LINC01980在宫颈癌中的表达及调控LIN28B表达促进宫颈癌生长的作用机制

目的:探讨长链非编码RNA01980(LINC01980)在宫颈癌中的表达及其调控LIN28B促进宫颈癌生长的作用机制。方法:生物信息学工具iBio Tools V5.0(http://www.chrisapp.xyz:3838/R/AnnoE2/)预测宫颈癌差异表达基因,catRAPID数据库(http://service.tartaglialab.com/page/catrapid_group)在线预测相关RNA结合蛋白。选取2020年1月至2021年5月青海红十字医院收治的病理学诊断为宫颈癌的患者60例作为宫颈癌组,选取同期健康体检者(宫颈未发生病变)60例作为健康组,qRTPCR检测两组研究对象血清LINC01980水平;体外培养宫颈癌细胞Hela,转染并分为Lnc-NC组、si-LINC01980组、si-LINC01980+LIN28B-NC组和si-LINC01980+LIN28B组,对照组仅添加新鲜培养液。RNA pull-down和RNA免疫共沉淀试验检测LINC01980与LIN28B相互作用;qRT-PCR检测Hela细胞LINC01980、LIN28B mRNA表达;CCK-8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)表达。结果:生物信息学工具iBio Tools V5.0预测结果表明,LINC01980在宫颈癌组织中表达上调;与健康组比较,宫颈癌组血清LINC01980 mRNA表达显著升高(P<0.05);生物信息学网站(http://service.tartaglialab.com/page/catrapid_group)预测结果表明,LINC 01980 RNA序列与LIN28存在结合位点,LINC01980与LIN28B存在相互作用;与对照组比较,si-LINC01980组Hela细胞LINC01980、LIN28B mRNA表达、细胞活力、S期、G2/M期细胞百分比、蛋白CyclinD1、CDK4、LIN28B表达显著降低,细胞凋亡率、G0/G1期细胞百分比、蛋白caspase-3表达显著升高(P<0.05);与si-LINC01980组比较,si-LINC01980+LIN28B组Hela细胞活力、S期、G2/M期期细胞百分比、蛋白CyclinD1、CDK4、LIN28B表达显著升高,细胞凋亡率、G0/G1期细胞百分比、caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论:LINC01980可能通过调控LIN28B影响宫颈癌细胞增殖和凋亡,参与宫颈癌发生发展,可能是宫颈癌治疗的潜在靶点。

Lin28B和C-myc蛋白在喉鳞癌中的表达及其与临床病理特征和预后的相关性

目的:喉鳞癌是头颈部常见恶性肿瘤。将原癌基因与抑癌基因作为研究的突破口从而筛选恶性肿瘤治疗的靶基因是如今肿瘤研究焦点之一。寻找喉鳞癌治疗及预后相关的靶基因分子至关重要。本研究旨在检测Lin28B和C-myc蛋白在喉鳞癌及其对应癌旁组织中的表达,初步探讨其与喉鳞癌临床病理特征及预后的关系。方法:采用免疫组织化学法检测102例喉鳞癌患者的癌组织及其对应的90例癌旁组织中Lin28B与C-myc蛋白的表达情况,分析Lin28B与C-myc蛋白在喉鳞癌中表达的相关性及其表达水平与喉鳞癌临床病理特征之间的关系。采用Kaplan-Meier法分析喉鳞癌患者术后生存率与Lin28B和C-myc蛋白表达水平之间的关系。结果:与癌旁组织相比,Lin28B、Cmyc蛋白的表达水平在喉鳞癌组织中均显著升高(均P<0.05)。且二者在喉鳞癌中表达存在正相关关系(r=0.476,P<0.05)。Lin28B蛋白的表达与喉鳞癌患者年龄、淋巴结转移情况、临床分期、肿瘤大小和病理分化程度密切相关(均P<0.05)。C-myc蛋白的表达与喉鳞癌患者淋巴结转移情况、临床分期、肿瘤大小和病理分化程度密切相关(均P<0.05)。生存分析显示高表达Lin28B(P=0.001)或C-myc蛋白(P<0.001)的患者术后生存率较低,差异有统计学意义。结论:Lin28B及C-myc蛋白在喉鳞癌组织中高表达且呈正相关,两者均与患者的淋巴结转移情况、临床分期、肿瘤大小、病理分化程度及预后相关,提示Lin28B和C-myc可能都参与喉鳞癌的发生、发展。

