基于miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭心肌纤维化的机制

目的基于miRNA21-5p调控转化生长因子-β1(transforming growth factor beta 1,TGF-β1)/Smads信号通路探讨苓桂气化方抗射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)心肌纤维化的机制。方法40只4周龄自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)平均分为HFpEF组、沙库巴曲缬沙坦组(LCZ696,0.018 g·kg^(-1))、苓桂气化方低剂量组(LGQH-L,3.87 g·kg^(-1))和苓桂气化方高剂量组(LGQH-H,7.74 g·kg^(-1)),给予高脂、高盐及高糖饮食16周及腹腔注射链脲霉素溶液8周建立HFpEF大鼠模型。10只威斯塔京都(Wistar Kyoto,WKY)大鼠和10只SHR大鼠作为对照组,以普通饲料喂养至实验结束。造模成功后,WKY、SHR和HFpEF组给予等剂量生理盐水,其他3组按照预先规定的干预措施,每天灌胃1次,持续6周。干预结束后,行超声心动图测量左心室(left ventricle,LV)前壁厚度(LV end-diastolic anterior wall thickness,LVAWd)、LV后壁厚度(LV end-diastolic posterior wall thickness,LVPWd)、LV舒张末内径(LV end-diastolic internal diameter,LVIDd)、LV射血分数(LV ejection fraction,LVEF)、LV舒张早期二尖瓣流入峰值速度(E)、舒张晚期二尖瓣流入峰值速度(A)和LV舒张早期二尖瓣环运动速度(e'),并计算E/A和E/e';酶联免疫吸附试验检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、B型利钠肽(B-type brain natriuretic peptide,BNP)及半乳糖凝集素3(Galectin-3,Gal-3);病理切片进行苏木精伊红及马松染色观察心肌肥厚及纤维化,并计算LV室壁厚度(LV wall thickness,LVWT)、胶原体积分数(collagen volume fraction,CVF)及血管周围纤维化比率(perivascular fibrosis ratio,PFR);实时定量聚合酶链反应检测LV心肌miRNA21-5p及TGF-β1/Smads信号通路相关mRNA表达;蛋白印迹检测LV心肌TGF-β1/Smads信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,HFpEF组的LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR显著升高(P<0.05或P<0.01);LV心肌miR-NA21-5,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、P-Smad2/3蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01);Smad7 mRNA及蛋白表达显著下调(P<0.05或P<0.01)。与HFpEF组比较,苓桂气化方呈剂量依赖性减少LVAWd、LVPWd、LVIDd、E/A、E/e'、ANP、BNP、Gal-3、LVWT、CVF和PFR(P<0.05或P<0.01);下调miRNA21-5p,α-SMA、CollⅠ、CollⅢ、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达和α-SMA、CollⅠ、GF-β1、P-Smad2/3蛋白表达(P<0.05或P<0.01);上调Smad7 mRNA及蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。结论苓桂气化方可能通过靶向miRNA21-5p调控TGF-β1/Smads信号通路抑制心肌纤维化,从而减轻HFpEF大鼠LV重塑和舒张功能障碍,是治疗HFpEF的有效中药复方。

基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路探讨苓桂气化方改善射血分数保留心力衰竭早期舒张功能的分子机制

目的观察苓桂气化方对射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)早期模型大鼠心脏舒张功能的干预效应,基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)/胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteine-containing aspartate-specific proteases-1,Caspase-1)/消皮素D(Gasdermin D,GSDMD)通路探讨其潜在的分子作用机制。方法40只自发性高血压大鼠高盐高脂高糖饮食联合腹腔注射链脲佐菌素溶液建立HFpEF早期大鼠模型,分为HFpEF组、恩格列净组(1.8 mg/kg)、苓桂气化方低剂量组(4.96 g/kg)、苓桂气化方高剂量组(9.92 g/kg),予相应药物灌胃;正常血压组、空白组予等剂量生理盐水灌胃,连续干预9周。采用超声心动图检测大鼠左心房内径(left atrial diameter,LAD)、舒张早期二尖瓣血流速度(left ventricular early diastolic filling peak velocity,E)与舒张晚期二尖瓣血流速度(atrial systolic left ventricular filling peak velocity,A)比值、左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF);酶联免疫吸附测定法检测血清心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)含量;苏木精—伊红染色观察心肌组织病理变化;蛋白质印迹(Western Blot,WB)法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD和白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果与正常血压组相比,HFpEF组LAD和E/A增加(P<0.05),LVEF无明显变化(P>0.05);血清ANP含量升高(P<0.05);病理观察显示心肌炎症浸润;WB结果示NLRP3、Caspase-1、GSDMD和IL-1β蛋白含量升高(P<0.05),表明建模成功。与HFpEF组比,恩格列净组和苓桂气化方低、高剂量组的LAD和E/A减小(P<0.05),血清ANP含量降低(P<0.05),病理观察显示心肌炎症浸润减轻,WB结果示恩格列净组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),苓桂气化方低剂量组NLRP3、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),苓桂气化方高剂量组NLRP3、GSDMD、IL-1β蛋白含量降低(P<0.05),其余蛋白含量有下降趋势。结论苓桂气化方能改善HFpEF早期模型大鼠心脏舒张功能,其机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号通路、减轻心肌炎症浸润、抑制心房重构相关。

