下调lncRNA LINC00176对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药和自噬的影响

目的:研究下调lncRNA LINC00176对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药和自噬的影响及机制。方法:qRT-PCR方法测定正常支气管上皮16HBE细胞和肺癌A549、A549/DDP、NCI-H1299、SK-MES-1细胞中LINC00176的表达。将A549/DDP细胞分成对照组、si-NC组、si-LINC00176组、si-LINC00176+Anti-miR-NC组、si-LINC00176+Anti-miR-138-5p组。MTT实验检测顺铂对A549/DDP的半数抑制浓度(IC50)。流式细胞术测定细胞凋亡。Western blot测定LC3-I、LC3-II、Beclin 1、C-Caspase-3蛋白表达。利用荧光素酶报告系统鉴定LINC00176和miR-138-5p的靶向关系。结果:与16HBE细胞比较,A549、A549/DDP、NCI-H1299、SK-MES-1细胞中LINC00176表达水平显著升高(P<0.01)。与A549细胞比较,A549/DDP细胞中LINC00176表达水平显著升高(P<0.01)。与对照组、si-NC组比较,si-LINC00176组A549/DDP细胞IC50显著降低(P<0.01),LC3-II/LC3-I、Beclin 1蛋白表达显著降低(P<0.01),凋亡率、C-Caspase-3蛋白表达、miR-138-5p表达水平显著升高(P<0.01)。LINC00176与miR-138-5p直接结合。与si-LINC00176+Anti-miR-NC组比较,si-LINC00176+Anti-miR-138-5p组A549/DDP细胞IC50显著升高(P<0.01),LC3-II/LC3-I、Beclin 1蛋白表达显著升高(P<0.01),凋亡率、C-Caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:下调lncRNA LINC00176通过靶向上调miR-138-5p能够抑制肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药,抑制细胞自噬,诱导细胞凋亡。

LINC00176下调miR-761对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨LINC00176对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法miR-NC组(转染miR-NC)、miR-761组(转染miR-761 mimics)、pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1)、pcDNA3.1-LINC00176组(转染pcDNA3.1-LINC00176)、si-NC组(转染si-NC)、si-LINC00176组(转染si-LINC00176)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-761组(转染anti-miR-761)、miR-NC+WT-LINC00176组(共转染miR-NC和WT-LINC00176)、miR-NC+MUT-LINC00176组(共转染miR-NC和MUT-LINC00176)、miR-761+WT-LINC00176组(共转染miR-761和WT-LINC00176)、miR-761+MUT-LINC00176组(共转染miR-761和MUT-LINC00176)、pcDNA3.1-LINC00176+miR-NC组(共转染pcDNA3.1-LINC00176和miR-NC)、pcDNA3.1-LINC00176+miR-761组(共转染pcDNA3.1-LINC00176和miR-761)均用脂质体法转染至SGC-7901细胞;采用qRT-PCR检测LINC00176和miR-761的表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Western印迹检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果相较于正常胃黏膜细胞GES-1,胃癌细胞MGC-803、SGC-7901中LINC00176的表达水平显著降低(P<0.05);过表达LINC00176、抑制表达miR-761均可抑制SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡;抑制Bcl-2、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MPP)-2蛋白表达,促进Bax蛋、E-钙黏蛋白(cadherin)、P21蛋白表达。LINC00176靶向调控miR-761表达。过表达miR-761能逆转LINC00176对胃癌细胞SGC-7901增殖、迁移、侵袭的抑制和凋亡的促进作用。结论长链非编码RNA LINC00176可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其机制可能与靶向miR-761基因有关,将可为胃癌的预防和治疗提供新靶点。

Linc00176靶向miR-338-3/SMO轴对肝癌细胞增殖和迁移的影响

[目的]探讨基因间长链非编码RNA Linc00176靶向miR-338-3p/SMO对肝癌(HCC)细胞增殖和迁移的影响。[方法]收集手术切除的肝癌患者的HCC组织和癌旁组织标本各96例,采用荧光定量PCR检测Linc00176和miR-338-3p在HCC组织和癌旁组织中的表达水平;构建shRNA-Control、 shRNA-Linc00176、miRNA-Control和miR-338-3p慢病毒肝癌细胞系,采用生物信息学和双荧光素酶报告基因检测分析Linc00176和miR-338-3p的靶向关系;采用CCK-8法和异种移植瘤实验检测各组细胞的增殖能力;采用Transwell分析各组细胞的迁移能力;采用Western blot检测各组细胞中SMO蛋白的表达水平。[结果] Linc00176在HCC组织中的mRNA相对表达水平(1.94±0.21)显著高于癌旁组织(0.57±0.10);miR-338-3p在HCC组织中的mRNA相对表达水平(0.35±0.08)显著低于癌旁组织(1.62±0.15),差异均有统计学意义(P<0.05)。生物信息学分析显示Linc00176可能通过靶向调控miR-338-3p的表达,进一步影响SMO蛋白的表达。双荧光素酶报告基因检测显示转染Linc00176-WT的miR-338-3p细胞(0.33±0.08)的相对荧光素酶活性显著低于miRNA-Control组细胞(1.25±0.16),差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8和异种移植瘤实验显示shRNA-Linc00176和miR-338-3p组细胞的增殖活力和成瘤能力与其各自的对照组相比显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。Transwell结果表明与shRNA-Control组(134.47±12.29)和miRNA-Control组(129.87±13.06)比较,shRNA-Linc00176组(53.17±8.74)和miR-338-3p组(44.61±8.02)细胞的迁移个数均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,shRNA-Linc00176和miR-338-3p组细胞中SMO的蛋白表达水平较shRNA-Control和miRNA-Control组均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。[结论]Linc00176可能通过靶向调控miR-338-3p/SMO的表达促进HCC细胞的增殖和迁移。