湖北百合LhrMYB1、LhrMYB12、LhrMYB15及LhrMYB16基因克隆及生物信息学分析

以湖北百合为试材,采用RT-PCR方法克隆MYB基因,利用DNAMAN 8.0软件、ExPaSy-ProParam软件、NetPhos 3.1 Server等工具,研究了MYB基因所编码蛋白的结构以及功能,以期为开展湖北百合相关MYB转录因子的研究提供参考依据。结果表明:LhrMYB1、LhrMYB15蛋白为稳定蛋白、碱性蛋白、亲水性蛋白,LhrMYB12蛋白为稳定蛋白、酸性蛋白、亲水性蛋白;LhrMYB16蛋白为不稳定蛋白、碱性蛋白、亲水性蛋白。LhrMYB1与芒果中MYB3-like亲缘关系最近(XM 044620835),LhrMYB12与百合杂交品种亲缘关系最近(MK182389),LhrMYB15与百合杂交品种division I中MYB15like亲缘关系最近(LC218141),LhrMYB16与百合杂交品种division I中MYB16-1亲缘关系最近(LC218139)。

秋水仙素诱变湖北百合试验

以湖北百合(Lilium henryi Baker)鳞片为材料,将鳞片接种于4种不同配方的芽诱导培养基中,筛选出最佳配方,用此配方诱导出丛生芽,以丛生芽为诱变材料,在无菌条件下,将浸透秋水仙素溶液浓度分别为0.05%、0.10%、0.15%、0.20%的脱脂棉覆盖在新芽上,分别处理24、36、48 h。结果表明,芽诱导的最佳配方为6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,0.10%的秋水仙素处理48 h的诱变效果最佳,诱变率达20%。植株外观形态及气孔鉴定结果显示,多倍体植株叶片厚且增大,叶色加深,气孔的长、宽明显变大,保卫细胞密度减小。根尖染色体鉴定显示,四倍体植株的染色体数为48条(2n=4x=48),而二倍体的植株染色体数为24条。

野生湖北百合不定芽诱导及再生植株的建立

为加强野生湖北百合资源保存与利用,选用黔东南州野生湖北百合为材料,选用鳞茎及茎段为外植体,探讨不同浓度激素配比对其不定芽诱导、增殖及生根的影响。结果表明:诱导不定芽的最佳培养基为MS+1.0mg·L-1 6-BA+0.5mg·L-1 NAA,但茎段诱导不定芽高于鳞片,出芽率分别为66.67%和59.63%,单块外植体出芽个数分别为2和1,且茎段污染率比鳞片的污染率低。茎段诱导最佳增殖培养基为MS+0.1mg·L-16-BA+1.0mg·L-1 NAA,增殖率为83.33%,平均增殖系数为2.11,其生长状况良好,为最佳增殖培养基。茎段诱导最佳生根培养基为1/2MS+0.3mg·L-1 NAA,诱导生根率高达93.33%,平均生根数为3.18。

高温胁迫对野生湖北百合生理指标的影响

为了解贵州野生湖北百合的耐热性,对其设置不同高温(28℃、31℃、34℃、37℃、41℃、43℃)和不同时间(12、24、48、72h)处理,测定各处理对叶片的膜透性、抗氧化物系统保护酶、可溶性物质等生理指标。结果表明,随着温度升高和时间的延长,MDA含量上升、相对电导率增加,则膜透性增强;可溶性糖含量、Pro含量呈现升高趋势;CAT活性呈现先升高后下降趋势。同一温度下,随着时间的延长,各处理POD活性呈现先升高后下降趋势,但43℃处理呈持续升高;31℃、34℃和37℃处理不同时间SOD活性呈现下降-升高-下降趋势变化,28℃、40℃和43℃处理呈现先降低后升高趋势;可溶性蛋白质含量呈升高-降低-升高的变化趋势。通过主成分分析,MDA含量、POD活性、Pro含量和可溶性糖含量是野生湖北百合高温胁迫的主导指标;其次,SOD活性、可溶性蛋白含量也是次要的指标。

