Cloning of Syntaxin Gene in Limonium sinense Kuntzet

[Objective] The aim was to clone Syntaxin genes in Limonium sinense Kuntze. [Method] Limonium sinense Kuntze leaves were used as materials and total RNA was extracted and transcribed reversely. Nested primers were designed based on EST sequences at 5’ region of Syntaxin, and cDNA obtained through reverse reaction was taken as the template. Sequences of Syntaxin gene at 3’ region were obtained through two rounds of PCR amplifications. [Result] DNA fragments （1 096 bp） were obtained. For LsSyntaxin, open reading frame （ORF） was 816 bp and the encoded amino acids were 271. The relative molecular weight of Syntaxin was 30 254.3 Da and isoelectric point in theory was 5.55. [Conclusion] Syntaxin genes from Limonium sinense Kuntze were cloned. The research laid foundation for the study on Syntaxin gene function in Limonium sinense Kuntze and salt-secreted process.

中华补血草乙醇提物对小鼠酒精性肝损伤的保护作用研究

目的:为了探究中华补血草醇提物(Limonium sinense(Girard)Kuntze enthanol extract,LSKE)保肝的物质基础及其保肝作用机制。方法:采用乙醇加热回流提取得到中华补血草提取物(LSKE),通过高效液相色谱结合标准品鉴定LSKE的主要成分是木犀草素、山奈酚、槲皮素、杨梅素、圣草酚、异鼠李素6种黄酮类成分;通过酒精诱导小鼠急性肝损伤模型考察不同剂量中华补血草醇提物(100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg)对小鼠血清ALT、AST、SOD、GSH-Px和MDA含量及活性的影响;对小鼠肝脏组织病理切片进行H&E染色分析;并采用qRT-PCR和Western blot技术对炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及肝药酶CYP2E1的mRNA表达水平进行分析。结果:研究表明LSKE能够抑制血清中ALT、AST的水平,降低MDA水平,同时提高抗氧化酶SOD和GSH-Px的活性,以及抑制炎症因子和肝药酶CYP2E1的mRNA表达。结论:LSKE可通过改善因酒精引起的炎症水平、氧化应激水平和脂质过氧化水平发挥对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。

AB-8大孔树脂对中华补血草根多酚的吸附洗脱特性

从S-8、NKA-9、AB-8、NKA和D4020大孔树脂中筛选出AB-8树脂,研究了AB-8树脂对中华补血草根多酚的吸附洗脱特性。结果表明:AB-8树脂对中华补血草根多酚的饱和吸附时间为5h,吸附等温线符合Lang-muir模型,饱和吸附量为55.30mg/g,提取液pH值对吸附过程影响不显著;以质量浓度1.99mg/mL的提取液上柱,流速为1mL/min时,吸附泄漏点为10BV(柱床体积,1BV=30mL),饱和点为32BV,因此,采用串柱法有利于AB-8树脂吸附能力的发挥;用体积分数70%乙醇作为洗脱剂,以流速1mL/min洗脱,获得的多酚纯度为58.29%。

中华补血草多酚提取物对自由基的清除能力

采用超声波辅助浸提-大孔树脂吸附法从中华补血草〔Limonium sinense(Girard)Kuntze〕根、根茎、叶和花中获得多酚提取物,并对它们的得率和组成成分进行了初步分析;在此基础上,比较研究了不同部位多酚提取物对DPPH.、.OH和O2.-的清除能力。实验数据表明:中华补血草根、根茎、叶和花多酚提取物的得率分别为12.42%、5.98%、5.27%和3.98%,差异明显;多酚提取物中总酚、原花色素、黄烷醇和总黄酮含量变化幅度较大,分别为51.87%～61.60%、5.62%～39.47%、3.69%～12.46%和2.53%～35.97%;其中,总酚、原花色素和黄烷醇含量均以根多酚提取物最高,总黄酮含量以花多酚提取物最高,均与其他部位多酚提取物有显著差异。随质量浓度提高,4个部位多酚提取物对3种自由基的清除率总体上逐渐增大;其中根多酚提取物对DPPH.的清除作用最强,半数清除质量浓度(ρSC50)为38.52μg.L-1,显著低于阳性对照芦丁和BHT(ρSC50分别为67.40和74.25μg.L-1);花多酚提取物对.OH和O2.-的清除能力最强,ρSC50分别为53.51和74.00μg.L-1,均低于芦丁;总体上,4个部位多酚提取物对DPPH.的清除能力由强至弱依次为根、根茎、叶、花,对.OH和O2.-的清除能力由强至弱依次为花、根、叶、根茎。结果显示:中华补血草不同部位多酚提取物均具有较强的自由基清除能力,其中,根和花多酚提取物中高含量的原花色素和黄酮类成分分别与其自由基清除能力密切相关。

