤与鳞茎镉含量具有最高的正相关性,控制土壤镉浓度是降低鳞茎镉含量,保证安全生产的重要措施。

卷丹中新甾体皂苷的分离和鉴定

目的 研究卷丹 (LiliumlancifoliumThunb .)鳞叶的化学成分。方法 用各种色谱技术进行分离和纯化 ,用MALDI TOF MS ,HR SI MS ,IR ,1 HNMR ,1 3CNMR ,DEPT ,1 H 1 HCOSY ,HMQC和HMBC等光谱和波谱技术鉴定其结构。结果 从卷丹鳞叶中分得 2个甾体皂苷 ,鉴定化合物 1为薯蓣皂苷元 3 O {O α L 鼠李糖基 (1→ 2 ) O [β D 木糖基(1→ 3) ] β D 葡萄糖苷 ,化合物 2为薯蓣皂苷元 3 O {O α L 鼠李糖基 (1→ 2 ) O [α L 阿拉伯糖基 (1→ 3) ] β D 葡萄糖苷。结论 化合物 2为新化合物 ,命名为卷丹皂苷A。

超声波提取卷丹鳞茎中总黄酮研究

本文对超声波方法和传统方法提取卷丹鳞茎中总黄酮进行试验比较,同时对影响超声波提取卷丹鳞茎中总黄酮的多个因素进行正交实验分析。结果表明:超声提取总黄酮效果较好;超声波法提取的最佳方法条件为:80%乙醇,料液比1∶30,在80℃下提取40 min,连续提取2次,黄酮的总提取率可达到99.25%。

卷丹百合提取物的体外抑菌作用研究

为探讨百合不同溶剂提取物的抑菌作用,采用琼脂打孔扩散法和稀释法对百合不同溶剂提取物进行抑菌实验研究。结果表明,百合的不同溶剂提取物对细菌和真菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、藤黄微球菌、绿脓杆菌、黄霉菌以及粪肠球菌)均有一定程度的抑制效果,为百合的进一步开发提供依据。

基于UPLC-Q-TOF-MS法分析百合珠芽化学成分及其薯蓣皂苷元抗肿瘤活性研究

为建立超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)快速鉴定百合珠芽中10种化学成分的分析方法,并对薯蓣皂苷元进行抗肿瘤研究。实验采用Thermo Hypersil Gold C_(18)柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm);乙腈(A)-0.5%乙酸(B)为流动相,梯度洗脱;电喷雾离子源(ESI),正负离子同步监测。采用CCK8法进行薯蓣皂苷元抗肺肿瘤A549细胞、胃肿瘤HGC-27细胞的药效筛选。结果表明,通过二级高分辨质谱分析结合相关文献,共鉴定对香豆酸、薯蓣皂苷、槲皮素等10个化合物。药理研究显示,薯蓣皂苷元对肺癌A549细胞增殖只有微弱的抑制活性,而对胃癌HGC-27细胞增殖表现出较强的抑制作用。本试验证实UPLC-Q-TOF-MS/MS可从保留时间、紫外吸收光谱、精确相对分子质量、分子式和二级结构碎片等方面对百合珠芽的主要成分进行定性分析,为寻找百合珠芽中活性物质提供一种快速准确的分析方法,且揭示百合珠芽中鉴定得到的单体成分可能具有较强的抗肿瘤活性。

卷丹乙醇提取物及其不同极性部位抗氧化活性的比较研究

对卷丹进行抗氧化活性研究,并筛选其主要的活性部位。采用体外抗氧化活性测试方法,以清除DPPH自由基和ABTS+.能力、还原Fe3+能力及抑制脂质过氧化能力为指标,评价卷丹乙醇总提取物及不同极性部位的抗氧化能力。卷丹及其乙酸乙酯部位和水饱和正丁醇提取部位具有较强的清除DPPH自由基和ABTS+.能力、还原Fe3+能力及抑制脂质过氧化能力。