灵归方治疗肾虚血瘀型弱精子症的随机对照研究

目的:观察灵归方治疗肾虚血瘀型弱精子症的有效性与安全性。方法:本研究采用随机对照的研究方法,选取2022年9月至2023年9月于中国中医科学院西苑医院男科就诊的肾虚血瘀型弱精子症患者90例,随机数字表法将其1∶1随机分为试验组(45例)和对照组(45例)。试验组接受灵归方治疗,对照组接受左卡尼汀口服溶液治疗,疗程均为12周,随访12周。观察两组患者治疗前后的精液参数、中医证候评分、生殖激素、妊娠率与精子DNA碎片指数变化。结果:两组患者治疗前精液参数比较,无统计学差异(P>0.05),试验组治疗后与治疗前相比,患者前向运动精子百分率[(19.25±3.08)%vs(38.57±4.99)%]、精子总活力[(32.29±3.64)%vs(46.50±4.77)%]、精子浓度[(83.9±37.2)×10^(6)/mlvs(95.1±34.9)×10^(6)/ml]均存在明显提升,差异具有统计学意义(P<0.05);精液量[(3.38±0.38)mlvs(3.24±0.45)ml],差异不具有统计学意义(P>0.05)。对照组治疗后与治疗前相比,患者前向运动精子百分率[(19.75±4.28)%vs(34.46±5.07)%]、精子总活力[(33.02±4.93)%vs(43.11±4.72)%]、精子浓度[(85.2±39.7)×10^(6)/mlvs(88.1±35.2)×10^(6)/ml]均存在明显提升,差异具有统计学意义(P<0.05);精液量[(3.46±0.52)mlvs(3.30±0.37)ml],差异不具有统计学意义(P>0.05)。治疗后试验组前向运动精子百分率、精子总活力、精子浓度的改善均优于对照组(P<0.05);试验组精液量与对照组相比差异不具有统计学意义(P>0.05)。妊娠率、生殖激素与精子DNA碎片指数方面,两组间治疗前后及各组治疗前后均未见统计学差异(P>0.05)。两组患者都未见严重不良反应。结论:灵归方可改善肾虚血瘀型弱精子症患者的精子前向运动百分率,对改善患者妊娠率具有潜在作用,安全性良好。

基于超声分层应变成像技术评价苓桂气化方改善射血分数保留心力衰竭早期大鼠心肌功能的研究

目的基于超声分层应变成像技术评价苓桂气化方改善射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)早期大鼠心肌功能。方法40只SPF级SHR大鼠随机分为HFpEF模型组、恩格列净组、苓桂气化方低剂量组和苓桂气化方高剂量组,10只WKY大鼠为空白组。采用高盐高脂高糖饮食及腹腔注射链脲佐菌素建立HFpEF早期大鼠模型,各组予相应干预9周后测量左室舒张末期内径、左室舒张末期后壁厚度、舒张早期血液速度/舒张早期二尖瓣环间隔侧组织多普勒频谱、左室射血分数以及左室心内膜下心肌整体纵向应变、中层心肌整体纵向应变、心外膜下心肌整体纵向应变、心内膜下心肌整体圆周应变、中层心肌整体圆周应变和心外膜下心肌整体圆周应变。酶联免疫吸附法测定血清B型脑尿钠肽。马松染色观察心肌组织病理变化。结果与模型组比较,恩格列净组心内膜下心肌整体纵向应变、中层心肌整体纵向应变和心内膜下心肌整体圆周应变明显升高(P<0.05),苓桂气化方低剂量组心内膜下心肌整体纵向应变和中层心肌整体纵向应变明显改善(P<0.05),苓桂气化方高剂量组心内膜下心肌整体纵向应变、中层心肌整体纵向应变和中层心肌整体圆周应变明显提升(P<0.05)。苓桂气化方低剂量组和苓桂气化方高剂量组心肌细胞间隙变窄,胶原纤维沉积减少。结论苓桂气化方能提高HFpEF早期模型大鼠心内膜下心肌整体纵向应变、中层心肌整体纵向应变、中层心肌整体圆周应变,改善左室重构和收缩功能。超声分层应变成像技术可以无创、定量、敏感检测HFpEF早期大鼠左室壁心肌改变。