中华补血草根提取物抗氧化活性的初步研究

利用不同的方法(还原能力、DPPH法、TEAC法和脂质体过氧化)评价了中华补血草根提取物的抗氧化活性,同时测定了其总酚、黄酮和原花青素的质量分数.结果显示:中华补血草根提取物中总酚、黄酮和原花青素的质量分数分别为55.55%、24.60%、23.86%.同时发现,根提取物具有很强的还原能力、较强的清除DPPH自由基及ABTS自由基能力,当提取物质量浓度为0.20 mg/mL时,其在700 nm处的吸光值为1.472,对DPPH自由基的清除率达93.23%,TEAC值为0.69;中华补血草根提取物对大豆卵磷脂脂质体体系中所产生的共轭二烯氢过氧化物(CD-POV)的抑制率为79.03%(96 h),比槲皮素(84.67%)略低,而对丙二醛(MDA)的抑制率则为93.36%(96 h),同样略低于槲皮素(96.54%).可见,中华补血草根提取物具明显的抗氧化活性.

中华补血草根提取物抗四氯化碳急性肝损伤的实验研究

目的研究中华补血草根提取物(the Limonium sinense Ktze root extract,LSE)对小鼠急性肝损伤的防护作用及药理机制。方法建立小鼠四氯化碳(CCl_4)肝损伤模型,检测LSE对血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性的影响;观察肝细胞超微结构的变化;测定肝线粒体膜电位以及线粒体对高钙诱发肿胀的敏感性的变化。结果一定剂量(100～400 mg/kg)LSE能有效抑制CCl_4引起的小鼠血清AST及ALT活性的显著上升;明显减轻肝损伤引起的小鼠肝脏线粒体形态结构的破坏:抑制线粒体膜电位的降低以及线粒体对外加高钙诱发肿胀敏感性的下降。结论LSE对CCl_4诱导的急性肝损伤具显著的防护作用,其机理可能与保护肝脏线粒体有关。

NaCl胁迫对中华补血草活性氧清除能力的影响

[目的]探讨NaCl胁迫对中华补血草活性氧清除能力的影响。[方法]用500 mmol/L NaCl对中华补血草进行处理,分别测定叶片渗透势,MDA含量以及过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。[结果]MDA含量能维持较低水平,但在处理5 d时达到最高点,而3种抗氧化酶活性呈先升高后下降的趋势,在处理的第5天降至最低,与MDA含量测定结果一致。[结论]补血草在短时间NaCl处理时能依靠抗氧化酶系统及时清除活性氧,减少氧化损伤,维持生长。

中华补血草根提取物对D-GalN/LPS肝损伤的防护作用

目的研究中华补血草根提取物（the extract of Limonium sinense Ktze root，LSE）对小鼠急性肝损伤的防护作用及药理机制。方法建立小鼠D-氨基半乳糖／脂多糖（D-GalN／LPS）肝损伤模型，检测LSE对血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性的影响；观察肝脏组织超微结构的变化；测定肝线粒体膜电位以及线粒体对高钙诱发肿胀的敏感性的变化。结果一定剂量（100～400mg·kg^-1）LSE能有效抑制D-GalN／LPS引起的小鼠血清AST及ALT活性的显著上升；明显减轻肝损伤引起的小鼠肝脏组织超微结构的破坏；抑制线粒体膜电位的降低以及线粒体对外加高钙诱发肿胀敏感性的下降。结论LSE对D-GalN／LPS诱导的急性肝损伤具显著的防护作用，其机理可能与保护肝脏线粒体、抑制肝细胞凋亡有关。

异鼠李素诱导HCT116细胞自噬

目的研究中华补血草[Limonium sinense(Girard)Kuntz]中主要抗癌活性成分之一异鼠李素诱导人结直肠癌(HCT116)细胞自噬的机理。方法采用四唑盐比色法(MTT)检测异鼠李素对HCT116细胞的抑制作用,单丹尸磺酰胺(MDC)染色法检测自噬小泡的形成,蛋白印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白LC3的表达情况。结果异鼠李素明显抑制HCT116细胞的增殖,且呈剂量依赖性效应。异鼠李素处理24 h后,自噬小泡形成增多,LC3蛋白表达增强。3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理能够明显降低异鼠李素对肿瘤细胞的抑制作用。结论实验结果显示中华补血草中的异鼠李素可以诱导HCT116细胞发生自噬,导致细胞死亡。

