2种生氰糖苷致毒机制及其检测方法研究进展

亚麻苦苷和百脉根苷是两种生氰糖苷,广泛存在于木薯、亚麻、高粱、杏(苦杏仁)等作物中。人和动物不当摄入含有亚麻苦苷和百脉根苷等生氰糖苷的食品及中草药之后会分解成剧毒物质氢氰酸而引起中毒反应。能够准确测定植物体中亚麻苦苷和百脉根苷的含量是预防中毒反应发生的前提。本文概述了亚麻苦苷和百脉根苷的结构、致毒机制。从直接测定法和间接测定法两个维度对亚麻苦苷和百脉根苷8种常用检验方法的应用进展进行阐述,总结了这8种方法的适用范围、定量限、方法特点、操作要点等方面的异同。为科研工作者快速选择准确、简单、适宜的方法进行生氰糖苷的测定提供技术参考。同时也为生氰糖苷安全质量标准的制修订提供思路。

新型自杀基因1inamaras／linamarinnamarase／Inamarin的构建及对肝癌细胞MHCC97的体外杀伤效应

目的构建表达亚麻苦甙水解酶（linamarase，lis）基因的重组真核载体，建立亚麻苦甙水解酶／亚麻苦甙（linamarase／linamarin，lis／lin）肿瘤自杀基因治疗系统并检测其对肝癌细胞MHCC97的体外杀伤效应。方法将lis基因定向克隆人真核载体pEGFPN1，并用限制性内切酶进行酶切及测序鉴定；用电转染法将pEGFP-N1-lis转染人肝癌细胞MHCC97，通过G418筛选建立稳定表达lis的细胞系，MTT法检测lis／lin自杀基因治疗系统在体外的抗肿瘤效应。结果经酶切鉴定和DNA序列测定，证明1is基因成功定向插入到pEGFP—N1载体中；G418压力筛选4周，得到稳定表达lis的MHCC97细胞，命名为MHCC97-lis。经检测，新型自杀基因系统lis／lin对肿瘤细胞有较强的杀伤作用并显示出旁观者效应。结论成功获取表达lis基因的真核表达载体，已建立显示出对肿瘤细胞的杀伤作用以及旁观者效应的自杀基因治疗系统，为进一步研究新型自杀基因lis／lin抗肿瘤作用奠定基础。

Variation in the Content of Cyanogenic Glycosides in Flaxseed Meal from Twenty-One Varieties

Flaxseed meal from twenty-one varieties has been evaluated for content of cyanogenic glycosides (linamarin, linustatin and neolinustatin). Varieties belonging to three different groups of productive attitude (oil, fiber and intermediate) were considered. The total content of cyanogenic glycosides ranged from 0.74 to 1.60 g?Kg?1 CN?. As expected, linamarin was a minority component accounting for only 2% - 14% of total glycosides. Linustatin resulted statistically lower in the intermediate group than that in the other groups and, in particular, it was the lowest in the Festival variety. Neolinustatin resulted lower in the fiber group although the variety Ventimiglia (belonging to oil group) showed a negligible level of this compound. Neolinustatin was positively correlated to total cyanogenic glycosides (r = 0.709) and inversely correlated to linustatin (r = ?0.326). The variability observed in the content of the various forms of glycosides could be exploited in breeding programs to reduce the content of these toxic compounds in flaxseed meal.

木薯叶片和块根中氰苷的快速提取

木薯块根中氰苷的含量决定其食用品质,选育低氰苷品种是木薯食用化发展的重要课题。为此,探索了一种快速高效提取木薯叶片和块根中氰苷的方法。利用该方法对3个不同品种的木薯叶片和块根提取氰苷,并用液相色谱-质谱法测定其氰苷含量。结果表明,木薯叶片和块根均含有亚麻苦苷和百脉根苷2种氰苷,以亚麻苦苷为主要类型;3个品种木薯叶片氰苷含量均远大于块根中氰苷含量;不同木薯间氰苷含量有很大差异,野生木薯氰苷含量要大于栽培品种。文中提出的木薯氰苷的提取方法所需时间短,节约劳力、材料用量少,可作为木薯食用品种选育中氰苷含量鉴定的有效方法。

基于表面增强拉曼光谱和顶空-气相色谱/氮磷检测技术的生氰糖苷类中成药中游离态氰化物含量测定

目的:分别建立表面增强拉曼光谱(SERS)和顶空-气相色谱/氮磷检测(HS-GC/NPD)2种技术方法,对生氰糖苷(简称氰苷)类中成药中的游离态氰化物进行含量测定和比对确认。方法:SERS方法结合在线裂解-吹扫捕集方式,对中成药中游离态氰化物进行提取转化,在785 nm激光(功率90 m W)、积分时间10 s下进行便携式SERS测定;GC-NPD方法则通过顶空进样的方式,采用HP-PLOT Q色谱柱(15 m×0.32 mm×20μm)进行分离,程序升温(初始温度30℃,维持1.5 min,以35℃·min^(-1)速率升至190℃,维持1 min)。结果:SERS和GC-NPD 2种方法均能用于氰苷类中成药中游离态氰化物的含量测定,检测结果基本一致,分别在质量浓度0.1~2 mg·L^(-1)(r=0.997 0)和0.05~50 mg·L^(-1)(r=0.997 9)范围内呈良好的线性关系。对比不同厂家及批次的通宣理肺丸剂、片剂及口服液的检测结果表明:仅在丸剂中发现游离态氰化物,其中最高剂量相当于每次服用氰化物约0.18 mg(以HCN计),苦杏仁苷在样品处理条件下不影响游离态氰化物的准确测定。结论:针对氰苷类中成药中可能存在的游离态氰化物,提供了准确、灵敏的2种技术方法,并互为参照,SERS方法更适于快速检测。所获得的中成药中氰化物的数据可为相关中成药产品的质量控制和工艺优化提供依据。