The role of LIN28B in tumor progression and metastasis in solid tumor entities

LIN28B is an RNA-binding protein that targets a broad range of microRNAs and modulates their maturation and activity.Under normal conditions,LIN28B is exclusively expressed in embryogenic stem cells,blocking differentiation and promoting proliferation.In addition,it can play a role in epithelial-to-mesenchymal transition by repressing the biogenesis of let-7 microRNAs.In malignancies,LIN28B is frequently overexpressed,which is associated with increased tumor aggressiveness and metastatic properties.In this review,we discuss the molecular mechanisms of LIN28B in promoting tumor progression and metastasis in solid tumor entities and its potential use as a clinical therapeutic target and biomarker.

瑞芬太尼在子宫内膜癌细胞增殖及迁移中的调节机制及对miR-212-3p/LIN28B通路的影响

目的:探讨子宫内膜癌细胞采用瑞芬太尼的干预效果及对增殖、迁移与miR-212-3p/LIN28B通路的影响。方法:①子宫内膜癌Ishikawa细胞放置在4个试管中,给予瑞芬太尼5、50、500 ng/ml 24 h培养,以瑞芬太尼0 ng/ml为对照组;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,实时荧光PCR法检测miR-212-3p、LIN28B mRNA表达水平,Western blot法检测细胞周期蛋白(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及LIN28B蛋白表达水平,采用Transwell法测定四组细胞迁移及侵袭率。②子宫内膜癌Ishikawa细胞中转染miR-NC、miR-212-3p mimics、si-NC及si-LIN28B,并采用500 ng/ml瑞芬太尼处理,采用上述方法评估细胞的增殖和迁移。结果:四组24 h细胞增殖率比较无统计学差异(均P>0.05);且细胞增殖抑制率呈瑞芬太尼药物剂量依赖性;实时荧光PCR法测定结果表明:四组不同浓度瑞芬太尼处理后miR-212-3p mRNA呈上升趋势(均P<0.05),而LIN28B mRNA水平呈下降趋势(P<0.05),并呈剂量依赖性;Western blot结果表明:四组Cyclin D1、MMP-2、MMP-9及LIN28B蛋白表达比较差异具有统计学意义(均P<0.05),随着瑞芬太尼药物剂量增加,其表达水平呈下降趋势;随着瑞芬太尼浓度增加,迁移细胞数与侵袭细胞数下降明显,并表现出剂量依赖性;miR-NC组细胞增殖抑制率低于miR-212-3p mimics组(P<0.05),迁移细胞数、侵袭细胞数高于miR-212-3p mimics组(均P<0.05);抑制LIN28B蛋白后si-LIN28B细胞增殖抑制率高于si-NC组(P<0.05),迁移细胞数、侵袭细胞数及LIN28蛋白均低于si-NC(均P<0.05);瑞芬太尼500 ng/ml+anti-miR-212-3p组miR-212-3p、细胞增殖抑制率低于瑞芬太尼500 ng/ml+anti-miR-NC组(均P<0.05),LIN28B蛋白、迁移细胞数及侵袭细胞数高于瑞芬太尼500 ng/ml+anti-miR-NC组(均P<0.05)。结论:瑞芬太尼能抑制子宫内膜癌细胞生物学活性,可能与药物调控miR-212-3p/LIN28B通路有关。