中华补血草根总黄酮提取工艺的研究

目的优化中华补血草根总黄酮的提取工艺。方法分别运用微波法、超声波法和酶解法3种方案提取中华补血草根总黄酮,确定最佳提取方案,并运用正交实验进一步优化提取工艺。结果 3种方案中,微波提取法为最佳方案。微波提取法正交实验中,乙醇体积分数50%、料液比1∶30(g/m l)、微波功率528 W、微波时间30 s,是中华补血草根总黄酮较理想的提取条件(得率为22.19 mg/g)。结论微波法提取中华补血草根总黄酮方法简单可行,为进一步的工艺开发提供了参考。

中华补血草组培苗对NaCl胁迫的生长及生理响应

利用组织培养技术,在含不同浓度NaCl(0、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%)的MS增殖及生根培养基上对叶片分化苗进行盐胁迫处理,测定并分析了中华补血草的生长发育指标(株高、叶数、叶宽、植株鲜样质量、根长)和生理指标(MDA、SOD、Pro、Na^+、K^+)变化情况。结果表明:在不同浓度NaCl胁迫下,中华补血草组培苗的生长指标均未表现出明显的盐害症状。其中,根长随NaCl浓度增加而增加,1.0%浓度时主根最长,为对照的3.9倍;株高随NaCl浓度的增加呈先增加后降低然后再增加的趋势,0.6%浓度处理时最低,0.8%浓度处理时最高,1.0%浓度处理时有所下降,但与0.8%浓度处理的差异不显著;植株鲜样质量除0.2%处理与对照差异不显著外,其它处理均显著低于对照且这些处理间的差异不显著;叶数总体上随着盐浓度的增加而减少,1.0%浓度处理的叶数最少,为对照的1/3;叶宽随盐浓度的增加呈先降低后增加的趋势,0.4%浓度处理时叶最窄,0.8%浓度处理时叶最宽,但与1.0%处理的叶宽差异不显著。生理指标的测定结果表明:MDA含量、SOD活性和Pro含量均随NaCl浓度增加呈先增加后降低的趋势。MDA含量在0.6%浓度处理时最高,并显著高于对照,在1.0%浓度处理时最低,且显著低于对照;Pro含量也在0.6%浓度处理时最高,并显著高于对照,在1.0%浓度处理时含量虽有所下降,但也显著高于对照;SOD活性在0.8%浓度处理时最高,其次为1.0%浓度处理,二者间差异显著,且均显著高于对照。Na^+、K^+含量均显著高于对照,且Na^+、K^+含量总体上随NaCl浓度的增加而显著增加,K^+/Na^+比随NaCl浓度的增加出现先降低后增加的现象,在0.8%浓度处理时比值最小,1.0%浓度处理时K+/Na+比值显著增加。综上所述,组培苗可以耐含NaCl为1.0%浓度的盐汁生境,在其受到盐胁迫时,可以通过增加SOD活性和Pro含量以及维持高K^+/Na^+比值来保护细胞膜系统,增强吸水能力,缓解盐害。

中华补血草的组织培养和植株再生体系优化

为进行中华补血草优良品种的保存和培育,为从分子水平进行泌盐植物耐盐机理研究奠定基础,本研究以中华补血草无菌苗叶片为外植体,对中华补血草的组织培养和再生体系进行了优化。结果表明,以MS+6-BA 0.1 mg·L^(-1)+NAA 0.2 mg·L^(-1)培养基为愈伤组织诱导最佳培养基,愈伤组织诱导率为100%;以MS+6-BA 1.5 mg·L^(-1)+NAA 0.2 mg·L^(-1)为丛生芽诱导最佳培养基,诱导率为99.06%;丛生芽继代培养适宜的培养基为MS+NAA 0.2 mg·L^(-1)+6-BA 0.15 mg·L^(-1);以MS+NAA 0.2 mg·L^(-1)培养基为最佳生根率培养基,生根率为87%,且根系生长良好。

中华补血草抗氧化活性研究

中华补血草〔Limonium sinense(Girard)Kuntze〕是一种极具观赏价值的传统植物,同时以其重要的药用价值而受到人们的广泛关注。其化学成分种类多,含有多种的蛋白质、多糖、氨基酸、维生素、矿物质,还有少量的黄酮类、皂苷、有机酸、生物碱和鞣质等。研究发现,中华补血草不但具有止血、祛湿、清热等作用,更有良好的抗氧化活性,普遍认为与其含有丰富的多酚、黄酮类物质有关。

