产脂肪酶重组菌SRI-01随机突变及诱导表达条件的研究

采用大引物全质粒法(MEGAWHOP)随机突变,快速有效地对研究室前期构建的一株脂肪酶重组菌株SRI-01进行分子改造,通过对易错聚合酶链反应(ep-PCR)获得的2 300个突变株进行96孔板高通量筛选,得到一株优良突变株SRM08。通过单因素试验,优化诱导前的菌体生物量、诱导剂异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的浓度、Ca Cl2的浓度、诱导温度。通过比较3种不同破碎缓冲液浓度和缓冲液p H对脂肪酶活力的影响,选择最优的破碎缓冲液。确定突变株SRM08最佳诱导表达条件为菌液生物量OD600 nm值为0.7,IPTG的浓度为0.1 mmol/L,Ca Cl2浓度为4 mmol/L,诱导温度为25℃,采用5 mmol/L磷酸钠缓冲液为破碎缓冲液,p H值为7.0。在此优化条件下,脂肪酶活达到88 508 U/L,为原重组菌株SRI-01的2.84倍。

脂肪酶高产菌株选育和菌种库的建立

从山东省济南市植物油厂、肉联厂、乳品厂、菜市场等处的含油土壤中分离筛选到80余株脂肪酶活性较高的产生菌,包括细菌、霉菌、酵母等各种类型,我们对其中的部分菌株进行了形态学及酶学性质的初步研究。一株酶活较高的菌株Y-11经鉴定为丝孢酵母属（Trichoporon）,用紫外线及亚硝酸对其进行了双重诱变,然后用制霉菌素及琥珀酸钠筛选耐药性突变株,使酶活提高了155％,并将筛选到的菌株建立一个能够产生各具特色的脂肪酶的菌种库,为今后进一步开展脂肪酶应用研究打下基础。

一株耐热脂肪酶产生菌的筛选及酶学性质研究

从云南省富油地采取了60份土样中,利用透明圈法筛选出一株耐热脂肪酶产生菌。对其酶学性质和发酵条件进行了研究,酶学性质表明,该酶最适作用温度为50℃,最适pH6.0,在pH3.0-8.0范围内稳定,在60℃保温60 min酶活还保留70%;70℃保温60 min残余50%;具有良好的热稳定性;不同金属离子有不同的作用,Ca+,K+对酶有激活作用,Fe3+、Pb2+、Mn2、Cu2+、Al3+、Zn2+对酶活有抑制作用。EDTA对酶影响不大。产酶最佳条件为:MgSO4.7H2O 0.05 g,K2HPO40.1 g,CaCO30.25 g,可溶性淀粉2.5 g,大豆粉2.5 g,装液量50 mL。这株细菌通过培养基优化酶活达到20.3 U/mL。

一株脂肪酶产生菌的筛选鉴定及其酶学性质研究

分离筛选脂肪酶高产菌株,为生物降解富含油脂的工业及生活污水提供菌种资源.从校园食堂附近土壤中分离微生物,结合中性红油脂平板筛选法与三丁酸甘油酯平板透明圈法筛选脂肪酶高产菌株.根据菌株形态特征、生理生化特性以及分子生物学特征鉴定高产菌株,进而利用酸碱滴定法定量测定脂肪酶酶活,探究该菌株产生脂肪酶的最适酶促反应温度、pH值等酶学性质.研究结果表明,筛选获得的脂肪酶产生菌SLB-1为革兰氏阳性芽孢杆菌;硝酸盐还原呈阳性,能够水解淀粉和液化明胶;基于16SrDNA的系统发育分析结果表明SLB-1菌株与登录号为NR116240甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)处于同一最小分支,故将SLB-1菌株鉴定为甲基营养型芽孢杆菌,命名为B.methylotrophicus SLB-1,该菌株产脂肪酶的最适培养时间是24h,酶促反应的最适温度为30℃,最适pH值为7.0.本研究分离鉴定了脂肪酶产生菌Bacillus methylotrophicus SLB-1,且由该菌所产生的脂肪酶为中性常温酶.

脂肪酶产生菌产酶条件的研究

对脂肪酶产生菌进行了筛选,并对优势菌株杆菌的产酶条件进行研究。研究包括培养基组成(碳源、氮源、无机盐)、初始pH值等影响因素。通过正交试验,获得了较为优化的脂肪酶产酶条件,获得的最大酶活为68.58 U/mL。

脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件的优化

从学校餐厅下水道废水中筛选获得7株脂肪酶生产菌,其中菌株X2产酶活性最高,根据其生理生化特性和16SrDNA序列系统发育分析,将其鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa).通过正交试验优化菌株X2的产酶条件,最适产酶条件为大豆油10.0g.L-1、蛋白胨5.0g.L-1、初始pH 7.0、摇床转速150r.min-1、培养温度35℃、接种量3%,X2的脂肪酶酶活达42U.mL-1.

