紫杉醇固体脂质纳米粒的制备和质量评价

目的利用超声分散法制备紫杉醇固体脂质纳米粒,并考察其稳定性。方法以稳定性、Zeta电位、粒径、包封率为考察指标筛选制备工艺,对超声时间、超声功率、脂质材料和助乳化剂的用量做了详细的考察。结果通过单因素及正交试验确定最佳处方为:脂质骨架单硬脂酸甘油酯(100/150mg)、乳化剂豆磷脂(100mg)、助乳化剂Pluronic F68-聚山梨酯80(2∶1),在(75±5)℃下乳化,之后以功率300W进行超声,时间为20min。结论本实验成功地将紫杉醇装载进固体脂质纳米粒中,纳米粒在胶体分散液中分散均匀,稳定性良好。此制备工艺安全、可靠,有很大的应用前景。

AEYLR小肽修饰的紫杉醇纳米结构脂质载体的制备及抗肿瘤效果评价

目的:制备序列为丙氨酸-谷氨酸-酪氨酸-亮氨酸-精氨酸(简称为"AEYLR")的小肽修饰的紫杉醇(PTX)纳米结构脂质载体(A-P-NLC),并对其体内外抗肿瘤效果进行评价。方法:采用熔融乳化-低温固化法制备纳米结构脂质载体(NLC)、PTX纳米结构脂质载体(P-NLC)和A-P-NLC,表征其外观形态、粒径、多分散指数(PDI)、Zeta电位,并检测其包封率、载药量及体外释放度;以NCI-H1299细胞和S180细胞为对象,采用CCK-8法对游离PTX、P-NLC、A-P-NLC(0.44～44.00μg/mL,以PTX计)的细胞抑制作用进行考察,并计算其半数抑制浓度(IC50);以S180荷瘤小鼠为模型动物,对游离PTX、P-NLC、A-P-NLC(5 mg/kg,以PTX计)的抑瘤效果进行评价。结果:P-NLC和A-P-NLC外观均呈类圆形、分布均匀;A-P-NLC的粒径、PDI、Zeta电位分别为(43.92±0.76)nm、0.203±0.034、(-19.77±1.16)m V,较P-NLC有所增加;A-P-NLC的包封率、载药量分别为(95.71±0.68)%、(1.97±0.25)%,较P-NLC有所降低;A-P-NLC在48 h内累积释放百分率达(35.17±2.08)%,较游离PTX表现出明显的缓释作用,且比P-NLC的释放更缓慢。与游离PTX和P-NLC比较,相同质量浓度的A-P-NLC对NCI-H1299细胞和S180细胞的抑制率大部分均显著升高,IC50值均显著降低;A-P-NLC给药处理的S180荷瘤小鼠无死亡现象,一般状态良好,且瘤体积显著缩小、瘤质量显著降低、瘤质量抑制率显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:A-P-NLC具有明显的缓释作用,其对NCI-H1299细胞和S180细胞的体外抑制作用以及对小鼠S180实体瘤的抑制作用均优于游离PTX和P-NLC,且毒性有所降低。

紫杉醇固体脂质纳米粒大鼠体内药动学

目的研究紫杉醇固体脂质纳米粒在大鼠体内的药动学。方法10只健康大鼠,雌雄各半,分为2组,分别口服给药紫杉醇固体脂质纳米粒和紫杉醇乳剂30 mg.kg-1,在设计的时间点从颈静脉取血,采用RP-HPLC测定紫杉醇在全血中的药物浓度,药动学参数用3P97软件进行处理。结果大鼠口服给药后,紫杉醇固体脂质纳米粒和乳剂的tm ax分别为3.133 h和1.627 h,MRT分别为10.362 h和3.297 h,mρax分别为1.512 2 mg.L-1和0.718 9 mg.L-1。结论固体脂质纳米粒能够显著改善大鼠体内紫杉醇的药动学行为,有利于其更好地发挥抗肿瘤作用。

