山橿中生物碱类成分Laetanine、Launobine对乙酸致GES-1细胞损伤的保护作用及机制

目的利用乙酸建立胃黏膜上皮细胞(GES-1细胞)损伤模型,研究山橿中生物碱类成分Laetanine、Launobine对GES-1细胞损伤的保护作用及机制。方法通过MTT细胞增殖/毒性实验确定Laetanine、Launobine的最佳给药浓度。分别以浓度为0.01%~0.2%的乙酸培养液作用于GES-1细胞,作用时间分别为3、4、5h,筛选最佳造模条件。利用乙酸建立GES-1细胞损伤模型,测定Laetanine、Launobine含药培养基处理后的细胞存活率;Griess法测定细胞上清液中NO的浓度;ELISA法测定各组细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和前列腺素E2(PGE2)水平;WST-1法检测各实验组超氧化物歧化酶(SOD)抑制率,计算SOD活力值。结果0.1%乙酸溶液处理3h为GES-1细胞损伤的最佳造模条件;与模型组比较,Laetanine、Launobine给药组均能显著升高GES-1细胞存活率(P<0.01);经Laetanine、Launobine处理后,细胞上清液中的NO、TNF-α、IL-6和PGE2水平显著降低,SOD活力显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论山橿中生物碱类成分Laetanine和Launobine均能保护乙酸损伤的GES-1细胞,减轻GES-1细胞的受损程度,其作用机制可能与其降低NO、TNF-α、IL-6和PGE2水平,升高SOD水平有关,表明Laetanine和Launobine可能为山橿发挥抗胃溃疡作用的有效成分。

山橿根大极性部位化学成分及其抗肿瘤活性研究

目的研究山橿根大极性部位的化学成分及其抗肿瘤活性。方法山橿根大极性部位采用硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱、半制备HPLC、ODS中压柱进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用MTT法测定其抗肿瘤活性。结果从中分离得到13个化合物,分别鉴定为2,6-二甲氧基-4-羟基苯基-1-O-β-D-葡萄糖苷(1)、3-羟基-4,5-二甲氧基苯酚-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、紫丁香苷(3)、1-O-3,4-二甲氧基-5-羟苯基-(6-O-3,5-二甲氧基没食子酰)-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、p-cymen-7-ylβ-D-glucopyranoside(5)、pisumionoside(6)、staphylionoside D(7)、dendranthemoside B(8)、lynoiside(9)、nudiposide(10)、淫羊藿次苷B1(11)、(2 S)-pinocembrin-7-O-(6-O-α-L-rhamnopyranosyl-β-D-glucopyranoside)(12)、(+)-N-(methoxycarbonyl)-N-norboldine(13)。化合物3、13对人肺癌细胞(A549)、人胃癌细胞(MGC80-3)表现出明显的细胞毒活性。结论化合物1~13为首次从山橿中分离得到。化合物3、13具有良好的抗肿瘤活性。

山橿抗Hp有效组分筛选及其对Hp感染胃癌AGS细胞的影响

目的探究山橿乙酸乙酯部位及其化学成分对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)的体外抑菌活性,筛选抗Hp有效组分;进一步研究有效组分对Hp感染人胃癌AGS细胞的影响。方法药敏纸片法比较山橿乙酸乙酯部位及其化学成分对Hp的体外抑菌效果,筛选山橿乙酸乙酯部位抗Hp有效成分,组建有效组分;对有效组分及抗Hp最强的化合物,以标准菌株Hp P12、三株多重耐药Hp菌株为实验菌株,克拉霉素为阳性对照药,采用倍比稀释法测定其最低抑菌浓度(MIC)值;细胞实验检测二者对人胃癌AGS细胞增殖、凋亡,Hp感染AGS细胞黏附能力的影响。结果山橿乙酸乙酯部位中二苯乙烯类成分的抗Hp作用优于黄酮类成分,其中银松素的抗Hp作用最为显著;依据山橿乙酸乙酯部位中8个二苯乙烯类成分的含量组建山橿抗Hp有效组分;山橿抗Hp有效组分对Hp标准菌株的MIC值为12~16μg/mL,对Hp耐药菌株的MIC值为256~512μg/mL;银松素对Hp标准菌株的MIC值为16~32μg/mL,对Hp耐药菌株的MIC值为64~128μg/mL,均明显优于山橿乙酸乙酯部位。山橿抗Hp有效组分、银松素对AGS细胞的IC50分别为14.10μg/mL,59.75μg/mL,且二者均不影响AGS细胞凋亡,又可在一定程度上减少Hp的定植。结论山橿乙酸乙酯部位抗Hp的主要有效成分为其中的二苯乙烯类化合物,其中以银松素的作用最强,其抗Hp机制与减少Hp的定植有关。

山橿根、茎、叶挥发油化学成分的研究

目的:研究山橿根、茎、叶挥发油的化学成分。方法:水蒸气蒸馏法提取挥发油,利用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)进行定性分析,按峰面积归一化法,求出山橿各部位挥发油中化学成分的百分含量。结果:鉴定出99个化合物。山橿根挥发油中主要成分为桉树脑和樟脑,茎挥发油中主要成分为(E)-乙酸香叶酯及桉树脑,而叶挥发油主要成分为桉树脑、α-萜品醇和(E)-橙花叔醇。结论:山橿根、茎、叶挥发油含有丰富的药用活性成分。