血清miR-384、LIN28B在糖尿病视网膜病变中的表达及其诊断价值分析

目的探讨糖尿病视网膜病变(DR)患者血清中microRNA-384(miR-384)、LIN28B的表达水平及其诊断价值。方法选取2020年1月至2021年11月于本院确诊的100例2型糖尿病患者为研究对象,根据是否发生视网膜病变分为非DR组(40例)、DR组(60例);另选取同期本院的健康体检者40例作为对照组。采用qRT-PCR法检测血清miR-384、LIN28B相对表达水平,并分析两者与DR患者临床资料的关系。采用Pearson法分析DR患者血清中miR-384与LIN28B表达的相关性。采用Logistic回归分析DR发生的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-384、LIN28B水平对DR患者的诊断价值。结果DR组患者血清中miR-384水平明显低于非DR组和对照组(P<0.05),且非DR组低于对照组(P<0.05);DR组患者血清中LIN28B水平明显高于非DR组和对照组(P<0.05),且非DR组高于对照组(P<0.05)。miR-384、LIN28B表达水平与患者糖尿病病程、血糖有关(P<0.05)。Pearson法分析显示,DR患者血清中miR-384与LIN28B表达呈负相关(r=-0.296,P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,miR-384、LIN28B是DR发生的独立影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,miR-384、LIN28B及二者联合检测诊断DR患者的曲线下面积(AUC)分别为0.625、0.646、0.682,特异度分别为67.50%、85.00%、97.50%。结论DR患者血清中miR-384呈低表达,LIN28B呈高表达,miR-384、LIN28B均是DR发生的影响因素,并且有望成为诊断DR的潜在血清学指标。

Lin28B对三阴性乳腺癌侵袭转移的影响及机制

目的 探讨Lin28B对三阴性乳腺癌侵袭转移的影响并分析其潜在机制。方法 经病理证实的80例三阴性乳腺癌患者、手术治疗后获取癌组织及癌旁组织,采用免疫组织化学法检测癌组织、癌旁组织中Lin28B表达、采用实时荧光定量-PCR(RT-PCR)法检测Let-7家族成员微小RNAs(miRNA)相对表达量,并比较两项指标在不同浸润程度、转移情况癌组织中的表达水平。结果 乳腺癌组织中Lin28B阳性率高于癌旁组织(P <0.05);随着肿瘤浸润深度的增加,乳腺癌组织中Lin28B阳性率依次增加(52.17%、74.36%、88.89%,P <0.05);有远处转移乳腺癌患者的肿瘤组织中Lin28B蛋白阳性率高于无远处转移患者(P <0.05)、有淋巴结转移乳腺癌患者肿瘤组织中Lin28B蛋白阳性率高于无淋巴结转移患者(P <0.05);乳腺癌组织中Let-7家族各成员miRNA相对表达量均低于癌旁组织(P <0.05),随着浸润深度的增加,乳腺癌组织中Let-7家族成员miRNA相对表达量依次降低(P <0.05);乳腺癌有远处转移或淋巴结转移患者的Let-7家族成员miRNA相对表达量低于无转移患者(P <0.05)。结论 Lin28B与三阴性乳腺癌的侵袭及转移相关,其作用机制可能与过表达的Lin28B蛋白靶向调节(下调) Let-7家族成员表达水平有关。

胃癌组织中LIN28B和c-myc的表达及其临床意义

目的检测胃癌组织中LIN28B和c-myc的表达,分析其临床意义,并初步探讨其可能的作用机制。方法应用免疫组化SP法检测90例胃癌和30例癌旁正常胃黏膜石蜡组织中LIN28B和c-myc蛋白的表达水平;应用实时荧光定量PCR方法和Western blotting法检测23例新鲜胃癌组织及相应癌旁正常组织中LIN28B和c-myc mRNA及蛋白的表达量。结果胃癌组织中LIN28B mRNA(△Ct:6.33±2.54)及蛋白(0.601±0.22)的表达水平显著高于癌旁正常组织(△Ct:1.05±0.64,0.124±0.088,P<0.05);LIN28B在胃癌组织中表达阳性率(76.7%,69/90)较癌旁正常胃黏膜石蜡组织中阳性率(66.7%,20/30)高,差异有统计学意义(H=4.195,P<0.05);c-myc在胃癌组织中表达阳性率(81.1%,73/90)较正常胃黏膜石蜡组织中阳性率(60.0%,18/30)高,差异有统计学意义(H=3.887,P<0.05);LIN28B蛋白表达与胃癌分化程度、淋巴结转移、浸润深度、临床分期有相关性(P<0.05),与年龄、性别、肿瘤大小、部位无相关性(P>0.05);LIN28B与c-myc在胃癌组织中的表达有显著相关性(r=0.252,P<0.05)。结论LIN28B和c-myc基因的表达及相互作用与胃癌的发生、发展及生物学行为密切相关,对判断预后有参考作用,其机制可能与胃癌干细胞及LIN28B/let-7/c-myc信号环路有关。