高效液相色谱法测定紫杉醇及其脂质纳米粒包封率的方法学研究

建立了一种对本实验室研制的新型载带紫杉醇脂质纳米载体（nanostructured lipid carriers,NLC）进行定性定量分析的新方法,并计算紫杉醇的包封率。用反相高效液相色谱法进行测定。采用C18柱对未纯化的紫杉醇脂质纳米粒进行分离检测,梯度法分离,流动相为水和乙腈,紫外检测器波长为227 nm,荧光检测器激发波长为428 nm,发射波长为515 nm。结果表明梯度法对紫杉醇脂质纳米粒和游离紫杉醇的分离效果良好,辅料和试剂无干扰,紫杉醇在3.0~80.0 mg/L之间有良好的线性关系,线性方程为：Y=42100ρ＋8250,r=0.9999,日内RSD为0.15%（n=5）,日间RSD为0.25%（n=4）,平均回收率为109.09%,RSD为0.12%,通过本方法,测定的紫杉醇纳米粒平均包封率为68.78%。本法可对紫杉醇进行定量分析,也可对紫杉醇脂质纳米粒制剂进行定性和定量分析,可以直接测量计算其包封率。

不同光强对曼地亚红豆杉生长及生理代谢的影响

分析了不同光强对曼地亚红豆杉生长及生理代谢的影响,结果表明,适当的遮阴能够促进曼地亚红豆杉的生长,以透光率70%最佳,过高或过低都会对其产生抑制作用。初级代谢产物的增加是促进曼地亚红豆杉生长的原因,生长与初级代谢产物的变化趋势一致,透光率为70%时,初级代谢产物的积累达到最大。过低的光照强度会明显抑制紫杉醇的积累。因此,70%透光率是曼地亚红豆杉在重庆区低海拔地区种植的最适光环境。

基于硅质体的紫杉醇抗癌药物释放系统

设计了一种新型药物载体用以提高紫杉醇载体的稳定性和体外药物缓释性能。首先合成一种新型有机/无机复合脂质,采用薄膜水化法制备空白硅质体,并研究其稳定性;将其装载抗癌药物紫杉醇后,形成紫杉醇硅质体并研究体外药物缓释性能。结果表明:利用新型复合脂质制备的硅质体在表面活性剂环境中具有良好的稳定性;成功将紫杉醇包埋于硅质体中制备成紫杉醇硅质体,粒径大小为(170.5±2.9)nm,体外药物释放实验表明,它比传统紫杉醇脂质体具有更好的药物缓释性能,药物包封率达到(69.70±5.17)%,因此新型复合脂质制备的硅质体是一种理想的纳米药物载体材料。

叶酸偶联聚合物修饰的紫杉醇纳米脂质载体制备及性质研究

目的:制备叶酸偶联聚合物修饰的紫杉醇纳米脂质载体,并对处方工艺进行优化,考察其体外释放。方法:采用超声分散法制备纳米脂质载体,采用正交设计优化处方,透射电镜观察微观形态,激光粒度分析仪测定粒径及分布,电位仪测定Zeta电位,应用超滤法测定纳米脂质载体的包封率;以累积释药百分率为指标,通过方程拟合释药曲线,考察制剂的体外释药特性。结果:优化处方制得的脂质载体的平均粒径(132±18)nm,Zeta电位(-18.8±6.69)m V,包封率88.40%,制剂24 h体外累积释药百分率为39.3%,体外释放符合Higuchi方程Q=0.090t1/2-0.034(r=0.9975)和Weibull方程Q=0.764 t1/2-2.988(r=0.9965)。结论:本实验获得了较理想的叶酸偶联聚合物修饰的紫杉醇纳米脂质载体,其体外释放特性符合缓释制剂特征。

紫杉醇脂质纳米粒子对KB、SKOV3细胞作用的对比分析

目的:比较紫杉醇脂质纳米粒子(TAX-NLC)对KB、SKOV3细胞的抑制作用。方法:激光共聚焦显微镜观察TAX-NLC作用于KB、SKOV3细胞对Ca2+的影响;MTT法测定TAX-NLC作用于KB、SKOV3细胞抑制率;激光共聚焦显微镜观察TAX-NLC作用于KB、SKOV3细胞形态学的变化。结果:TAX-NLC作用后KB细胞Ca2+浓度高于SKOV3细胞;TAX-NLC作用后KB细胞的抑制率高于SKOV3细胞;TAX-NLC作用KB细胞产生多核细胞高于SKOV3。结论:TAX-NLC对KB细胞更敏感,Ca2+浓度、抑制率、多核细胞比例密切相关联。

