不同来源细菌内毒素光谱特征及其对单核细胞免疫效应的影响

目的比较不同来源细菌内毒素的光谱特征以及对单核细胞的免疫效应差异。方法采用紫外吸收光谱和三维荧光光谱识别5种内毒素工作标准品中非内毒素成分如赋形剂(聚乙二醇8000和α-乳糖)和生物杂质(蛋白质和核酸),结合HL-60细胞Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)测试进一步对生物杂质成分进行识别,通过单核细胞活化反应测定法比较5种内毒素诱导HL-60细胞释放炎症因子白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)情况。结果内毒素工作标准品紫外吸收光谱中出现与赋形剂相关的吸收峰,三维荧光光谱中出现与赋形剂和蛋白质相关的荧光峰。HL-60细胞TLRs测试结果表明内毒素中蛋白质污染相较于核酸污染更明显。5种内毒素均引起HL-60细胞IL-6和IL-1β基因相对表达水平以及蛋白质量浓度升高,TNF-α基因相对表达水平及蛋白质量浓度未升高,结果表明相同或不同菌种来源的内毒素在同一效价条件下的炎症效应差异明显。结论光谱检测识别内毒素的赋形剂和蛋白质污染,HL-60细胞TLRs测试对生物污染成分进一步确认。内毒素分子结构差异以及非内毒素成分的蛋白质污染,导致相同或不同菌种来源内毒素诱导炎症因子释放能力产生差异。

检验用鲎试剂及重组试剂的现状与思考

目的通过研究检验用鲎试剂及重组试剂的使用及管理现状,为细菌内毒素检测和鲎试剂使用的科学有序发展提供参考。方法结合日常医疗产品检测和管理工作实践,梳理检测用鲎试剂的相关历史沿革和国内外监管现状,分析在鲎资源短缺情况下,细菌内毒素检测主要替代方法及其所用重组试剂的基本情况。结果与结论对目前在无菌医疗产品细菌内毒素检测领域可能面临的原材料短缺、监管方式有待进一步完善等主要问题进行总结,建议明确鲎试剂的管理归属、对医疗产品检验用鲎试剂的质量标准开展标准提高及生产质量管理的研究工作、加强鲎试剂检测替代方法相关试剂的监管等。

重组C因子法检测医疗器械中细菌内毒素的方法学研究

目的 探究重组C因子法检测不同医疗器械中细菌内毒素的适用性,为重组C因子法在医疗器械检验中的使用提供依据。方法 以2020年版《中国药典》四部9251细菌内毒素检查法应用指导原则为依据,对重组C因子检测法的准确度进行验证,并按GB/T 16886.1-2011中对医疗器械的分类,选取不同医疗器械样品,使用重组C因子试剂盒进行检测,与凝胶法及动态浊度法进行比对。结果 高、中、低浓度内毒素标准品采用重组C因子法的实测值与理论值具有良好的相关性,说明方法具有较好的准确度,且不同医疗器械产品使用重组C因子法和动态浊度法检测结果的比值在50%~200%范围内,回收率在50%~200%之间,与凝胶法检测结果也一致。结论 重组C因子法对于医疗器械中细菌内毒素的检测具有良好的适用性。

重组鲎C因子(rFC)替代鲎血制备鲎试剂的研究进展

鲎试剂广泛用于检测医药产品中的细菌内毒素,但由于鲎资源稀缺,制约了鲎试剂的生产。重组鲎C因子(rFC)作为鲎试剂的替代品,通过基因工程表达获得,可特异性检测内毒素,不依赖动物资源。综述了rFC的检测机制、发展历程及药典认可情况。研究表明,rFC方法具有特异性强、不依赖动物资源等优点,已渐被药典认可,是解决鲎试剂供应短缺的可靠方案,具有重要的应用前景。

细菌内毒素检查微量凝胶法的研究

目的通过研究微量凝胶法确定其能否满足《中华人民共和国药典》(2020年版)(简称“《中国药典》”)要求,作为现有细菌内毒素检查法的补充。方法依据《中国药典》四部“9101药品质量分析方法验证指导原则”规定,按照其项下“杂质测定”中“限度”项目具体要求,对微量凝胶法(5μL样品+50μL鲎试剂)进行专属性、检测限、耐用度3项内容进行验证,并采用凝胶法和微量凝胶法对85批样品进行品种适用性比较研究,对384批样品进行一致性比对研究。结果经方法学验证,微量凝胶法符合《中国药典》对定性方法的要求,微量凝胶法与凝胶法相比,品种适用性与一致性比对具有等效结果。结论微量凝胶法可以作为凝胶法的补充方法在我国推广。

