天台乌药的组织培养与快速繁殖

以药用植物天台乌药当年生嫩茎为外植体,新芽萌动后取材,研究不同培养基对其组织培养和植株再生的影响。结果表明,最适的不定芽增殖培养基为MS+6-BA 2.0～3.5 mg.L-1+NAA 0.2 mg.L-1+Na2S2O31.25%(蔗糖3%),最佳的生根培养基为1/4 MS+IBA 1.0 mg.L-1(不加肌醇,蔗糖2%)。

氢化物发生原子荧光法测定银鱼中的砷、汞、硒、镉

采用微波消解法处理银鱼(Lindera aggregate(Sims)Kosterm)样品,然后用氢化物发生-原子荧光法测定样品中的砷、汞、硒和镉的含量。结果表明,该方法的加标回收率为95.8%～104.6%,相对标准偏差均小于4%,具有良好的精密度和准确度。4种元素的检出限为0.04～0.13 ng/mL,能满足水产品中金属元素的测定要求。银鱼中砷、汞、硒和镉的含量均未超出限量值。该方法简便、快速、灵敏,在实际样品的测定中得到了满意的结果。

乌药叶化学成分的研究

目的研究乌药Lindera aggregate(Sims) Kosterm叶的化学成分。方法乌药叶70%乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20、制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到13个化合物,分别鉴定为hydroxylinderstrenolide(1)、lindenanolide H(2)、lindenanolide A(3)、atractylenolideⅢ(4)、chlojaponilactone A(5)、9,9′-dihydroxy-3,4-methylenedioxy-3′-methoxy[7-O-4′,8-5′] lignans(6)、槲皮素(7)、山柰酚(8)、槲皮素-3-O-β-D-木糖苷(9)、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖苷(10)、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(11)、山柰酚-3-O-(4″-反式-对-香豆酰基)-α-L-鼠李糖苷(12)、山柰酚-3-O-(2″,4″-二-反式-对-香豆酰基)-α-L-鼠李糖苷(13)。结论其中化合物2~6、12~13为首次从该植物中分离得到。

高效液相色谱法测定乌药叶中槲皮苷的含量

目的建立高效液相色谱测定乌药叶中槲皮苷含量的方法。方法色谱柱为Shimpack VP-ODS色谱柱,流动相为乙腈-0.5%冰醋酸(20∶80),检测波长254nm,柱温40℃,流速1mL·min-1。结果槲皮苷在1～100μg·mL-1(r=0.9999)范围内呈现良好的线性关系;槲皮苷回收率为98.38%,RSD为1.85%;样品溶液在24h内稳定。结论该方法测定准确、快速简单,线性关系良好。

氢化物发生-原子荧光法测定乌药中的砷、汞、硒、镉

采用微波消解法处理样品,然后用氢化物发生-原子荧光法测定乌药[Lindera aggregate(Sims)Kosterm]中的砷、汞、硒和镉含量。结果表明,加标回收率为96.8%～103.9%,相对标准偏差均小于4%,具有良好的精密度和准确度。各元素的检出限为0.05～0.36 ng/mL,能满足中草药中无机元素的测试要求。乌药中的砷、汞、硒和镉含量均未超出限量范围。该方法简便、快速、灵敏,对于实际样品的测定得到了满意的结果,便于推广应用。

HPLC测定乌药叶中槲皮素的含量

目的:建立高效液相色谱测定乌药叶中槲皮素含量的方法。方法:色谱柱(ZORBAX ECLIPSE XDB-C18,150 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇∶0.4%磷酸=50∶50为流动相,流速:1.0 mL/min,检测波长:360 nm,柱温:30℃。结果:槲皮素在0.129μg～1.29μg内线性关系良好(r2>0.9999);重复性RSD为4.2%;平均加样回收率为101.0%,RSD为2.37%。结论:该方法专属性强,简便快捷,结果准确,可用作乌药叶槲皮素的含量测定。