基于PI3K/Akt/GSK3β信号通路探讨苓桂气化方治疗射血分数保留心力衰竭的机制

目的探讨苓桂气化方通过磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)信号通路治疗射血分数保留心力衰竭(heart failure with preserved ejection fraction,HFpEF)的机制。方法将50只自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rat,SHR)随机分为SHR组、HFpEF组、苓桂低组、苓桂高组和诺欣妥组,每组10只;另有10只WKY大鼠作为WKY组。采用喂食高盐高脂高糖饲料联合腹腔注射链脲佐菌素造模。造模后SHR组和WKY组给予生理盐水,其余组给予相应药物灌胃6周。分别于给药前后进行超声检测大鼠左心室前壁厚度(left ventricular anterior wall thickness,LVAWD)、左心室后壁厚度(left ventricular posterior wall thickness,LVPWD)、舒张末期左心室内径(left ventricular end diastolic internal diameter,LVEDD),以及左心房内径(left atrial diameter,LAD)和右心房内径(right atrial diameter,RAD)的左右径和前后径、左心室舒张早期充盈速度峰值(left ventricular early diastolic filling peak velocity,E)、心房收缩期左心室充盈速度峰值(atrial systolic left ventricular filling peak velocity,A)、舒张早期二尖瓣环血流速度峰值(early diastolic lateral mitral annulus velocity,e′)、E/A、E/e′、等容舒张时间(isovolumic relaxation time,IVRT)和左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF);ELISA法检测心钠素(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠肽(B-type natriuretic peptide,BNP);HE、Masson染色观察大鼠心肌组织结构和形态变化;Western blot法检测PI3K/Akt/GSK3β信号通路相关蛋白(Akt、PI3K、磷酸化PI3K、GSK3β、磷酸化GSK3β)的表达。结果苓桂气化方改善了HFpEF大鼠的心脏结构和功能,与HFpEF组相比:(1)超声结果显示:诺欣妥组、苓桂低组、苓桂高组大鼠的LVEDD、LVAWD、LVPWD、LAD、RAD、E/A、E/e′、IVRT值均显著降低(P<0.01),e′值显著升高(P<0.01),苓桂高组的A值升高(P<0.05),各组LVEF和E均无显著差异(P>0.05)。(2)病理结果显示:各给药组大鼠心室腔较小,室壁变薄,纤维断裂较少,排列更为紧密。(3)ELISA结果显示:诺欣妥组、苓桂低组、苓桂高组BNP和ANP水平显著降低(P<0.01)。(4)Western blot结果显示:诺欣妥组的Akt、p-Akt、GSK3β蛋白表达上调(P<0.05或P<0.01),苓桂低组的p-Akt、GSK3β蛋白表达上调(P<0.05或P<0.01),苓桂高组的p-Akt蛋白表达上调(P<0.05)。结论苓桂气化方治疗HFpEF大鼠具有抑制心脏重构、改善心脏舒张功能、降低血清BNP、ANP的特点,该作用可能是通过PI3K/Akt/GSK3β信号通路来实现的。

何庆勇运用苓桂术甘汤的经验

文章较全面地总结了何庆勇副主任医师运用《伤寒论》中苓桂术甘汤的临床经验。结合多年临床经验,何师认为苓桂术甘汤的病机是中焦阳虚,水饮上犯,并指出运用苓桂术甘汤取佳效的关键在于:一是辨方证,凡是符合"动则心悸,动则头晕"方证者,无论是心律失常、高血压病、脑梗死,均可用之,并多有效验;二是力求原方原量,遵循仲圣原方药物配比,及重用茯苓30~60 g;三是经方叠用;四是借助类方思想化裁经方。

苓桂术甘汤治疗非酒精性脂肪性肝病——从经典到临床的转化医学研究

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)已经成为全球流行的慢性肝病,目前还缺乏针对性治疗药物。在“病痰饮者,当以温药和之”中医经典理论指导下,课题组创造性地将苓桂术甘汤用于NAFLD脾阳虚证的治疗,首次发现了苓桂术甘汤通过肝细胞膜甲状腺激素受体途径提高脂肪酸水溶性和增加脂肪酸β氧化的作用新途径,并通过多组学技术手段发现和验证了苓桂术甘汤治疗NAFLD的系统药理学机制。课题组多中心、随机、双盲、安慰剂对照临床试验证实苓桂术甘汤可以改善NAFLD脾阳虚证患者的胰岛素抵抗,首次提供了苓桂术甘汤治疗现代慢病的循证医学证据。苓桂术甘汤被列入国家“十三五”重大新药创制首批经典名方支持项目,已按要求完成各项研究任务,并完成首个经典名方新药注册。上述工作为推动中医传统理论和经典方剂在现代临床慢病防治中的转化应用作出了示范。

