Line-geneK-FQ-PCR仪在检测结核菌中的质控问题

目的:探讨FQ-PCR技术在检测临床标本中结核分枝杆菌的应用价值。方法:通过FQ-PCR技术鉴定561株临床分离株,进行结核分枝杆菌的菌种鉴定和定量分析,同时进行抗酸染色和培养法。结果:FQ-PCR、染色和培养法阳性检出率分别为38.8%(128/330),21.8%(72/330),29.7%(98/330),提高阳性检出率(涂阴)16.97% (56/330),菌种鉴定特异性实验符合率为100%。结论:FQ-PGR技术是一种快速、敏感、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法。

用旋转式荧光定量PCR分析甲型H1N1流感病毒传播的特点

目的:探讨旋转式荧光定量PCR仪在检测临床标本中的应用价值。方法:通过旋转荧光定量-PCR技术对可疑病例的咽拭子、鼻拭子进行检测。结果2009年检测出甲流患者791例,检出率为38.79%(791/2039);甲型H1N1 157例,检出率为7.7%(157/2039),2010年1-6月检测出甲型H1N1为21例,检出率为1.44%(21/1455)。结论本地区甲型H1N1流感是以普通甲流感染为主,甲型H1N1流感混在其中,本地区的传播高峰是在2009年10月,甲型H1N1流感病毒在2010年来传播呈明显减弱趋势。

旋转式荧光定量PCR在临床应用中的价值

目的:探讨旋转式荧光定量PCR仪在检测临床标本中的应用价值。方法:通过旋转荧光定量-PCR技术鉴定1132株临床分离株,进行结核分枝杆菌的菌种鉴定和定量分析,同时进行抗酸染色和培养法。结果:总阳性检出率为48.64%,其中菌阳检出率为96.56%(253/262),阴性符合率为77.85%(369/474),菌种鉴定特异性实验符合率为100%。结论:旋转氏荧光定量PCR仪改进后更加快速、敏感,与其配套使用的试剂特异性强,是在检测结核分枝杆菌复合群的同时,又能进行非结核分枝杆菌鉴定辅助诊断的好方法。

DNA-PKcs表达与鼻咽癌细胞株放射敏感性的关系

目的探讨不同放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-1(鼻咽高分化鳞癌细胞株)和CNE-2(鼻咽低分化鳞癌细胞株)中DNA依赖蛋白激酶(DNA-PK)的催化亚基DNA-PKcs基因的表达与鼻咽癌细胞放射敏感性的关系。方法通过克隆形成实验测定CNE-1、CNE-2不同剂量的存活分数,并用线性二次模型拟合剂量存活曲线求出放射生物学参数α、β、SF2、MID值,以及四氮唑蓝比色分析法(MTT法)检测60Co-γ线4Gy照射后12h细胞的存活率,以评价两株细胞的放射敏感性。逆转录实时荧光定量PCR技术(RT-FQ-PCR)检测照射前、后不同时间及不同剂量CNE-1、CNE-2细胞mRNA水平DNA-PKcs基因的定量表达。结果CNE-1在各个剂量点的存活分数均比CNE-2高,MID值分别为2.78、1.61,SF2值分别为0.627、0.341;4Gy照射后12h的存活率分别为88.2%、72.3%;RT-FQ-PCR显示两株细胞中均有DNA-PKcs基因的表达,其相对表达量之比为7.54±2.71(t=4.17,P=0.014),表达差异有统计学意义,DNA-PKcs基因在CNE-2细胞中存在时间、剂量依赖关系。结论实验验证了CNE-2比CNE-1对射线更敏感,DNA-PKcs基因的表达与鼻咽癌细胞的放射敏感性有关。

银杏内酯对PC12细胞缺糖损伤凋亡相关基因的影响

目的:考察银杏内酯对缺糖引起的PC12细胞损伤的保护作用及对凋亡相关基因表达的影响,探讨银杏内酯对中枢神经系统的保护机制。方法:缺糖培养引起PC12细胞损伤,分别加入100,10,1,0.1mg.L-1的银杏内酯,MTT法检测给药前后与正常组的细胞活力变化,实时荧光定量PCR(Fluorescence Quantitative PCR,FQ-PCR)法分析各组抑制凋亡基因(Bcl-2),凋亡诱导基因(Bax)及原癌基因(c-myc)的表达情况。结果:缺糖培养早期12h时,银杏内酯给药使Bcl-2表达量增高,Bax和c-myc表达量降低;缺糖培养24h时,银杏内酯仅能引起c-myc的表达量下降。结论:在细胞缺糖损伤早期,银杏内酯通过调节凋亡相关基因Bcl-2,Bax和c-myc产生细胞应激保护效应,在损伤晚期主要通过调节c-myc的表达量产生应激保护效应。

地黄饮子含药脑脊液对受损PC12细胞β-淀粉样前体蛋白mRNA表达的干预

目的:探讨地黄饮子含药脑脊液对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致PC12细胞损伤的β-淀粉样前体蛋白(APP)mRNA的表达及地黄饮子对其的干预作用。方法:运用中药脑脊液药理学方法把PC12细胞分为空白组,模型组,西药对照组,地黄饮子脑脊液低,中,高剂量组6组,分别加入正常培养液,正常脑脊液及含药脑脊液,应用实时定量PCR法检测受损PC12细胞β-淀粉样前体蛋白mRNA表达(用2-ΔΔC t表示,Ct为阈循环值,ΔΔCt=ΔCt各干预组-ΔCt空白组,ΔCt=CtAPP-CtGAPDH)。结果:地黄饮子能明显降低PC12细胞受β-淀粉样蛋白刺激时APP的过度反应,降低APP mRNA的表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:地黄饮子脑脊液可以抑制β-淀粉样蛋白损伤对PC12细胞的损伤。