目的观察脑出血后LINGO-1表达的变化,探讨维甲酸对脑出血后LINGO-1表达的影响。方法将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和维甲酸治疗组,选取造模后1d、3d、7d和14d为观察点。制备脑出血模型,Longa评分法评价神经功能缺损程度,RT-PCR...目的观察脑出血后LINGO-1表达的变化,探讨维甲酸对脑出血后LINGO-1表达的影响。方法将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和维甲酸治疗组,选取造模后1d、3d、7d和14d为观察点。制备脑出血模型,Longa评分法评价神经功能缺损程度,RT-PCR法检测LINGO-1 m RNA的表达,Western blot法检测LINGO-1蛋白的表达。结果模型组Longa评分7d最高,14d出现下降;LONG-1 m RNA 3d表达最高,7~14d出现下降;LONG-1蛋白7d到高峰,14d出现下降。维甲酸治疗组在14d Longa评分较模型组下降(P<0.05);在7d和14d LINGO-1m RNA表达较模型组下降(P<0.05);在14d LINGO-1蛋白表达较模型组下降(P<0.05)。结论脑出血后LINGO-1表达明显上调,呈先上升后下降的变化规律。维甲酸可以降低LINGO-1 m RNA和蛋白的表达及神经功能评分。展开更多
背景:研究LINGO-1在脊髓神经干细胞分化过程中的表达及效应对调控神经干细胞分化及修复脊髓损伤有着重要的意义。目的:观察LINGO-1在脊髓神经干细胞分化过程中的表达特征及生物学作用。方法:体外培养大鼠脊髓神经干细胞,并对培养细胞进...背景:研究LINGO-1在脊髓神经干细胞分化过程中的表达及效应对调控神经干细胞分化及修复脊髓损伤有着重要的意义。目的:观察LINGO-1在脊髓神经干细胞分化过程中的表达特征及生物学作用。方法:体外培养大鼠脊髓神经干细胞,并对培养细胞进行Nestin染色干性鉴定及诱导分化多能性鉴定。于分化第0天及第5天进行LINGO-1与Nestin(神经干细胞)、β-TubulinⅢ(神经元细胞)、GFAP(星形胶质细胞)及O4(少突胶质细胞)免疫荧光双染色,观察LINGO-1的表达特征。体外培养的大鼠脊髓神经干细胞分为对照组及干扰组,干扰组脊髓神经干细胞感染LINGO-1 sh RNA慢病毒下调LINGO-1表达,对照组脊髓神经干细胞感染Scramble-sh RNA慢病毒,于感染第5天免疫荧光染色检测神经元突起长度。结果与结论:(1)脊髓神经干细胞可以分化成为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞;(2)LINGO-1在脊髓神经干细胞及其分化的神经元、少突胶质细胞中表达,但不在星形胶质细胞中表达;(3)下调LINGO-1表达后,干扰组神经元突起长度较对照组明显增长,差异有显著性意义(P<0.05);(4)结果表明,体外培养的脊髓神经干细胞具有多项分化潜能,LINGO-1在脊髓神经干细胞及分化早期的神经元、少突胶质细胞中表达,但不在星形胶质细胞中表达。LINGO-1对分化后神经元突起生长具有负性调控作用。展开更多
目的表达和纯化带多聚组氨酸(6×His)标签的人LINGO-1胞外段(hLINGO-1aa76-319)融合蛋白,并制备兔源性抗hLINGO-1aa76-319的多克隆抗体(pAb)。方法利用PCR从pCMV-SPORT6获得hLINGO-1aa76-319编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pET30...目的表达和纯化带多聚组氨酸(6×His)标签的人LINGO-1胞外段(hLINGO-1aa76-319)融合蛋白,并制备兔源性抗hLINGO-1aa76-319的多克隆抗体(pAb)。方法利用PCR从pCMV-SPORT6获得hLINGO-1aa76-319编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pET30a(+),构建重组表达质粒pET30a(+)-hLINGO-1aa76-319;将阳性重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His-hLINGO-1aa76-319融合蛋白,经Ni-NTA螯合树脂纯化,纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗血清,Protein A Sepharose柱纯化获得多抗,ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性。结果成功构建了pET30a(+)-hLINGO-1aa76-319原核表达载体,原核蛋白hLINGO-1aa76-319以包涵体形式在大肠杆菌高水平表达,通过复性与亲和层析获得纯度在90%以上的hLINGO-1aa76-319蛋白,蛋白浓度为4600mg/L,制备的抗hLINGO-1aa76-319多抗效价高达1:1.6×106,Western blotting鉴定其具有良好的特异性。结论获得高纯度hLINGO-1aa76-319蛋白并成功制备特异性pAb,为进一步研究LINGO-1的生物学功能提供实验基础。展开更多