苓桂术甘汤配方颗粒加味治疗慢性射血分数降低心力衰竭的临床观察

目的观察苓桂术甘汤配方颗粒加味治疗慢性射血分数降低心力衰竭属阳虚水泛证患者的临床疗效。方法将77例符合纳入标准的患者随机分为治疗组39例和对照组38例,对照组给予常规西药治疗,治疗组在对照组基础上加用苓桂术甘汤配方颗粒加味治疗,疗程均为4周。观察2组患者治疗前后的中医证候积分、心功能分级比较、6分钟步行试验(6-MWT)、左室射血分数(LVEF)及血浆N末端B型利钠肽原(NT-pro BNP)水平。结果治疗后,在中医证候疗效方面,治疗组总有效率为87.18%,优于对照组的71.05%(P<0.05);在心功能分级比较方面,治疗组总有效率为92.31%,优于对照组的78.95%(P<0.05);2组的6 min步行距离、LVEF、NT-pro BNP均有改善,且治疗组均优于对照组(P<0.05)。结论苓桂术甘汤配方颗粒加味可有效缓解慢性射血分数降低心力衰竭属阳虚水泛证患者的中医证候,改善心功能,提高LVEF,降低NT-pro BNP水平,值得临床推广应用。

苓桂剂“方-证要素对应”解析

苓桂剂是以茯苓、桂枝为主要配伍组合,具有通阳化气行水之功,用于治疗水气病的一类方剂。"方—证要素对应"是指"方剂要素"与"证候要素"之间存在的对应关系,其中蕴含着病机归纳、以证导方、以方归素等一系列法则,是辨证论治临证组方过程中的重要依据。解析苓桂剂群的方证要素对应关系,旨在探寻其衍化规律和配伍特点,以期对临床组方有所启发。

苓桂术甘配方颗粒治疗慢性心力衰竭(心肾阳虚证)的临床观察

目的观察苓桂术甘配方颗粒治疗慢性心力衰竭(心肾阳虚证)的临床疗效及治疗结束后3月内的复发率情况。方法将60例符合慢性心力衰竭Ⅱ-Ⅲ级(心肾阳虚证)诊断标准的患者随机分为中药配方颗粒治疗组、中药饮片治疗组与对照组,每组20例,中药配方颗粒组予西药常规治疗加苓桂术甘颗粒,中药饮片组予西药常规治疗加苓桂术甘饮片,对照组单予西药常规治疗,疗程均为两周。观察治疗前后患者临床症状、总有效率、左室射血分数(LVEF)、血浆脑尿钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)的变化及治疗结束后3个月内复发率情况。结果治疗2周后,中药配方颗粒组患者心功能改善总有效率为95%,中医证候改善总有效率为85%,复发率为10%,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.025);治疗后中药配方颗粒组左室射血分数(LVEF)显著提高、血液中BNP浓度明显降低(P<0.01);中药配方颗粒组与饮片治疗组差异无统计学意义(P>0.05),中药配方颗粒组与饮片组疗效相当。结论苓桂术甘配方颗粒可有效缓解慢性心力衰竭Ⅱ-Ⅲ级(心肾阳虚证)患者的中医证候,改善左室收缩功能,提高左室射血分数,明显降低血浆BNP含量,中西医结合治疗较单纯西药治疗副作用少,3个月内复发率低,服用方便,临床安全性及依从性更好。

苓桂术甘汤与过敏性鼻炎方证相关的临床研究

目的:通过临床调查探讨苓桂术甘汤与过敏性鼻炎的方证相关。方法:形成"过敏性鼻炎痰饮证调查问卷",根据问卷对150例过敏性鼻炎患者进行证候信息采集分析;用苓桂术甘汤治疗过敏性鼻炎患者40例10 d,观察用药前后症状、体征评分的变化。结果:150例过敏性鼻炎患者全身痰饮证和鼻部痰饮证的出现频率都超过30%,40例患者用苓桂术甘汤治疗有效率达到95%;用药前后的症状、体征评分比较差异有统计学意义。结论:痰饮证证候在过敏性鼻炎患者中出现的频率较高,苓桂术甘汤治疗过敏性鼻炎有效。苓桂术甘汤是治疗痰饮证的代表方,苓桂术甘汤与过敏性鼻炎有一定的方证相关关系。