叠氮化钠、甲基磺酸乙酯复合诱变对湖北百合耐盐性的影响

以湖北百合鳞片为试材,采用9种不同培养基接种,获得诱导愈伤组织最佳配方为MS+6-BA 1.0mg·L^-1+NAA 0.1mg·L^-1。以该配方诱导出的愈伤组织为诱变材料,先后分别用NaN3(1、2、3mmol·L^-1)处理(3、4、5h)、EMS(0.2%、0.4%、0.6%)处理(1、2、3h)愈伤组织,对诱变处理的愈伤组织分化的不定芽用0.4%NaCl胁迫处理0~12d进行盐胁迫筛选,以期获得复合诱变处理后的最佳耐盐浓度。结果表明:3mmol·L^-1的NaN3处理3h达半致死,诱变率达46.7%,使用0.4%EMS再次诱变3h达半致死,诱变率达53.3%。复合诱变测得的超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化物酶(POD)活性、可溶性糖含量以及可溶性蛋白质含量的变化始终高于对照。因此,在盐胁迫复合诱变筛选的湖北百合的新陈代谢水平较高,表现出对盐胁迫的适应性。

湖北百合离体繁殖中的形态发生

在湖北百合（ＬｉｌｉｕｍｈｅｎｒｙｉＢａｋｅｅｒ）的离体繁殖中，进行了组织切片观察，其丛生苗是通过不定根和不定芽的发育形成的。不定芽起源于鳞片叶表皮和表皮下几层细胞；也可发生在生长发育中不定芽的生长锥上，由顶端分生组织中局部细胞分裂和分化形成不定芽原基。无根苗转入生根培养基后，不定根起源于表皮下薄壁细胞及维管组织中的薄壁细胞，这些薄壁细胞分裂分化形成不定根原基。体细胞胚的发育可观察到心形胚，鱼雷形胚阶段，但这些胚状体不能进一步发育至成熟胚。

外源H_(2)O_(2)对湖北百合试管苗玻璃化及抗氧化系统的影响

为控制湖北百合离体保存及试管苗玻璃化,以贵州省凯里市丁扒山的湖北百合为材料,通过不同配方培养基和H_(2)O_(2)浓度处理诱导湖北百合玻璃化发生,并测定其生理指标变化。结果表明:不同培养基配方对湖北百合玻璃化发生没有影响。外源H_(2)O_(2)会诱导湖北百合试管苗的玻璃化,随着外源H_(2)O_(2)浓度的增加玻璃化程度逐渐明显。在不同浓度外源H_(2)O_(2)处理下,湖北百合玻璃化苗的玻璃化率、POD活性、MDA含量随外源H_(2)O_(2)浓度的增加呈现上升趋势;湖北百合玻璃化苗的生长量、SOD活性、CAT活性随外源H_(2)O_(2)浓度的增加呈现下降趋势。湖北百合玻璃化苗的气孔保卫细胞变形,气孔下陷明显,不同浓度处理间下陷程度没有显著差异,凹陷率随着外源H_(2)O_(2)浓度增加呈上升趋势;气孔张开率随外源H_(2)O_(2)浓度增加不断下降,气孔闭合率随外源H_(2)O_(2)浓度增加呈先下降后上升的趋势,对照组的气孔开度显著高于中高浓度处理,3个低中高浓度外源H_(2)O_(2)处理组之间的气孔开度没有显著差异;高浓度处理气孔密度显著低于对照组,但低中浓度与对照组气孔密度没有显著差异。

梵净山百合总皂苷醇提工艺研究

以梵净山百合为原料,研究百合总皂苷的提取工艺。以百合总皂苷的提取率为参考指标,在单因素试验基础上,通过正交试验确定提取梵净山百合总皂苷的最佳工艺条件,即提取温度为60℃,提取溶剂为80%乙醇,固液比为1︰6 g/m L,提取时间2 h,在最佳提取工艺条件下,测得总皂苷的提取率为2.68%,相对偏差为1.68%,则说明该最佳工艺的稳定性和重复性良好。