Linc00462在胃癌患者组织及血清中的表达及临床意义

目的检测Linc00462在胃癌患者组织及血清中的表达水平,并分析其生物学功能,评价其作为胃癌筛查及预后判断的生物学标志物的可行性。方法收集80例胃癌患者的癌组织及配对癌旁组织标本,另收集48例胃癌患者及22例体检健康者血清标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组Linc00462的表达水平;Pearson相关检测分析Linc00462的表达与胃癌患者临床病理参数以及生存时间的相关性。采用shRNA敲减Linc00462,并采用生长曲线、平板克隆形成试验、Transwell迁移试验及基质胶侵袭试验分别检测胃癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力。结果胃癌患者癌组织中Linc00462的表达水平显著高于配对癌旁组织(t=4.008,P<0.001);Linc00462的表达水平与胃癌患者的肿瘤大小(χ^2=9.785,P=0.037)、分化程度(χ^2=4.467,P=0.037)、脉管癌栓(χ^2=13.745,P=0.004)及神经侵犯(χ^2=7.355,P=0.005)密切相关;高表达Linc00462患者的平均生存时间显著短于低表达者(中位生存时间:26.5个月vs 37个月)(χ^2=6.005,P=0.014)。胃癌患者血清Linc00462表达水平显著高于体检健康者(t=3.280,P<0.01),且与患者的肿瘤大小(χ^2=16.099,P=0.008)和分化程度(χ^2=16.335,P=0.006)相关。Linc00462敲减后,胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力显著下降。结论 Linc00462在胃癌患者组织和血清中表达升高,可作为胃癌筛查及预后判断的分子标志物。

LINC00462通过MYC/ABCC3轴影响肾透明细胞癌细胞糖酵解进而调控其对顺铂的敏感性

目的:探讨LINC00462招募转录因子MYC激活ABCC3对肾透明细胞癌(ccRCC)顺铂敏感性的影响及其机制。方法:数据库分析ccRCC组织中ABCC3、MYC和LINC00462的表达及其相关性,并分析ABCC3基因的富集通路。常规培养人肾小管上皮细胞(HK-2)和ccRCC细胞(A-498、786-O和Caki-2),将si-LINC00462、oe-ABCC3、si-ABCC3、si-MYC、si-LINC00462-NC、oe-ABCC3-NC、si-ABCC3-NC和si-MYC-NC核酸序列分别转染A-498或786-O细胞,分为si-LINC00462组、si-LINC00462-NC组、oe-ABCC3组、oe-ABCC3-NC组、si-ABCC3组、si-ABCC3-NC组、si-MYC组、si-MYC-NC组;用2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)进行回复实验,构建oe-NC+PBS组、oe-ABCC3+PBS组、oe-ABCC3+2-DG组;为探究ccRCC细胞LINC00462/MYC/ABCC3轴对顺铂敏感性的影响,构建si-NC+oe-NC组、si-LINC00462+oe-NC组、si-LINC00462+oe-ABCC3组。qPCR法检测ABCC3、MYC和LINC00462在ccRCC细胞中的表达,CCK-8法检测细胞增殖活力,CCK-8法分析梯度浓度顺铂处理ccRCC细胞后IC50值,WB法检测糖酵解代谢途径相关蛋白的表达,Seahorse XP96法检测各处理组细胞的胞外酸化率(ECAR)和耗氧率(OCR),试剂盒检测细胞中丙酮酸、乳酸、ATP水平。双荧光素酶报告基因和染色质免疫共沉淀(ChIP)实验验证ABCC3与MYC间的结合关系,RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验验证LINC00462和MYC的结合关系。结果:数据库分析和qPCR实验结果显示,ABCC3在ccRCC组织和细胞中呈高表达,差异基因富集在糖酵解通路上。敲减或过表达ABCC3能够增加A-498细胞或降低786-O细胞对顺铂的敏感性,ABCC3可通过促进有氧糖酵解抑制A-498细胞对顺铂的敏感性,2-DG处理可以逆转过表达ABCC3对ccRCC细胞对顺铂敏感性的抑制作用。MYC可直接和ABCC3结合,LINC00462可招募转录因子MYC;敲低LINC00462可抑制ABCC3的表达,敲低LINC00462可抑制ccRCC细胞的有氧糖酵解,并提高其对顺铂敏感性;而进一步过表达ABCC3可逆转敲低LINC00462对ccRCC细胞有氧糖酵解的抑制作用和顺铂敏感性的提高。结论:LINC00462通过招募转录因子MYC激活ABCC3的表达促进ccRCC细胞的糖酵解,进而促进ccRCC细胞对顺铂敏感性。

瑞芬太尼调控Linc00462/miR-2355-5p对肾癌细胞生物学行为的影响

目的探讨瑞芬太尼对肾癌(RCC)细胞生物学行为的影响和机制。方法通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、克隆形成实验、Transwell实验、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测不同浓度的瑞芬太尼对RCC细胞786-0增殖、克隆迁移与侵袭,以迁移及基因间长链非编码RNA00462(Linc00462)、微RNA(miR)-2355-5p表达的影响。将Linc00462小干扰RNA(si-Linc00462)、Linc00462过表达质粒(pcDNA-Linc00462)分别转染786-0细胞,观察干扰Linc00462或过表达Linc00462对786-0细胞生物学行为的影响。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR分析Linc00462和miR-2355-5p的靶向关系。结果瑞芬太尼处理显著降低786-0细胞活力、克隆形成数、迁移数和侵袭数(P<0.05),降低Linc00462表达水平(P<0.05),增加miR-2355-5p表达水平(P<0.05)。干扰Linc00462表达显著降低786-0细胞克隆形成数、迁移数和侵袭数(P<0.05),增加miR-2355-5p表达水平(P<0.05)。过表达Linc00462显著增加786-0克隆形成数、迁移数和侵袭数(P<0.05),降低miR-2355-5p表达水平(P<0.05)。过表达Linc00462显著减弱瑞芬太尼处理对786-0细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示Linc00462能与miR-2355-5p直接结合。结论瑞芬太尼可抑制RCC细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与下调Linc00462/miR-2355-5p通路表达有关。