NF-κBp65、Lin28B和IL-6在不同临产状态孕妇外周血中的表达

目的:探讨NF-κBp65、Lin28B和IL-6在早产和足月妊娠孕妇外周血中的表达情况,进一步明确其在分娩发动中的预测价值。方法:采集先兆早产组、早产临产组、足月临产组和正常妊娠组各25例孕妇的外周血血清,采用ELISA法检测并比较4组血清中NF-κBp65、IL-6、Lin28B的表达情况;同时将先兆早产组与早产临产组、临产组(包括早产临产组和足月临产组)与正常妊娠组NF-κBp65、IL-6、Lin28B表达水平行直线相关分析。结果:(1)NF-κBp65的表达水平在早产临产组中最高(13.99±0.72 ng/ml),IL-6的表达水平在早产临产组中最高(54.34±6.66 pg/ml),Lin28B的表达水平在正常妊娠组中最高(10.67±0.52 ng/ml),经LSD-t检验,4组中NF-κBp65、IL-6及Lin28B的表达水平两两间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)先兆早产组和早产临产组中NF-κBp65与IL-6的表达均呈正相关(r=0.557,P<0.05;r=0.587,P<0.05),NF-κBp65与Lin28B的表达及IL-6与Lin28B的表达均无相关性(P>0.05)。(3)临产组中NF-κBp65与IL-6的表达呈高度正相关(r=0.899,P<0.05),NF-κBp65与Lin28B的表达呈高度负相关(r=-0.863,P<0.05);IL-6表达水平与Lin28B的表达呈高度负相关(r=-0.798,P<0.05)。结论:IL-6和NF-κBp65对早产临产具一定预测价值;Lin28B与胎儿成熟程度相关,对早产无预测价值。

Lin28B/let-7d环路调控成纤维细胞功能参与肺纤维化发生

目的研究Lin28B/let-7d环路诱导肺成纤维细胞增殖、分化的作用及分子机制,为临床肺纤维化的治疗提供新的策略。方法气管注射博来霉素(bleomycin,BLM)造成小鼠肺纤维化模型;血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5)纤维性变;qRT-PCR检测组织及细胞中Lin28B、collagen 1α1、collagen 3α1变化;Western blot检测Lin28B蛋白表达;MTT、Edu染色和免疫荧光实验分别检测细胞活力、增殖及成纤维细胞向肌成纤维细胞的转变。结果 Lin28B在肺纤维化小鼠和细胞中表达明显升高。Lin28B可诱导MRC-5细胞胶原合成增加,而过表达let-7d则减轻Lin28B的这一作用。进一步研究发现,Lin28B可诱导成纤维细胞增殖,并促进成纤维细胞向肌成纤维细胞转变,这一作用是通过抑制let-7d来实现的。结论 Lin-28B通过抑制let-7d进而促进成纤维细胞增殖、分化,最终增加成纤维细胞胶原合成,诱发肺纤维化的发生,Lin28B可能作为肺纤维化的治疗新靶点。

宁夏回、汉族群体LIN28B基因多态性

目的探讨LIN28B基因rs314277和rs314276位点在宁夏地区回、汉族群体中及不同性别间的分布特征。方法研究对象来自宁夏医科大学2011级健康学生共705例,其中男性回、汉族分别为144例和167例,女性回、汉族分别为188例和206例。SNPs分型均采用基因测序来检测。结果宁夏回族群体LIN28B基因两个多态位点基因型频率及等位基因频率分别为:男性rs314277(AC:4.5%,CC:38.9%;A:2.3%,C:41.1%);rs314276(AA:2.7%,AC:21.4%,CC:19.3%;A:13.4%,C:30.0%);女性rs314277(AA:0.6%,AC:7.5%,CC:48.5%;A:4.4%,C:52.3%);rs314276(AA:3.3%,AC:28.9%,CC:24.4%;A:17.8%,C:38.9%);宁夏汉族群体LIN28B基因两个多态位点基因型频率及等位基因频率分别为:男性rs314277(AC:3.2%,CC:41.6%;A:1.6%,C:43.2%);rs314276(AA:4.6%,AC:17.4%,CC:22.8%;A:13.3%,C:31.5%);女性rs314277(AC:4.6%,CC:50.7%;A:2.3%,C:52.9%);rs314276(AA:4.8%,AC:18.8%,CC:31.6%;A:14.2%,C:41.0%)。结论宁夏人群LIN28B基因rs314277多态性位点等位基因频率在回、汉族之间差异有显著性(P<0.05);rs314276多态性位点基因型频率在回、汉族之间差异有显著性(P<0.05);LIN28B基因两个多态性位点在宁夏不同性别之间差异无显著性(P>0.05);宁夏人群两个多态性位点基因型和等位基因型频率的分布与人类基因组计划扫描所得不同种族人群相比差异有显著性(P<0.05)。

