大鼠脊髓损伤后形态学观察和LIMK1表达的研究

目的通过监测大鼠脊髓损伤后其形态学和LIMK1、GFAP蛋白表达水平的动态改变,对脊髓损伤后LIMKL1是否参与胶质瘢痕的形成及调控进行初步研究。方法 Wistar成年大鼠54只,随机分为3组:对照组、假伤组和SCI组,SCI组采用改良Allen's致伤装置制作大鼠脊髓损伤模型,采用BBB运动功能评分法观察大鼠后肢功能恢复情况。分别于术后1、2、3、4周取材,通过HE染色、免疫组化、免疫荧光等方法,观察伤后不同时期脊髓的病理变化及LIMK1、GFAP的表达情况。结果 SCI组死亡率33%,BBB评分示SCI组术后2周后肢运动功能有明显恢复(P<0.01)。LIMK1、GFAP的免疫组化和激光共聚焦显微镜分析结果基本一致,两者蛋白水平表达均于伤后1周增高。GFAP表达于3周达峰值,4周时开始下降;LIMK1在伤后1周时出现峰值,2周开始波动下降,3周时达峰值,4周开始下降。结论大鼠脊髓损伤后,LIMK1和GFAP表达密切相关,结合LIMK1蛋白表达谱,提示LIMK1通路参与胶质瘢痕的形成和调控。

LIMK1表达在胃癌新辅助化疗中的临床意义

目的研究LIMK1表达在胃癌患者新辅助化疗中的临床意义。方法本研究共入组接受新辅助治疗的59例胃癌患者,免疫组织化学方法检测LIMK1蛋白的表达水平,分析LIMK1蛋白表达与胃癌患者化疗疗效及临床病理参数的相关性,同时采用Kmplot数据库分析LIMK1表达水平与胃癌患者预后的关系。结果新辅助化疗对40例患者有效,对19例患者无效;化疗有效的患者LIMK1蛋白评分显著低于化疗无效者(P<0.05),LIMK1蛋白表达水平与胃癌患者的年龄、性别无关(P>0.05),而与肿瘤TNM分期、组织学分级以及淋巴结转移有关(P<0.05);Kmplot数据库结果显示LIMK1蛋白高表达患者生存率低于LIMK1蛋白低表达者(P<0.05)。结论LIMK1蛋白表达水平与胃癌新辅助化疗疗效相关,提示LIMK1蛋白可能是胃癌化疗敏感性的重要标志物。

微RNA-374c-5p通过靶向LIMK1增强人乳腺癌MDA-MB-231/DDP细胞对顺铂的敏感性

目的:探讨人类(Homo sapiens,hsa)-微RNA(micro RNA,miR)-374c-5p对人乳腺癌MDA-MB-231/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测乳腺癌MCF-10A、MDA-MB-231和MDA-MB-231/DDP细胞中hsa-miR-374c-5p和Lim结构域激酶1(Lim domain kinase 1,LIMK1)的表达情况。将hsa-miR-374c-5p模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitor)以及LIMK1 siRNA和过表达质粒分别转染乳腺癌MDA-MB-231/DDP细胞,采用实时荧光定量PCR法检测hsa-miR-374c-5p和LIMK1 mRNA表达变化,蛋白质印迹法检测LIMK1蛋白表达水平;分别采用CCK-8、FCM和平板克隆形成实验检测细胞增殖、凋亡和克隆形成能力的变化;荧光素酶报告基因实验验证hsa-miR-374c-5p与LIMK1的结合关系。结果:乳腺癌MDA-MB-231/DDP细胞中hsa-miR-374c-5p和LIMK1的表达趋势相反。过表达hsa-miR-374c-5p或敲低LIMK1表达均可抑制MDA-MB-231/DDP细胞的增殖活力(P值均<0.05)和克隆形成能力(P值均<0.05),而细胞凋亡率明显升高(P值均<0.05),对顺铂的敏感性明显增强(P值均<0.05);沉默hsa-miR-374c-5p后,情况相反(P值均<0.05);且在转染了hsa-miR-374c-5p mimics的细胞中过表达LIMK1可以逆转单一过表达hsa-miR-374c-5p引起的细胞表型改变(P值均<0.05)。hsa-miR-374c-5p可靶向调控LIMK1的表达。结论:Hsa-miR-374c-5p可以通过靶向调控LIMK1的表达,增强人乳腺癌MDA-MB-231/DDP细胞对顺铂的敏感性。