卷丹百合化学成分抗肿瘤活性研究

目的对卷丹百合化学成分进行抗肿瘤活性研究。方法采用CCK-8法对百合中分离得到的对香豆酸、没食子酸、芦丁、β-胡萝卜苷进行体外抗肺癌细胞A549、胃癌细胞SGC-7901和HGC-27活性研究。结果对香豆酸对肺癌A549及胃癌SGC-7901细胞增殖具有较弱的抑制活性,高浓度400μg/mL的增殖抑制率分别为30.74%和33.32%,均表现出浓度依赖性。没食子酸对胃癌HGC-27细胞增殖具有明显的抑制作用,且作用随着浓度增大而明显增强,其最高浓度100μg/mL的抑制率高达79.90%。芦丁对肺癌A549细胞增殖具有弱抑制作用,高浓度200μg/mL的增殖抑制率为26.84%;其对胃癌SGC-7901、HGC-27细胞也有抑制作用,高浓度200μg/mL的增殖抑制率分别为35.63%和34.98%。结论卷丹百合中对香豆酸、没食子酸和芦丁有抑制肿瘤活性作用,可为今后卷丹百合的开发和利用提供一定理论依据。

加工方法对百合质量的影响研究

目的:研究加工方法对百合质量的影响,为百合加工方法的规范化提供参考依据。方法:新鲜百合样品分别采用煮制和蒸制2种烫片方法、不同干燥方法(包括热风烘干、微波干燥、远红外干燥和冷冻干燥)进行加工,样品中酚性甘油酯类、核苷、氨基酸及多糖等成分分别采用超高效液相-二极管阵列检测器(UPLC-DAD)、超高效液相-三重四级杆质谱联用仪(UPLC-TQ/MS)及紫外-可见分光光度法(UV)测定。结果:烫片过程,煮5～8min和蒸8～10min样品不仅外观色泽较佳,而且各成分含量较高;干燥方法,60～80℃烘干和冷冻干燥法较好。结论:烫片是百合干加工过程中必不可少的环节;确定最佳工艺条件为煮5～8min,60～80℃烘干或冷冻干燥。

HPLC法测定百合、卷丹、细叶百合中3种甾体皂苷的含量

目的 HPLC法同时测定百合、卷丹、细叶百合中3种甾体皂苷的含量。方法采用HPLC法,色谱柱为Akzonobel Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸,检测波长210 nm,流速1.0mL/min。结果 (25R)-26-O-(β-D-吡喃葡萄糖)-呋甾烷-5-烯-3β,22R,26-三羟基-3-O-α-L-鼠李糖-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷(简称皂苷1)在2～12μg呈良好线性关系(r=0.9998);(25R)-螺甾烷-5-烯-3β-O-α-L-鼠李糖-(1→2)-O-[β-D-葡萄糖-(1→6)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(简称皂苷2)在3.125～18.75μg呈良好线性关系(r=0.9999);(25R)-3β,17α-二羟基-5α-螺甾烷-6-酮-3-O-α-L-鼠李糖-(l→2)-O-[α-L-阿拉伯糖-(l→3)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(简称皂苷3)在1.125～9μg呈良好线性关系(r=0.9997)。皂苷1、2、3的平均回收率分别为97.72%、99.27%、98.96%,RSD分别为1.96%、1.78%、1.31%。结论所建立的HPLC法简便快速、准确度高,可用于百合药材的质量控制。

百合不同提取部位的药理活性比较

目的比较百合不同提取部位的药理活性。方法采用光电管法,以小鼠在程控自主活动箱中的自发活动数为指标,观察百合不同提取部位的镇静作用;采用常压耐缺氧及冰水浴游泳法,观察百合不同提取部位的抗应激损伤作用。结果结果证明百合的4号部位(即正丁醇部位)能明显减少小鼠的自发活动数,同时显著延长小鼠在常压下的耐缺氧时间及在冰水浴中的游泳时间。结论百合的正丁醇提取部位有明显的镇静及抗应激损伤的作用。