LIN28B 在结肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨结肠癌组织中LIN28B的表达及其临床意义。方法选择美国Biomax的结肠癌及正常组织组合微阵列芯片及2003年1月至2004年12月南方医科大学南方医院的149例手术切除结肠癌石蜡标本作为研究对象。用免疫组化法检测组织芯片和石蜡切片中LIN28B蛋白表达并评分。采用χ2检验比较不同LIN28B表达水平和结肠癌病理性特点包括组织分级、恶性肿瘤(tumor,node,metastasis,TNM)分期及淋巴/远处转移之间的关系。结果 LIN28B在结肠癌组织中相比于正常结肠组织高表达,其高表达与肿瘤的低分化、TNMⅢ-Ⅳ期、结肠癌局部淋巴结转移及远处转移有关。多因素Logistic回归分析显示TNM分期是LIN28B高表达的独立危险因素。结论 LIN28B表达与结肠癌病理特征密切相关,有望作为判断结肠癌患者预后的指标。

高危型HPV感染与食管鳞癌组织中Lin28b表达的相关性研究

目的:研究人乳头瘤状病毒(HPV)在新乡地区食管鳞癌组织中的感染情况和Lin28b表达的关系。方法:采用基因芯片技术检测114例食管鳞癌组织及癌旁食管正常组织中HPV亚型感染情况,免疫组化SP法检测Lin28b的表达。结果:114例食管鳞癌组织及癌旁食管正常组织中HPV感染阳性率分别为63.2%、6.0%,Lin28b的检出率分别为66.7%、2.0%,差异均有统计学意义(P<0.05);食管鳞癌存在HPV16、18和52三种亚型感染。HPV感染和Lin28b蛋白表达与食管鳞癌分化程度正相关;Lin28b蛋白表达与食管鳞癌浸润深度、淋巴结转移有关。结论:HPV感染食管鳞癌组织与Lin28b蛋白表达存在一定的相关性,可能与食管鳞癌发生、发展有关。

Lin28B的高表达与膀胱癌的恶性程度及预后相关

目的探讨膀胱癌组织中Lin28B的异常表达与膀胱癌病理学分级、临床分期及预后的关系。方法应用免疫组织化学方法检测Lin28B在75例膀胱癌组织及10例癌旁组织中的表达;采用卡方检验或精确概率法分析Lin28B在膀胱癌及癌旁组织中的差异,以及膀胱癌不同病理学分级、不同临床分期中Lin28B的阳性率的差异。并采用log-rank检验及Cox回归分析Lin28B的表达与膀胱癌患者预后的关系。结果 Lin28B在64%(48/75)膀胱癌组织中表达阳性,在癌旁组织中表达为阴性(0),组间差异具有统计学意义(P<0.001)。病理学分级恶性程度高的标本,Lin28B的阳性率高,组间差异具有统计学意义(P=0.007)。临床分期进展程度高的标本中,Lin28B的阳性率高,组间差异具有统计学意义(P=0.030)。Log-rank检验及Cox回归分析示Lin28B表达阳性是预后不良的独立影响因素。结论 Lin28B在膀胱癌中高表达,且与膀胱癌的病理学分级、临床分期及预后密切相关。