袁红霞从气血水辨治胃癌前病变经验

袁红霞教授认为胃癌前病变以脾胃失司、气机郁滞为病机关键,气滞水停、痰饮凝聚为主要病理环节,久病入络、瘀血内结为重要病理因素。临证可从调治气血水入手,动态地权衡气血水的关系,分清主次而治之。气滞为主者,需厘清虚实,和调升降,初期实证居多,以小柴胡汤、四逆散为主方加减;中期、后期实邪伤及正气,调治需兼顾气阴不足。偏于水湿痰饮内停者,则利水渗湿、化痰逐饮:饮邪内停者,治以苓桂剂;湿邪中阻者,辨其寒热,寒化以附子理中汤为主,热化则治以平胃散、三仁汤之类。瘀血症状明显者,补虚通络,兼治气水:初期正气尚足,方药以丹参饮、桂枝茯苓丸、三棱、莪术等活血祛瘀之品为主;中后期化瘀要兼顾正气,多用补虚祛瘀之药,如三七粉、仙鹤草等;血水不利者,以当归芍药散为主方加减,若病程较久,热毒瘀阻,可酌加蜂房、山慈菇之品解毒散结。

小议苓桂剂与温阳化气行水法的运用

此文以苓桂术甘汤为切入点,从上焦病证、中焦病证、下焦病证3个方面入手,纵览《黄帝内经》时代至近代医学典籍,对前人应用苓桂剂的病症进行深入探讨,并对苓桂剂证阳虚水停之病机及其作用机制进行分析,认为苓桂剂作用关键在于桂枝(或肉桂)之温阳、化气及茯苓之利水分消,苓桂二味同用起到温化水饮的效果,进而总结出治疗水气病的大法为温阳、化气、行水。

苓桂术甘汤的现代临床应用与分析

目的了解苓桂术甘汤现代临床应用概况和优势病种,为经典名方苓桂术甘汤复方制剂开发和临床应用提供参考,也为其他经典名方现代临床应用分析分享思路。方法检索1979年1月1日至2020年2月11日中国知网、维普网、万方数据等数据库相关文献,并用Excel 2010对主治病症、病例数、药味组成、组方特点、药味剂量、用法用量、有效率和不良反应等关键信息整理、统计,从数据角度阐明苓桂术甘汤临床概况和优势病种,并对优势病种分析。结果符合要求的现代临床文献共计543篇,发现苓桂术甘汤在现代临床应用方面呈现主治病症较多、病例数多集中50~99例、药味组成以加味为主、总有效率超90%、药品不良反应少等特点;心力衰竭为苓桂术甘汤现代临床优势病种之一,心力衰竭治疗方表现药味组成仍然基于原方,药味剂量多样,以茯苓(30、15、20 g),桂枝(10、15、6 g),白术(15、10、20 g),甘草(6、10、3 g)常见;服用方法为水煎煮,每日1剂,分2~3次服,每次100~200 mL;组方规律以加减益气、活血、利水药味进行配伍。结论本文通过对苓桂术甘汤现代临床应用概况和优势病种进行分析,可以为其研制提供临床资料,指导其产业化的临床应用。

苓桂术甘汤及其加味辅助治疗慢性心力衰竭的Meta分析

目的:系统评价西药常规治疗加苓桂术甘汤或加味方与单纯西药常规治疗心力衰竭的临床疗效。方法:电子检索中国期刊全文数据库(CNKI)、中文科技期刊全文数据库(VIP)、万方数据库,中国生物医学文献数据库(CBM)、PubMed、Embase和The Cochrane Library。手工检索相关杂志,搜集单纯西药常规与西药常规加苓桂术甘汤及其加味方治疗慢性心力衰竭的随机对照试验,按照相关方法评价纳入文献质量和提取有效数据进行Meta分析。结果:共纳入4个RCTs,总计280例患者。Meta分析显示:西药常规加用苓桂术甘汤或其加味方可提高心力衰竭治疗的总有效率[OR=2.79,95%CI(1.43,5.46),P=0.003];可提高心脏的左室射血分数,单纯苓桂术甘汤亚组[WMD=4.77,95%CI(2.04,7.50),P=0.006],苓桂术甘加味方亚组[WMD=11.50,95%CI(6.39,16.61),P<0.001];此外,分别有1项研究显示苓桂术甘汤及其加味方可减少血浆(BNP),(ANP)浓度。结论:西药常规加用苓桂术甘汤及其加味方较单纯西药常规治疗可进一步提高心力衰竭的临床疗效。