山橿治疗胃溃疡及镇痛抗炎有效部位的筛选

目的:筛选山橿对胃溃疡、镇痛抗炎作用的有效部位。方法:分别通过幽门结扎法和醋酸法制备大鼠胃溃疡模型实验;扭体法和热板法小鼠疼痛模型实验;二甲苯致小鼠耳壳水肿炎症模型实验,观察山橿不同溶剂提取部位对各模型的影响。结果:在抗胃溃疡实验中,挥发油组、乙酸乙酯组和正丁醇组对胃溃疡均有明显的抑制作用,其他部位组对胃溃疡的抑制作用不明显。在镇痛抗炎实验中,挥发油组和乙酸乙酯组具有明显的镇痛抗炎作用,其他部位镇痛抗炎作用不明显。结论:山橿的挥发油部位、乙酸乙酯部位对山橿的抗胃溃疡及抗炎镇痛作用效果明显。

CO_2超临界萃取山橿挥发油工艺研究

目的:采用CO2超临界萃取法萃取山橿中挥发油,并优化萃取工艺。方法:通过均匀设计试验,以萃取物和桉油精的含量为指标,对萃取温度、萃取时间、萃取压力等影响因素进行考察。结果:超临界CO2的最佳萃取工艺为萃取压力30Mpa,萃取温度35℃,萃取时间3.5h。结论:该方法简便,可靠,适合工业化生产。

山橿对幽门螺杆菌的抑菌实验研究

目的:研究山橿各部位对幽门螺杆菌(helicobacterpyleri,HP)的体外抗菌作用。方法:采用棋盘法设计,以琼脂平板法测定山橿不同部位不同浓度提取物对HP的最低抑菌浓度。结果:山橿石油醚部位提取物对HP的最低抑菌浓度为每升含相当于125g生药)。结论:找出山橿不同部位提取物的最低抑菌浓度,为进一步研究药材中抗HP活性物质提供依据。

山橿生物特性的初步研究

目的:研究山橿的生长发育规律,为山橿资源的开发利用提供科学依据。方法:以实地调查的方式观测山橿植物生长发育情况;以高效液相色谱法(HPLC)测定山橿根种主要化学成分的动态积累变化规律。结果:描述了山橿的生物特性,了解了山橿的生长发育情况及主要化学成分的动态积累变化规律。结论:研究内容可为山橿野生资源保护开发利用,以及进行规范化种植提供科学依据。

多指标综合评分法优选山橿中总黄酮提取工艺

目的:优选山橿中总黄酮的提取工艺。方法:采用紫外分光光度法测定山橿中总黄酮含量,高效液相色谱法测定球松素的含量。采用正交设计方法,综合评价总黄酮提取率、球松素提取率和收膏率三项指标,优选出最佳提取工艺。结果:最佳提取工艺参数为A3B3C3D2,即药材加12倍量70%乙醇,超声波提取3次,每次1.5h。结论:正交试验结合多指标综合分法优选出山橿总黄酮的提取工艺合理、可行。

山橿药材中主要有效成分含量的研究

目的：利用RP-HPLC梯度洗脱的方法对山橿药材中主要有效成分进行了研究,为科学评价与有效控制山橿药材质量提供了方法。方法：依利特Hypersil ODS柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以甲醇-水（60%-100%）非线形梯度洗脱,体积流1.0 ml/min,柱温30℃,在296 nm波长下进行检测。测定10批次山橿药材中银松素、乔松素和球松素的含量。结果：采用非线性梯度洗脱的方法可以同时控制3种主要有效成分的含量,方法学考察表明该方法具有较好的精密度、重复性和稳定性。结论：采用的梯度洗脱方法测定有效成分的含量可以作为山橿质量评价的重要依据。

近红外光谱法快速测定山橿药材中球松素含量

目的利用近红外光谱(NIR)技术建立一种山橿中球松素含量的快速分析方法。方法以HPLC分析值为参照,采用近红外漫反射光谱技术采集66份山橿样品的近红外漫反射光谱,结合偏最小二乘法(PLS)建立了球松素含量的定量分析模型。结果所建模型的相关系数(R2)、外部验证均方差(RMSEP)和内部交叉验证均方差(RMSECV)分别为0.992 31、0.076 5和0.450 0;验证集样品的NIR测得值与药典法测得值进行配对T检验,差异无统计学意义。结论本方法操作简便、无污染、结果准确可靠,可用于山橿中球松素含量的快速测定。

山橿挥发油的提取及β-环糊精包合工艺研究

目的:优选山橿挥发油的提取及β-环糊精包合的最佳工艺。方法:利用水蒸气蒸馏法提取山橿挥发油,采用正交实验设计法,以挥发油得率为指标优选提取工艺;以包合物收率及挥发油包合率为考察指标优选包合工艺,并采用紫外分光光度法及薄层色谱法对包合物进行鉴别。结果:挥发油最佳提取条件是药材粉碎度24目、浸泡时间0.5 h、提取时间4 h、加10倍量水;包合的最佳工艺为研磨法,最佳条件为β-环糊精与挥发油的比例8:1、加2倍量水、研磨时间60 min。结论:本实验方法可得到较高提取率及稳定的包合物。