紫外线与微波复合诱变选育高产脂肪酶菌株的研究

研究选育高产脂肪酶菌株。采用紫外线诱变、微波诱变和紫外微波复合诱变出发菌株H3,测定比较酶活,确定最佳诱变效果。结果表明,出发菌株经紫外线和微波诱变后,所产脂肪酶的最高酶活分别为57.984 U/m L和57.1 U/m L,比出发菌株H3提高了38.3%和36.2%,经微波辐射40 s和紫外线照射80 s的复合诱变菌株M3产酶活力最高,达61.6 U/m L,比出发菌株H3提高了46.85%。

脂肪酶高产菌株的筛选及产酶条件优化

为获得高产脂肪酶菌株,对包括白地霉在内的数十种微生物进行了筛选。在采用油脂培养基进行初步筛选之后,用酸碱滴定法对菌株所分泌的脂肪酶活力进行测定,筛选获得了高产脂肪酶的白地霉菌株,其酶活力达10.79 U/mL;然后对该菌株的产脂肪酶培养基配方、pH值、温度、摇床转速等条件进行优化,得到最适产脂肪酶条件是:培养基配比的橄榄油2%、牛肉膏2%、蔗糖0.5%、(NH4)2SO40.1%,最优培养条件为pH值7.0、温度28℃、摇床转速225 r/min。

脂肪酶产生菌的筛选及其耐甲醇驯化的研究

从土样中分离出34株脂肪酶产生菌,在维多利亚蓝培养基上初筛出透明圈与菌落直径比值较大的6株菌,复筛出产脂肪酶活性较高的菌株FM-1,其所产脂肪酶主要为胞内酶,产脂肪酶活力为132 U/g cell。通过反复的驯化培养方式将菌株FM-1驯化成耐甲醇的优良菌株。在甲醇质量浓度为11 mg/L的培养基中驯化后的脂肪酶相对活力为35%,而出发菌株在此环境中不能生长。

一株脂肪酶产生菌的筛选

从生活污水取样,以大豆油为惟一碳源,通过富集驯化培养、中性红油脂平板初筛得到29株菌株.经透明圈法筛选,得到7株透明圈直径(D)与菌落直径(d)比值大于或等于2的菌株.测定各菌株发酵液的脂肪酶活性进行复筛,得到一株高效产脂肪酶菌株X2,其脂肪酶活性为41.7 U/mL,所产脂肪酶稳定性较好.根据其形态学及生理生化特征,初步鉴定该菌株为产碱假单胞菌.

脂肪酶及其产生菌的筛选与改良研究进展

脂肪酶(lipase,E.C.3.1.1.3,甘油酯水解酶)是一类特殊的酯键水解酶,能在异相系统(油—水)界面上水解特殊酯(脂肪酸甘油酯)类,具有重要而广泛的工业用途。综述了脂肪酶及其产生菌的筛选与改良研究进展。

脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件优化

从不同土样中分离获得36株脂肪酶产生菌,其中zj-5菌株产酶活性最高,通过对zj-5进行形态学观察,初步确定其属于酵母菌.通过正交试验设计,对zj-5的产脂肪酶条件进行优化,在摇瓶培养条件下,其最适产酶条件为:葡萄糖10.0 g/L,蛋白胨6.0 g/L,反应起始pH值为6.0,发酵温度为42℃,在此条件下的产酶可达245 U/mL.

除膻菌株分离鉴定及其对膻味脂肪酸降解能力的研究

为了分离筛选出能作用于膻味脂肪酸的微生物,从火腿和土壤中分离出11株菌,这11株菌均能对羊油脂进行水解。通过形态学、生理生化特征鉴定及16S rRNA基因序列和ITS基因序列分子生物学鉴定,确定为6株细菌和5株霉菌。分别将11株菌接种到加入4-甲基辛酸和4-乙基辛酸的液体培养基进行发酵,发现4-甲基辛酸的减少量达到30%~70%,4-乙基辛酸减少量达到10%~70%。这11株菌对膻味脂肪酸具有不同程度的降解作用,该研究结果可为微生物羊肉除膻提供理论基础。

不同生境产脂肪酶菌株的筛选及多样性

为发掘不同特性脂肪酶微生物资源,采用纯培养方法从青海高寒草地、雅安山区、成都平原分离得到产脂肪酶菌株54株.通过对菌株的DNA进行ERIC-PCR指纹图谱分析,按聚类树划分为5个操作分类单元.16S rDNA序列测定和聚类分析显示,分离菌株分布于芽孢杆菌属(Bacillus)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、假单胞菌属(Pseudomonas)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠杆菌属(Enterobacter).多样性分析表明,与青海高寒草地、雅安山区相比,成都平原产脂肪酶菌株遗传多样性更为丰富.在54株菌中都出现了300 bp和1 300 bp两个特异且稳定出现的条带,这两个特异条带可能是产脂肪酶菌株的SCAR标记条带.