百合药材、种植土壤及灌溉水中农药及重金属残留分析

对湘产药食两用植物卷丹百合的鲜药、干燥药材、产地土壤及灌溉水的安全性进行评价。采用气相色谱法对总六六六、总滴滴涕、甲氰菊酯、毒死蜱、百菌清进行测定,并用AFS-AAS法测定As、Hg、Pb、Cd、Cr和Cu含量。结果显示,6个采样区的土壤、灌溉水中六六六、滴滴涕、甲氰菊酯、毒死蜱均未见残留,百菌清残留量为ND^0. 126 mg/kg;在百合鲜药、干燥药材中,六六六、滴滴涕、甲氰菊酯、毒死蜱、百菌清5种农药均未测出有残留,另除G-1、D-4样品中Cd残留量超标外,所有样品重金属均符合《植物和制剂对外贸易和贸易的绿色贸易标准》(WM/T2-2004)。根据污染指数评价,龙山具有优良的卷丹百合产地环境,适合生产符合现代质量要求的绿色百合。但研究发现百合对于土壤中镉的富集系数好,有必要加强百合主产区土壤改性进一步研究。

卷丹百合AFLP反应体系的建立与优化

以卷丹百合(Lilium lancifolium Thunb.)为试材,改良CTAB法提取DNA,通过对优化酶切、连接、预扩增、选择性扩增等试验条件筛选,初步建立适合卷丹百合的AFLP反应体系。结果表明,改良CTAB法提取的卷丹百合基因组DNA符合AFLP分析要求;最佳酶切时间为37℃酶切8 h;16℃连接过夜;预扩增产物稀释30倍为宜。利用该体系筛选出12对能获得稳定、清晰扩增图谱的引物组合,为卷丹百合遗传图谱构建及分子辅助育种奠定基础。

固相萃取-离子色谱法同时测定卷丹产地灌溉水中7种无机阴离子

建立了一种固相萃取-离子色谱法同时测定卷丹百合产地灌溉水中7种无机阴离子的简便、快速分析方法。将采集的灌溉水过SPE-C18小柱去除有机杂质,0.22μm微孔滤膜过滤后,取续滤液进样分析。采用IonPac AS19柱(250×4mm,5μm)为离子交换柱,IonPac AG19柱(50×4mm)为保护柱;以20.0mmol/L KOH溶液为流动相,流速为1.30mL/min,柱温为30℃,可在18min内完成对F^-、Cl^-、Br^-、NO_2^-、NO_3^-、SO_4^(2-)和PO_4^(3-)这7种阴离子的同时分离检测。7种阴离子在较宽范围内有良好的线性关系和精密度,7种阴离子线性范围分别为0.01～20、0.01～20、0.02～20、0.04～20、0.3～20、0.01～20、0.01～20mg/L,相关系数R大于0.9995。平均加标回收率为92.4%～101.9%,相对标准偏差为0.19%～4.47%(n=3)。该方法简便快速、灵敏准确,能同时测定农业灌溉水中上述7种无机阴离子。对卷丹百合产地环境监控具有重要意义。

卷丹百合鳞片育苗技术研究

为探索适于卷丹百合鳞片扦插育苗的有效方法,对在不同基质上（悬空海绵组10个处理,盆栽组6个处理）培养80d后鳞片的生长进行研究.结果表明：（1）悬空海绵组在海绵筒中加入的粉状活性炭高度越高鳞片生长状况越差,其中活性炭高度为0.2-0.3cm时鳞片的生长指标最优,生根率为86.33%,叶片抽生率为83.33%,生根系数为2.33,增殖系数达2.97,腐烂率仅为3.33%.（2）悬空海绵组与盆栽组在细沙中加入活性炭的量越多鳞片长势越差;基质相同时,前者培养的鳞片生长状况优于后者.采用悬空海绵法培育卷丹百合鳞片,操作简单、鳞片生长好,增殖多,是其鳞片扦插育苗的一种新方法.

宜兴百合通过愈伤组织诱导再生鳞茎的研究

以宜兴百合外植体产生的小鳞茎为材料，用2，4-D诱导愈伤组织。结果表明，最适合的2，4-D浓度为0．01～0．10mg/L，愈伤组织诱导再分化小鳞茎的最佳条件为：pH5．8～6．2，温度22-28℃。光照强度对小鳞茎的生长无明显作用。