三阴性乳腺癌中Lin28B的表达和临床意义

目的探讨三阴性乳腺癌中Lin28B的表达情况及其临床意义。方法选取2008年1月~2013年12月我院收治的三阴性乳腺癌96例患者为观察对象,采用免疫组织化学方法检测癌组织和癌旁组织中Lin28B蛋白的表达,分析Lin28B蛋白表达与三阴性乳腺癌患者病理特征的相关性。结果癌组织Lin28B的阳性率为70.8%,在癌旁组织Lin28B的阳性率为29.2%,两者的阳性率差异有统计学意义(P<0.05);Lin28B蛋白表达与三阴性乳腺癌患者的年龄、肿瘤分期和月经状态无关(P>0.05),但与患者的肿瘤分化程度、远处转移、淋巴结转移、Ki67表达成正相关(P<0.05)。结论 Lin28B的表达与三阴性乳腺癌的发生、发展有关,可能影响病情的发展和患者的预后。

Lin28B介导肝癌细胞中HBx相关Let-7沉默

目的:Let-7在多种肿瘤包括肝癌中低表达,扮演抑癌基因角色。我们的前期研究提示HBx(人乙肝病毒X蛋白)在肝癌细胞中显著下调Let-7表达,但内在机制有待进一步揭示。Lin28B能负调控Let-7的转录后加工成熟,这促使我们验证其是否介导了肝癌细胞中HBx相关的Let-7低表达。方法:qRT-PCR检测c-Myc和Lin28B特异siRNA转染HepG2-HBx细胞(HBx稳定转染的HepG2细胞)前后Let-7的表达变化,同时在肝癌细胞和或组织中验证HBx和Lin28B的表达相关性。最后,利用细胞周期及增殖实验检测Lin28B对HepG2细胞的生物学影响。结果:Lin28B高表达于HBx稳定/瞬时转染的HepG2肝癌细胞及HBV阳性的肝癌和肝硬化组织。Lin28B介导了HBx在HepG2肝癌细胞中对Let-7的抑制。Lin28B特异siRNAs可阻滞细胞周期进展进而抑制HepG2细胞生长。结论:HBx在肝癌细胞中通过诱导Lin28B表达而抑制Let-7。Lin28B可能成为治疗HBV相关肝癌的新靶点。

HACE1和LIN28B基因单核苷酸多态性与中国汉族儿童神经母细胞瘤易感性的关联研究

目的 探讨HACE1和LIN28B基因多态与中国汉族儿童神经母细胞瘤的相关性。方法 采用病例对照研究,收集246例中国汉族神经母细胞瘤患儿和328例中国汉族健康儿童标本,提取外周血DNA,通过PCR扩增目的基因片段,随后应用Sequenommassarray对目的片段进行测序分型。并采用卡方检验、校验后Logistic回归分析等统计学方法,比较各SNP位点与NB肿瘤发生发展相关性。结果 HACE1基因rs45521835位点携带AA基因型的患儿以及rs6927608位点携带CC基因型的患儿其NB肿瘤始发于肾上腺较多,OR值分别为5.20（95%CI：1.06~25.56,P：0.047）和5.00（95%CI：1.02~24.55,P=0.052）。LIN28B基因SNP位点rs7759938（CC基因型）、rs314280（TTT基因型）、rs314276（AA基因型）和rs314263（CC基因型）主要与GNB密切相关,OR值分别2.94（95%CI：1.06~8.20,P=0.047）、2.94（95%CI：1.06~8.20,P=0.047）、2.95（95%CI：1.06~8.24,P=0.047）和3.02（95%CI：1.08~8.41,P=0.042）。结论 在中国汉族儿童中,HACE1基因（rs45521835,rs6927608）和LIN28B基因（rs7759938,rs314280,rs314276,rs314263）SNPs与原发于肾上腺的神经母细胞瘤或者节细胞性神经母细胞瘤（GNB）密切相关。

Lin28B在三阴乳腺癌的表达和作用机制初探

目的探讨Lin28B在三阴乳腺癌的表达和作用机制。方法选择2008年1月1日~2013年12月31日本院收治的三阴乳腺癌(TNBC)患者30例,按照免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织Lin28B蛋白的表达情况。分析Lin28B表达与TNBC病理特征的相关性。结果 TNBC患者癌组织与癌旁组织中Lin28B、E-cadherin、N-cadherin、β-cadherin蛋白表达的阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Lin28B蛋白与TNBC患者的肿瘤分化程度、淋巴结转移、远处转移、Ki67表达有相关性,差异有统计学意义(P<0.05),与患者的年龄、月经状态、肿瘤分期无相关(P>0.05)。结论 Lin28B蛋白表达情况可能与TNBC的发生、恶化有关,可能会成为TNBC患者治疗时的新靶点。