乌药的离体培养和植株再生研究

[目的]为乌药的规模化人工育苗提供理论依据。[方法]以乌药植物当年生健壮枝条为外植体,研究不同激素种类及浓度对其不定芽的诱导及生根的影响,筛选出最佳培养基。[结果]适宜于乌药组织培养的最佳外植体取材时间为6～7月,以当年生带芽茎段的嫩枝为最适宜;2.5 mg/L 6-BA是乌药不定芽增殖时最有效的浓度;诱导乌药外植体不定芽增殖的最佳培养基为MS＋6-BA 2.5mg/L＋NAA 0.2 mg/L;乌药苗在增殖过程中的继代周期以40～50 d为宜;最佳壮苗培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L;最佳生根培养基为MS＋NAA 0.5 mg/L,生根率98%～100%。[结论]采用合适的外植体以及激素种类与浓度为最佳配比的培养基可使传统的中药材乌药植物成功地诱导不定芽的分化、生根与再生。

健胃止痛片的质量标准研究

目的建立健胃止痛片(草豆蔻、乌药和干姜等)的质量标准。方法采用TLC法对乌药和干姜进行定性鉴别,用HPLC法对山姜素含量进行定量测定。结果薄层色谱斑点清晰,阴性无干扰。山姜素质量浓度在1.055~211.0μg·mL-1范围内线性关系良好,回归方程为y=8 658.2x+698.6,r=1.000 0;平均回收率为101.7%,RSD值为0.83%。结论该方法重复性良好、操作简便,可为健胃止痛片的质量控制提供参考。

乌药matK基因的生物信息学及多样性分析

对乌药[Lindera aggregate(Sims)Kosterm]叶绿体matK基因编码的蛋白序列进行了分析,并以11种山胡椒属植物构建了系统进化树。结果表明,matK基因全长为1628 bp,含有14个开放阅读框;亲水指数为-0.200,为亲水蛋白;乌药与桠乌药(Lindera obtusiloba)和三股筋香(Lindera thomsonii)的亲缘性比较近,与山胡椒(Lindera glauca)亲缘性最远。研究结果可为乌药种质资源鉴别、分类及多样性研究提供参考。

乌药叶化学成分的研究

目的研究乌药Lindera aggregata叶的化学成分。方法采用硅胶色谱柱色谱、聚酰胺柱色谱、凝胶柱色谱等方法分离化合物，运用现代光谱技术鉴定化合物结构。结果从乌药叶中分离得到9个黄酮类化合物，分别鉴定为槲皮素（quercetin，Ⅰ）、山柰酚（kaempferol，Ⅱ）、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖苷（avicularin，Ⅲ）、山柰酚-3-O-α—L-鼠李糖苷（afzelin，Ⅳ）、二氢山柰酚（dihydrokaempferol，Ⅴ）、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷（astragaline，Ⅵ）、山柰酚3-O-β-D-木糖苷（kaempferol-3-O-β-D-xylopyranoside，Ⅶ）、山柰酚-3-O—α-L一吡喃阿拉伯糖苷（juglalin，Ⅷ）、kaempferol-3—O-（2″-O-β-D—glucopyranosyl）-α-L—rhamnopyranosjde（Ⅸ）。结论化合物Ⅲ～Ⅸ为首次从该植物中分离得到，其中化合物Ⅴ～Ⅸ为首次从山胡椒属植物中分离得到。

乌药对高脂饮食诱导的高脂血症金黄地鼠的作用

目的研究乌药对高脂血症模型金黄地鼠的作用及其机制。方法用高脂饲料饲养建立高脂血症金黄地鼠模型。根据血清总胆固醇(TC)水平将动物随机分为4组:正常组、模型组、依折麦布组和乌药组,每组10只。正常组与模型组给予蒸馏水灌胃,依折麦布组给予依折麦布10.0 mg·kg^-1灌胃,乌药组给予乌药有效部位1.0 g·kg^-1灌胃,1次/天。于给药第2,4周末采血,全自动血液流变仪检测血液流变学指标;以实时荧光定量-PCR法检测肠组织三磷酸腺苷结合盒转运体B1(ABCB1)和低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)基因表达水平。结果正常组、模型组、依折麦布组和乌药组的高切还原粘度分别是11.62±2.03,15.37±2.57,12.47±1.10和11.60±1.66,模型组与正常组相比或者乌药组与模型组相比,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。正常组、模型组和乌药组的ABCB1基因表达分别是1.88±0.32,7.27±0.77和9.06±1.47;这3组的LRP基因表达分别是1.96±0.27,1.77±0.35和2.68±0.32,乌药组与模型组相比,ABCB1和LRP的表达均增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论乌药具有防治动脉粥样硬化的潜在作用,其作用机制可能通过调节胆固醇逆转运过程来实现的。