动态显色法定量检测泊沙康唑原料药中细菌内毒素的含量

目的:以动态显色法定量检测不溶于水的泊沙康唑原料药中细菌内毒素的含量。方法:根据注射液临床用量从严拟订沙康唑原料药限值为0.25 EU·mg^(-1),以稀释液(二甲基亚砜∶RIPA强裂解液=1∶1)为溶剂处理泊沙康唑原料,采用两个不同厂家的动态显色法鲎试剂,依据《中国药典》2020年版四部通则1143(方法2光度测定法之动态显色法)要求,确定样品不干扰的浓度,最后对3批样品的细菌内毒素进行定量检测。结果:两个厂家的鲎试剂标准曲线|r|均大于0.980;样品质量浓度≤0.02 mg·mL^(-1)时,细菌内毒素回收率在范围内;3批样品的细菌内毒素定量检测结果均符合要求。结论:以0.25 EU·mg^(-1)为限值,动态显色法用于不溶于水的泊沙康唑原料药细菌内毒素定量检测,方法可行,过程可控。

柴胡总皂苷抗内毒素活性研究

目的 :探讨柴胡总皂苷 (BCS)抗内毒素活性。方法 :从柴胡中提出柴胡总皂苷 ,用体外鲎试验法、细菌内毒素致兔热模型、细菌内毒素致卡介苗增敏小鼠毒性证实其抗内毒素活性。结果 :体外鲎试验法显示将 5 0mg·ml 1的柴胡总皂苷溶液稀释至 32倍仍有直接破坏内毒素作用 ;解热实验显示 ,BCS +LPS组、模型组 (LPS)、BCS组的最大升温和平均升温分别为 0 0 5℃和 0 75℃ ,0 0 1℃和 - 0 2 5℃ ,0 4 9℃和 - 0 37℃ ,BCS +LPS组与模型组相比差异显著 (P <0 0 1) ;细菌内毒素致小鼠毒性实验显示 ,BCS +LPS组死亡率 (13 3% )大于BCS组 (5 0 % ) ,但与模型组 (90 0 % )相比 ,差异显著 (P <0 0 1)。结论 :柴胡总皂苷具有抗内毒素活性。

鲎试剂的研究及应用进展

鲎试剂已广泛用于细菌内毒素的检验,本文介绍了鲎试剂的生产、分类,用于细菌内毒素检查的反应原理和检测方法、应用领域以及国内外鲎试剂生产和质量的现状和研究进展,并提出了我国鲎试剂应用中急需解决的问题。

DNA疫苗的细菌内毒素检测

目的 :考察DNA疫苗细菌内毒素的检查方法的可行性及DNA疫苗的干扰作用。方法 :干扰试验和对比试验。结果 :供试品阴性对照系列样品溶液无干扰作用 ,与家兔法结果一致。结论 :将疫苗稀释 2倍可用灵敏度为 0 5EU

58例输液反应原因分析

目的分析58例临床输液反应的原因,寻找预防措施,减少输液反应的发生。方法对我院近两年发生的58例输液反应从致热原、细菌、药物因素、输液器具、季节、患者年龄等方面进行分析。结果对输液反应的药液进行热原检测,共有5例阳性;血培养7例阳性;药液细菌培养2例阳性,同一批号未开封药液细菌培养无细菌生长;输液器及头皮针细菌培养和热原检测全部阴性;引起输液反应的药物以中药制剂、大分子物质、血液制品及含K+的药物为主;秋季为高发季节;发生率高的为中老年人。结论引起输液反应的原因复杂,严格质量控制和无菌操作,以减少输液反应的发生。

重组C因子法检测细菌内毒素的方法适用性研究

目的考察重组C因子法的品种适用性,以加快该方法的推广。方法选取有代表性的6个典型品种,每个品种3个批次,进行重组C因子法干扰试验,并经过国内4个实验室进行复核验证。以回收率为评价指标,以2015年版《中国药典》为评价标准,总结4个实验室应用该方法产生的问题和解决策略。结果 6个品种18个批次在验证实验室和3个复核实验室的回收率结果均在《中国药典》要求的50%～200%范围内,符合干扰试验要求;该方法应用中的常见问题和解决策略共有7项21条。结论重组C因子法在国内4个实验室对6个典型品种具有较好的品种适用性。

鲎试剂方法检测木糖醇注射液中细菌内毒素

目的:建立快速的木糖醇注射液中细菌内毒素鲎试剂检查法,替代家兔热原检查法。方法:用不同厂家的鲎试剂对不同批号的木糖醇注射液分别进行干扰试验,考察确立木糖醇注射液细菌内毒素检查法。结果:5%木糖醇注射液不干扰鲎试剂与细菌内毒素的凝集反应,检查结果全部为阴性,结果准确可靠。结论:木糖醇注射液可以用鲎试剂检查法取代家兔热原检查法。