多种盐胁迫对中华补血草种子萌发及幼苗生长的影响

研究了不同浓度的NaCl、Na2SO4、Na2CO3及混合溶液对补血草种子萌发的影响。结果表明:低浓度的单盐胁迫有利于补血草种子的萌发,但在较高盐浓度条件下,随着盐浓度的提高,发芽率、幼苗叶长、根长均呈下降趋势,盐胁迫对根长比对叶长的抑制作用明显。

NaCl胁迫对补血草种子萌发及幼苗生长的影响

通过用不同浓度的NaCl胁迫,测定了补血草种子的发芽率、相对发芽率、发芽势、发芽指数、相对盐害率、叶长叶宽、芽长根长等指标。结果表明:低浓度的盐对补血草种子的各项指标影响不大,但高浓度的盐严重抑制了其萌发和幼苗生长。

沿海滩涂中华补血草化学成分研究

[目的]研究沿海滩涂中华补血草[Limonium sinense(Girard) Kuntz]全草的化学成分。[方法]利用萃取、制备薄层、反复硅胶、Sephadex-LH20、开放ODS柱色谱等方法进行分离纯化,根据理化常数测定及波谱分析对分离得到的化合物进行结构鉴定。[结果]分离得到11个化合物,分别鉴定为异鼠李素(1)、甘露醇(2)、β-谷甾醇(3)、齐墩果酸(4)、槲皮素(5)、槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷(6)、没食子酸乙酯(7)、山柰酚(8)、山柰酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(9)、(+)-儿茶素(10)、异鼠李素-3-芸香糖甙(11)。[结论]化合物4,6,7,10,11为首次从沿海滩涂中华补血草中分离得到。

中华补血草黄酮抑制白血病细胞增殖的初探

应用MTT法研究中华补血草不同浓度黄酮提取物对体外培养的人类白血病HL-60细胞株的增殖抑制作用。结果显示:不同浓度的中华补血草黄酮提取液作用人白血病细胞HL-60处理48h后,细胞的生长受到不同程度的抑制,并且随着浓度的升高抑制作用逐渐加强,呈现明显的量效关系,其IC50值为11.55μg/mL。

中华补血草生长及有机渗透调节物质对盐胁迫的响应

测定了0、100、200、400、500、600mmol/L NaCl浓度处理下中华补血草中重要有机渗透调节物质的含量变化;其中在100mmol/L NaCl浓度处理时SS含量增加,然后随盐浓度增加又逐渐减少,MDA含量则与其呈相反趋势;OA含量随盐浓度增加而下降,FAA和Pro含量随盐浓度而增加。结果表明低浓度的盐处理有利于中华补血草的生长,有机渗透调节物质对其在盐胁迫环境下生长起到了一定作用。

中华补血草金属硫蛋白基因的克隆及高盐处理下的表达模式分析

以中华补血草叶片为材料,提取其总RNA并反转录cDNA,并以cDNA为模板,克隆得到包含该基因完整开放阅读框的cDNA序列,序列分析表明,该基因开放阅读框长249 bp,编码82个氨基酸;该蛋白含有14个半胱氨酸,主要分布在蛋白质的N端和C端,呈CC,CX,CXXC形式排列.预测该蛋白分子质量为8 133.1 D;等电点为4.72;35～48位和52～68位氨基酸间有2个较强的疏水区.用3%NaCl处理补血草植株0、12、244、8、72h,利用半定量-PCR技术对该基因在盐胁迫下表达模式的分析表明,在3%NaCl处理条件下,随着盐处理处理时间的延长该基因的表达量逐渐升高,在盐处理48 h时表达量最高,之后其表达量出现下降.

补血草提取物在对抗对乙酰氨基酚诱导的肝损伤作用中的线粒体保护机制(英文)

探讨中华补血草水提物(LSE)对抗N-乙酰对氨基酚(N-acetyl-p-aminophenol,APAP)引起的肝细胞损伤的作用及其可能的线粒体机制.通过分组实验,测定血清中谷丙、谷草转氨酶(sALT,sAST)的活性和谷胱甘肽(GSH)的含量,同时制备和观察肝组织切片.其后进一步探讨线粒体在这一过程中所发生的变化,通过测定线粒体的肿胀、线粒体膜电位(MMP)的变化以及电压依赖性离子通道(VDAC)在转录水平的变化等,探讨其相应的线粒体作用机制.结果显示:100、200、400mg/kg的LSE可以剂量依赖性地对抗APAP引起的肝细胞损伤,而这种护肝活性可能与LSE对肝细胞线粒体的保护作用有关.同时还发现,线粒体的一个重要的外膜蛋白——VDAC的表达可能与之有着密切的关系.