文摘目的观察脑出血后LINGO-1表达的变化,探讨维甲酸对脑出血后LINGO-1表达的影响。方法将72只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和维甲酸治疗组,选取造模后1d、3d、7d和14d为观察点。制备脑出血模型,Longa评分法评价神经功能缺损程度,RT-PCR法检测LINGO-1 m RNA的表达,Western blot法检测LINGO-1蛋白的表达。结果模型组Longa评分7d最高,14d出现下降;LONG-1 m RNA 3d表达最高,7~14d出现下降;LONG-1蛋白7d到高峰,14d出现下降。维甲酸治疗组在14d Longa评分较模型组下降(P<0.05);在7d和14d LINGO-1m RNA表达较模型组下降(P<0.05);在14d LINGO-1蛋白表达较模型组下降(P<0.05)。结论脑出血后LINGO-1表达明显上调,呈先上升后下降的变化规律。维甲酸可以降低LINGO-1 m RNA和蛋白的表达及神经功能评分。
文摘背景:研究LINGO-1在脊髓神经干细胞分化过程中的表达及效应对调控神经干细胞分化及修复脊髓损伤有着重要的意义。目的:观察LINGO-1在脊髓神经干细胞分化过程中的表达特征及生物学作用。方法:体外培养大鼠脊髓神经干细胞,并对培养细胞进行Nestin染色干性鉴定及诱导分化多能性鉴定。于分化第0天及第5天进行LINGO-1与Nestin(神经干细胞)、β-TubulinⅢ(神经元细胞)、GFAP(星形胶质细胞)及O4(少突胶质细胞)免疫荧光双染色,观察LINGO-1的表达特征。体外培养的大鼠脊髓神经干细胞分为对照组及干扰组,干扰组脊髓神经干细胞感染LINGO-1 sh RNA慢病毒下调LINGO-1表达,对照组脊髓神经干细胞感染Scramble-sh RNA慢病毒,于感染第5天免疫荧光染色检测神经元突起长度。结果与结论:(1)脊髓神经干细胞可以分化成为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞;(2)LINGO-1在脊髓神经干细胞及其分化的神经元、少突胶质细胞中表达,但不在星形胶质细胞中表达;(3)下调LINGO-1表达后,干扰组神经元突起长度较对照组明显增长,差异有显著性意义(P<0.05);(4)结果表明,体外培养的脊髓神经干细胞具有多项分化潜能,LINGO-1在脊髓神经干细胞及分化早期的神经元、少突胶质细胞中表达,但不在星形胶质细胞中表达。LINGO-1对分化后神经元突起生长具有负性调控作用。
文摘目的表达和纯化带多聚组氨酸(6×His)标签的人LINGO-1胞外段(hLINGO-1aa76-319)融合蛋白,并制备兔源性抗hLINGO-1aa76-319的多克隆抗体(pAb)。方法利用PCR从pCMV-SPORT6获得hLINGO-1aa76-319编码序列,将其亚克隆至原核表达载体pET30a(+),构建重组表达质粒pET30a(+)-hLINGO-1aa76-319;将阳性重组质粒转化大肠杆菌,IPTG诱导表达6×His-hLINGO-1aa76-319融合蛋白,经Ni-NTA螯合树脂纯化,纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗血清,Protein A Sepharose柱纯化获得多抗,ELISA法检测抗体效价,Western blot法检测抗体特异性。结果成功构建了pET30a(+)-hLINGO-1aa76-319原核表达载体,原核蛋白hLINGO-1aa76-319以包涵体形式在大肠杆菌高水平表达,通过复性与亲和层析获得纯度在90%以上的hLINGO-1aa76-319蛋白,蛋白浓度为4600mg/L,制备的抗hLINGO-1aa76-319多抗效价高达1:1.6×106,Western blotting鉴定其具有良好的特异性。结论获得高纯度hLINGO-1aa76-319蛋白并成功制备特异性pAb,为进一步研究LINGO-1的生物学功能提供实验基础。