红花注射液细菌内毒素的检测

目的:建立快速的红花注射液细菌内毒素检查法来替代热原检查法。方法:用不同厂家的鲎试剂对不同批号的红花注射液分别进行干扰试验,考察确立红花注射液内毒素检查法。结果:将红花注射液稀释40倍可消除干扰作用,结果准确可靠。结论:利用细菌内毒素检查法代替红花注射液热原检查是可行的。

不同浓度氢氧化钙溶液对细菌内毒素降解作用的比较研究

目的研究3种不同浓度的氢氧化钙溶液对细菌内毒素的降解作用。方法选用E.coli标准内毒素稀释成10Eu/ml后分别与3种不同浓度的氢氧化钙溶液混合,37℃水浴,经60min、120min作用后采用动态浊度法鲎实验检测剩余内毒素浓度。结果在相同作用时间内,氢氧化钙溶液浓度越高降解作用越强,结果有极显著性差异;同一种浓度氢氧化钙溶液作用时间越长其降解作用越强,结果有显著性差异。结论氢氧化钙作为根管治疗药物具有降解G-菌内毒素的作用,此降解作用具有浓度和时间的依赖性。

薄芝糖肽注射液中细菌内毒素检测方法的研究

目的建立薄芝糖肽注射液的细菌内毒素检查方法。方法用不同厂家的鲎试剂对薄芝糖肽注射液分别进行干扰试验,考察确立薄芝糖肽注射液细菌内毒素检查法。结果用灵敏度为0 .2 5EU/ml的鲎试剂,将薄芝糖肽注射液稀释2 4倍可消除干扰作用,与热原检查法结果一致。

中药类药品细菌内毒素检测的研究现状

我国利用鲎试验法检测中药类药品细菌内毒素的研究水平较高 ,但是也有不足。由于中药注射剂生产工艺和其本身的特点 ,造成了注射剂所含成分复杂 ,对鲎试验法的影响也多 ,研究表明 ,大多数中药注射剂对鲎试验法都有干扰 ,尤其是不同的生产条件和不同的生产工艺 ,使得同一种药品的不同生产厂家 ,甚至不同批号间 ,对鲎试验法的干扰都有不同。同一药品品种在不同实验室或不同的生产条件及对药品质量控制情况的不同 ,用鲎试验法检测的结果存在差异 ,我国的科研院所 ,医药院校很少涉足该方面的研究 ,使研究水平不高 ,实验条件参差不齐 ,也是导致试验结果有差异的因素之一。建议我国鲎试验法的研究 ,应建立一套完整规范的实验操作规程 ,有一个比较规范的评价体系 。

盐酸莫西沙星注射液细菌内毒素检查方法学研究

目的研究建立盐酸莫西沙星注射液的细菌内毒素检查方法。方法按《中国药典》2010年版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法及相关规定,使用2个不同厂家的鲎试剂对某制药有限公司生产的盐酸莫西沙星注射液进行了细菌内毒素检查法的方法学研究。结果调节样品pH值至6.0-8.0,使用稀释剂Ⅰ稀释样品浓度至0.625mg·mL^-1时,可排除干扰作用。结论盐酸莫西沙星注射液可适用细菌内毒素检查法。拟定标准：取本品,依法检验（《中国药典》2010年版二部附录XI E）,每1mg盐酸莫西沙星中含细菌内毒素的量应小于0.8EU。

灯盏细辛注射液中细菌内毒素检测方法的研究

目的对灯盏细辛注射液进行鲎试剂检查法实验,建立灯盏细辛注射液细菌内毒素检查法。方法用不同厂家的鲎试剂对不同批号的灯盏细辛注射液分别进行干扰试验,考察确立灯盏细辛注射液细菌内毒素检查法。结果将灯盏细辛注射液稀释60倍以上可消除干扰作用,检查结果全部为阴性,结果准确可靠。结论灯盏细辛注射液可以用鲎试剂检查法取代家兔热原检查法。

肾必氨注射液细菌内毒素鲎试剂检查法

目的:建立肾必氨注射液细菌内毒素鲎试剂检查法。方法:用不同厂家的鲎试剂对不同批号的肾必氨注射液分别进行干扰试验,考察肾必氨注射液细菌内毒素检查的影响因素。结果:肾必氨注射液稀释2倍后,不干扰鲎试剂与细菌内毒素的凝集反应。结论:肾必氨注射液可以用鲎试剂检查法取代家兔热原检查法。

特异性鲎试剂检测人参多糖注射液中的细菌内毒素

目的 :建立快速的人参多糖注射液细菌内毒素检查法。方法 :用特异性鲎试剂对不同批号的人参多糖注射液分别进行干扰试验 ,考察确立人参多糖注射液内毒素检查法。结果 :将人参多糖注射液稀释 2 5倍利用特异性鲎试剂检测可消除干扰作用 ,结果准确可靠。结论 :选用特异性鲎试剂 ,细菌内毒素检查法代替人参多糖注射液热原检查是可行的。