超声触发载多西紫杉醇纳泡对兔VX2乳腺癌肿瘤模型的靶向抗肿瘤作用及监控

目的研究超声触发载多西紫杉醇纳泡(LDLN)对兔VX2乳腺癌肿瘤模型的靶向抗肿瘤作用及监控。方法采用瘤块包埋法建立兔VX2肿瘤模型,将60只荷瘤兔随机平均分为6组:对照组(C组)、LNLD组、单纯药物组(Doc组)、药物联合超声组(Doc+US组)、单纯纳泡联合超声组(PLM+US组)、LDLN联合超声组(LNLD+US组),给予各组不同的药物注射及处理方法。各组治疗前后均行超声检查观察肿瘤的生长变化情况,计算并比较各组的肿瘤体积及体积抑瘤率(TIR)。光镜下观察各处理组对兔VX2乳腺瘤组织细胞形态学的影响。结果在一定强度的超声作用下,LNLD+US组的TIR高于其他组,差异均有统计学意义(P<0.05);各给药组瘤组织内出现不同程度坏死区。结论超声触发LDLN对兔VX2乳腺癌肿瘤模型具有靶向抗肿瘤及监控的双重作用。

叶酸-白蛋白包覆阳离子纳米脂质载体的制备及体内外评价

合成叶酸-白蛋白靶向材料,通过薄膜分散法制备白蛋白包覆阳离子纳米脂质载体(BSA-c NLCs)和叶酸-白蛋白包覆阳离子纳米脂质载体(FA-BSA-c NLCs)。对两者粒径、外观、包封率、载药量、体外细胞摄取、血液和肿瘤药代动力学和药效学进行考察。结果表明,BSA-c NLCs和FA-BSA-c NLCs粒径分别为81.4和79.8 nm,Zeta电位分别为+5.12和+3.74 m V,透射电镜照片表明两者均为圆整的类球形结构。两者紫杉醇包封率都大于97%,载药量在3.7%左右。体外细胞试验证实,高表达叶酸受体的SKOV3对FA-BSA-c NLCs的摄取显著高于BSA-c NLCs,说明FA-BSA-c NLCs对SKOV3具有明显的靶向性。血液及肿瘤药代动力学显示两者体内药代动力学行为无明显差异,证实表面修饰叶酸不影响制剂的体内行为。药效学试验显示,BSA-c NLCs和FA-BSA-c NLCs抑瘤率分别为72.08%和80.75%。可见FA-BSA-c NLCs在一定程度上提高了体内外抗肿瘤疗效,在肿瘤的治疗中具有较好应用前景。

固体脂质纳米环孢霉素A联合紫杉醇对结肠癌CCL187细胞增殖及Smac/Livin蛋白表达的影响

目的探讨固体脂质纳米环孢霉素A(cyclosporin a-loaded solid lipid nanopanicles,SLN-CsA)与紫杉醇(paclitaxel,PAC)联合对人结肠癌CCL187细胞株增殖及凋亡的影响。方法将环孢霉素A(cyclosporin A,CsA)制备成SLN-CsA新型给药系统,分别检测PAC、CsA、SLN-CsA、PAC+CsA、PAC+SLN-CsA作用于人结肠癌CCL187细胞株后,细胞形态学及超微结构的变化,细胞凋亡率及凋亡相关基因蛋白的表达。结果 SLN-CsA可抑制CCL187细胞生长,抑制率与药物浓度及作用时间呈依赖关系。24 h IC50=38.25μmolL,PAC与SLN-CsA联合诱导细胞凋亡作用增强,具有显著协同作用;Livin表达减弱,Smac表达增强。结论 SLN-CsA联合PAC对CCL187细胞株具有较好的抑制增殖及促凋亡作用,通过下凋Livin表达及上调Smac表达而诱导细胞凋亡。