Lin28B/let-7通路与肝癌细胞紫杉醇耐药的相关性研究

为证明Lin28B/let-7通路与肝癌紫杉醇耐药密切相关和采用浓度梯度间歇刺激法建立Hep3B/PTX耐药细胞系。通过四甲基偶氮唑盐比色(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)分析Guava微流式分析对Hep3B/PTX耐药细胞系进行鉴定,realtime PCR检测耐药细胞中Lin28B及let-7表达水平。经过6个月的诱导,Hep3B/PTX耐药细胞系对紫杉醇的耐药指数为13.55;与亲本细胞相比,Hep3B/PTX处于G0/G1期的细胞比例较高,S期的细胞比例较低;0.2μmol/L紫杉醇处理亲本细胞24h后,有(41.73±1.80)%细胞发生凋亡,而Hep3B/PTX细胞凋亡率只有(17.21±3.60)%;real-time PCR发现,Hep3B/PTX与亲本细胞相比,Lin28B基因表达水平升高了49倍,而Lin28B调控的let-7家族成员表达水平均有不同程度的降低。Hep3B/PTX细胞中Lin28B基因和let-7家族成员表达量的变化揭示了肝癌细胞对紫杉醇的耐药与Lin28B/let-7通路相关,Lin28B基因可能通过影响let-7家族miRNA生物发生过程而改变肝癌细胞对紫杉醇的敏感性。

Lin28B蛋白在三阴乳腺癌的表达及临床意义

目的探讨Lin28B蛋白在三阴乳腺癌的表达水平以及与临床病理特征的关系。方法入选了47例三阴乳腺癌病例,分析Lin28B蛋白在癌组织和癌旁组织表达差异以及Lin28B蛋白与临床病理特征的相关性。结果癌组织Lin28B阳性表达高于癌旁组织,两者比较有统计学差异(<0.05);Lin28B蛋白在TNBC患者组织分化程度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期以及Ki67表达存在正相关性,这些相关性均具有统计学意义(<0.05)。而与年龄、月经状态、肿块大小之间无相关性(<0.05)。结论 Lin28B蛋白表达可能与TNBC的发生、发展有关,有望成为三阴乳腺癌的新的预测因子或治疗靶点,但是需要更大临床样本和长期随访进一步验证。

LIN28B调控miRNAs维持MCF-7肿瘤干细胞的干性特征

目的研究LIN28B对人乳腺癌细胞(MCF-7)肿瘤干细胞的干性状态维持的作用机制。方法在MCF-7细胞中瞬时过表达LIN28B,用q PCR和Western blot检测干性相关基因SOX2、NAONG、c-Myc和OCT4的表达;用流式细胞仪检测CD44high/CD24low细胞亚群的比例;利用体外成球培养检测肿瘤干细胞自我更新的能力,通过RNA第二代测序技术检测在LIN28B过表达后MCF-7细胞中miRNAs的表达差异,通过转染差异表达的miRNA,检测其对MCF-7细胞肿瘤干细胞比例和体外成球能力的影响。结果转染p-CMV6-LIN28B后能明显提高LIN28B的mRNA和蛋白水平(P<0.001);过表达LIN28B后MCF-7细胞中SOX2、NANOG和OCT4在RNA和蛋白水平表达都明显增高(P<0.05);CD44high/CD24low细胞比例由1.71%上升至11.60%(P<0.05);体外成球培养发现成球细胞数量明显增多(P<0.01);通过RNA测序发现有16个miRNAs在LIN28B过表达后差异表达倍数在2倍以上且P<0.05,LIN28B过表达后miR-92b-5p表达显著上调(P<0.01);转染miR-92b-5p mimic后MCF-7细胞的CD44high/CD24low细胞比例由1.14%上升至3.59%(P<0.05),体外成球能力明显增强(P<0.01)。结论 LIN28B能维持MCF-7肿瘤干细胞的干性状态,其作用机制可能是通过miRNAs的表达来实现的。