中药材中镉的生物可给性在风险评估中的应用

目的通过考察中药材中镉(Cd)的生物可给性,并将其应用于人体健康风险评估,为限量标准的制定提供参考依据。方法采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法对于黄连、川芎、乌药和莪术4种中药材中Cd的残留量进行测定,通过胃-肠.两步模拟消化法(in riro PBET)体外模拟胃肠消化对药材中Cd的生物可给性进行考察,并应用靶标危害系数法(THQ)评估Cd含量对人体健康产生的风险。结果黄连、川芎、乌药和莪术中Cd的生物可给性分别为49.0%、40.0%、44.9%和65.7%。风险评估结果表明,提取前黄连、川芎、乌药和莪术的THQ分别为1.895.1.045.1.446和1.653;提取后THQ分别为0.929、0.418,0.649和1.077。结论4种药材中的Cd昀不能在人工胃肠中完全吸收,提取后Cd的风险降低,且除莪术外,均降至安全范围内。本实验将中药中重金属的生物可给性应用于健康风险评估模型中,为更加客观、科学地评价中药中重金属对人体的健康风险,制定科学、合理的重金属限量标准提供科学依据。

基于QTRAP UPLC-MS/MS的乌药不同部位中生物碱、内酯类和黄酮类成分分析

目的建立超高效液相色谱-串联四级杆/线性离子阱质谱(QTRAP UPLC-MS/MS)同时测定乌药中生物碱(去甲异波尔定、波尔定碱)、内酯类(乌药内酯、乌药醚内酯、异乌药内酯、乌药醇、去氢木香内酯)和黄酮类(儿茶素、表儿茶素、异槲皮苷)成分的方法,比较乌药不同部位中各成分的含量差异。方法样品经甲醇超声辅助提取,稀释后采用ACQUITY UPLCRHSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm),保护柱:Cartridge Guarde Colume E Inertsil ODS-SP(4.0 mm×10 mm,5μm);以水(含0.1%甲酸,A相)-乙腈(B相)为流动相;梯度洗脱,柱温35℃,流速0.2 mL·min^(-1),进样量5μL。采用电喷雾离子源(ESI),多反应离子监测(MRM)扫描方式进行检测。结果10种目标化合物在一定浓度范围内均呈良好的线性关系,相关系数大于0.9916,精密度、重复性和稳定性良好;加样回收率在99.13%~103.07%,RSD值均小于5%。结论所建立的方法简便、灵敏度高、重现性好,可用于乌药中多元功效物质的同时测定,为乌药药材内在质量的综合评价和综合利用提供新的方法参考。

不同产地、不同部位乌药中31种无机元素测定及初步风险评估

目的:分析研究不同产地、不同部位乌药中31种无机元素的含量,对其中5种重金属及有害元素进行风险评估和最大限量理论值计算,为质量保证提供依据。方法:采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定乌药中31种无机元素,建立无机元素特征图谱;采用危害指数法(HI法)对5种重金属及有害元素的风险进行评估,并计算其最大限量理论值。结果:31种无机元素线性关系良好,相关系数r≥0.9941、回收率在88.7%~104.1%,RSD均小于3.6%。风险评估结果表明不同部位乌药中5种重金属及有害元素的风险可控,HI均小于1。经过计算得到乌药不同样品中Hg、Cu、As的实际测定值远小于最大限量值,除浙江天台产乌药叶外,其余样品Cd元素均超限;样品中Pb元素超限,其中广东韶关产乌药中块根和直根中Pb超限。结论:该方法可以用于不同部位乌药中无机元素测定,适用于乌药中重金属及有害元素的风险评估,为乌药的质量控制及安全性评价提供依据。