共载紫杉醇与胡椒碱的固体脂质纳米粒的体外药物释放

目的制备共载紫杉醇与胡椒碱的固体脂质纳米粒(PP-SLN),测定其粒径及Zeta电位并评价其体外释放行为。方法采用溶剂挥发-高压均质法制备PP-SLN,建立HPLC法测定紫杉醇体外释放的方法学,并采用正向动态膜透析法对PP-SLN体外药物释放进行评价。结果PP-SLN的粒径为(53.72±1.43)nm,Zeta电位为(-19.4±3.31)mV。PP-SLN中的紫杉醇于48 h的累积释放量约为76%,对照制剂(PTX混悬液)中的紫杉醇48 h时累积释放量约为30%。结论本试验制备的PP-SLN粒径小,粒度分布均匀,且可提高紫杉醇的体外释放量。

表柔比星联合紫杉醇脂质体的新辅助化疗方法治疗三阴性乳腺癌的效果

目的 探讨表柔比星联合紫杉醇脂质体的新辅助化疗方法治疗三阴性乳腺癌的临床效果。方法 选取2015年6月-2016年6月我院收治的80例三阴性乳腺癌患者作为研究对象,随机分为观察组和对照组,各40例。对照组单独给予表柔比星新辅助化疗,观察组采用紫杉醇脂质体、表柔比星联合新辅助化疗。比较两组治疗前后的肿瘤直径、乳腺癌易感基因（BRCA1）水平、叉头框蛋白A1（FOXA1）水平、临床疗效及治疗过程中的不良反应发生率。结果 观察组的总有效率为82.50%,显著高于对照组的70.00%,差异有统计学意义（P〈0.05）。两组的不良反应发生率比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。两组治疗后的肿瘤直径、BRCA1和FOXA1水平均低于治疗前,差异有统计学意义（P〈0.05）。观察组治疗后的肿瘤直径、BRCA1和FOXA1水平显著优于对照组治疗后,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 采用紫杉醇脂质体、表柔比星联合新辅助化疗治疗三阴性乳腺癌安全可靠,不增加不良反应,患者的耐受性较好,具有较高的临床应用价值。

紫杉醇固体脂质纳米粒包封率的测定

目的建立紫杉醇固体脂质纳米粒(Paclitaxel Solid Lipid Nanoparticles,PTX-SLN)包封率的测定方法。方法分别采用凝胶柱过滤法、超速离心法、微柱离心法分离固体脂质纳米粒和游离药物,并进行方法学考察,优化包封率测定条件。结果微柱离心法能有效地将PTX-SLN与游离药物PTX分离,柱回收率测定结果为98.23%,3次包封率测定的平均值为94.07%,RSD为0.78%。结论微柱离心法简便,结果重现性好,适于PTX-SLN包封率的测定。

微通道内载紫杉醇固体脂质纳米粒制备及工艺优化

目的:制备载紫杉醇固体脂质纳米粒。方法:微通道内采用溶剂扩散法制备脂质纳米粒,并通过正交优化制备工艺。结果:制备的纳米粒稳定性良好,平均粒径为(129.87±2.91)nm,包封率为(3.11±0.06)%,载药率为(43.67±0.24)%。结论:本研究制备的载药固体脂质纳米粒载药特性与重复性良好。

紫杉醇-姜黄素介孔SiO_2/脂质复合递药系统体外释药研究

为了考察自制紫杉醇-姜黄素介孔SiO_2/脂质复合递药系统的体外释药行为,建立高效液相色谱法同时检测紫杉醇-姜黄素浓度;筛选适当增溶剂增加紫杉醇-姜黄素溶解度;反透析法考察各药物组的体外释药行为,绘制紫杉醇-姜黄素累积释药曲线并进行释药模型拟合。结果显示,不同药物组中紫杉醇-姜黄素释药行为表现出一定差异性,两种药物单药组累积释药量均高于混合组,自制递药系统累积释药量均高于裸药组。但紫杉醇不同递药系统组累积释药量由高到低分别为:MSNs>PLMSNs>LMSNs,姜黄素不同递药系统组累积释药量由高到低分别为:LMSNs>PLMSNs>MSNs。此外,PLMSNs组中紫杉醇-姜黄素释药行为均符合Hixon-Crowell释药模型。

