CLP-19预处理RAW264.7细胞对炎性因子的调节作用初探

目的探讨CLP-19对RAW264.7细胞的免疫调节及其在炎症中的作用。方法以50μg/ml的CLP-19作用于RAW264.7细胞后不同时间(0.5、1、2.5、5、10和20 h),及不同质量浓度(1、10、50、100和200μg/ml)的CLP-19作用于RAW264.7细胞20 h,观察细胞TNF-α、IL-10、MCP-1、ICAM-1的mRNA水平的变化情况。另用50μg/ml的CLP-19预处理细胞5、10、和20 h后,再以LPS刺激,4 h后提取细胞RNA,观察上述细胞因子的变化,以CLP-19与LPS预混组为对照。结果 CLP-19单独作用于RAW264.7细胞后,CLP-19对MCP-1的mRNA调节呈显著的时间依赖性和剂量依赖性,高剂量的CLP-19可上调ICAM-1、TNF-α和IL-10的mRNA水平。以CLP-19预处理RAW264.7细胞不同时间(5、10和20 h)后,均可显著抑制LPS所刺激的炎症因子上调,各预处理组间无统计学差异。结论 CLP-19能改变细胞的免疫状态,并抑制LPS诱导的免疫反应。

鲎抗内毒素因子模拟肽中和内毒素的体外研究

目的体外研究以评价鲎抗内毒素因子模拟肽(modelingpeptidesfromthelimulusanti-lipopolysaccharidefactor,MPLALFs,Ms)中和内毒素(lipopolysaccharide/endotoxin)的活性。方法Ms结合内毒素的活性采用生物传感器技术测定,结合力以反应速率值(Kon)和Kd值表示;中和内毒素活性以鲎试验动态浊度法进行分析。结果生物传感器技术测定结果表明,M1、M2、M3、M4、M6、M8、M10、M0与LPS055∶B5的亲和力反应速率分别为(840±5·716)、(549±6·532)、(842±6·530)、(627±2·450)、(996±5·716)、(814±8·982)、(556±1·633)和(635±2·449)arcsecond(弧度/秒),以M4活性最强,M1活性最弱。M4与LPS的反应Kd值为72·377μmol/L。鲎试验结果与生物传感器测定结果基本一致。结论M4具有较强的体外中和内毒素活性。

鲎抗内毒素因子模拟肽4的体外生物活性实验研究

目的研究鲎抗内毒素因子模拟肽4(m ode ling peptide 4 from the L im u lus an ti-lipopo lysaccharide factor,M 4)体外中和内毒素的活性。方法研究以对内毒素高亲和力的多粘菌素B(po lym yx in B,PM B)为对照,M 4设80、40、20、10、5μm o l/L浓度,结合内毒素的活性以生物传感技术分析;中和内毒素的能力以鲎试验动态浊度法测定;对LPS刺激THP-1细胞释放TNF-α的影响采用EL ISA试剂盒定量观察。结果M 4具有较好的内毒素亲和力和中和活性,在5、10、20、40和80μm o l/L浓度时对内毒素2EU/m l(1EU约等于100pg)的中和率分别为43.44%、47.76%、63.12%、81.54%和84.54%,呈明显的浓度梯度效应,20μm o l/L以上浓度时与PM B作用相当。对THP-1细胞释放TNF-α的影响结果显示,M 4可明显抑制LPS刺激的TNF-α释放,但M 4本身具有诱导THP-1细胞释放TNF-α的作用。结论M 4具有较强的中和内毒素活性,值得进一步深入研究。