穿膜肽修饰紫杉醇固体脂质纳米粒的大鼠在体肠吸收研究

考察硬脂酸-八聚精氨酸(stearic acid-octaarginine,SA-R8)修饰的紫杉醇(paclitaxel,PTX)固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles,SLN)在大鼠肠道的吸收情况。以市售制剂(Taxol)和PTX-SLN为对照,采用单向灌流法,研究不同肠段、不同药物浓度及加入P-糖蛋白抑制剂后SA-R8-PTX-SLN的大鼠肠道吸收动力学。结果表明,3种制剂在全肠段都有吸收,且在十二指肠吸收最好。在各个肠段,3种制剂的净累积吸收量表现为SA-R8-PTX-SLN>PTX-SLN>Taxol(P<0.05)。SA-R8-PTX-SLN在十二指肠的吸收在考察药物浓度范围内呈现线性吸收。加入P-糖蛋白抑制剂后,Taxol和PTX-SLN在十二指肠的净累积吸收量均显著提高(P<0.05),而SA-R8-PTX-SLN的净累积吸收量与未加P-糖蛋白抑制剂相比无显著性差异(P>0.05)。因此,SA-R8和SLN共同作用,可显著促进紫杉醇的口服吸收。

小干扰RNA-紫杉醇固体脂质纳米粒克服肿瘤多药耐药性的体外细胞学研究

肿瘤多药耐药性(MDR)是临床上肿瘤化疗失败的主要原因,其中由多药耐药基因(MDR1)编码的P-糖蛋白(P-gp)又在MDR发生机制中占重要作用。本实验设计合成特异性沉默MDR1基因的小干扰RNA(siRNA),协同抗肿瘤药物紫杉醇(PTX)共同包裹于固体脂质纳米粒(SLNs)中,利用基因治疗和化学治疗的协同作用,以期克服肿瘤多药耐药性。实验包括制备siRNA-紫杉醇固体脂质纳米粒(siRNA-PTX-SLNs);检测载药SLNs对肿瘤细胞的增殖抑制作用;测定给药后PTX的细胞摄取率;采用实时荧光定量PCR和流式细胞法评价siRNA-PTX-SLNs对MDR1表达的沉默作用。结果显示在耐药细胞MCF-7/ADR中siRNA-PTX-SLNs能够显著提高PTX细胞摄取率,有效沉默MDR1的表达,抑制P-gp的外排作用,促进P-gp底物在细胞的蓄积。因此siRNA-PTX-SLNs可发挥克服肿瘤多药耐药性的协同治疗作用。

微通道法制备载紫杉醇聚乳酸羟基乙酸固体脂质纳米粒

目的制备载紫杉醇固体脂质纳米粒,并对其理化性质、体外释药特性及体外抗肿瘤活性进行初步研究。方法矩形微通道内制备载药纳米粒,正交实验筛选最优处方;动态光散射法测定其粒径;高效液相色谱法测定其载药量和包封率;透析法测定其体外释药特性;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定其体外抗肿瘤活性。结果最优处方制备的纳米粒为规整球形,无明显团聚现象,平均粒径为(129.73±2.41)nm,载药量和包封率分别为(3.11±1.90)%和(43.67±0.55)%;体外释放药物分为突释和持续释放两个阶段,120 h累计释药率为87.3%;体外抗肿瘤活性明显高于紫杉醇原药。结论微通道法制备紫杉醇纳米粒简便可行,制剂质量符合要求,该方法在药学领域应用前景广阔。

纳米化紫杉醇与电离辐射对KB细胞联合作用的研究

目的研究纳米化紫杉醇(TAX-NLC)与电离辐射对KB细胞杀伤的联合作用。方法利用MTT法观察TAX-NLC、电离辐射及其二者联合对KB细胞的杀伤效应。通过流式细胞仪观察TAX-NLC及电离辐射对细胞周期的影响。结果 TAX-NLC较紫杉醇(TAX)对KB细胞具有更强杀伤作用,TAX-NLC或TAX与电离辐射联合作用时,随着剂量的加大,对KB细胞的杀伤作用增强。与同等剂量的电离辐射联合作用时,同浓度的TAX-NLC也比TAX的作用强。同样,TAX-NLC可以影响细胞周期再分布,使G_2/M期细胞比例增加,与电离辐射联合作用时,其对细胞周期的影响要强于TAX。结论 TAX-NLC对KB细胞的杀伤作用高于TAX。TAX-NLC与电离辐射的联合效应比与TAX的联合效应要高。TAX-NLC作用机制可能是其更易通过细胞膜并在细胞中浓聚有关。