单核细胞在脂多糖刺激下发生基因转录并分泌炎症因子(IL-6)的实验研究

目的 新生儿感染导致机体严重病理变化的原因与内毒素有关 ,而内毒素的化学本质是脂多糖 (LPS) ,通过观察 LPS对新生儿脐血单核细胞 (MNC)分泌 IL-6及表达 IL-6m RNA基因的影响 ,探讨严重细菌感染时新生儿机体的防御反应机制。方法 取肝素抗凝脐血 ,用密度离心分离法分离 MNC,以 RPMI1 640培养液调整细胞浓度为 1× 1 0 6 /ml,将细胞悬液铺于 2 4孔培养板上 ,依次加入不同浓度脂多糖 (LPS)培养 3 6h或同一浓度 LPS(1 μg/ml)培养不同时间 ,收集培养上清液及细胞 ,分别用 ELISA和 RT-PCR方法测定 IL-6及 IL-6m RNA表达情况。结果 (1 )脐血 MNC在 LPS刺激 3 ,6,1 2 ,1 8,2 4,3 6h后 IL-6分泌水平逐步增高 ,6h以后增加尤为明显 ,与其他各时间点比较有非常显著差异 (P<0 .0 0 1 )。LPS刺激组与无 LPS对照组相同时间点比较 ,6h内 IL-6变化水平无差异 ,6h以上各点有显著差异 (P<0 .0 1 )。RT-PCR方法检测显示 LPS刺激后 3 h即可见 IL-6m RNA基因表达。 (2 )脐血 MNC受不同浓度 LPS刺激时 ,IL-6分泌水平随 LPS浓度递增。(3 )全部脐血 MNC均检测到 IL-6m RNA基因表达。结论 LPS能诱导新生儿脐血 MNC IL-6m RNA基因转录 ,从而促使IL-6合成、分泌 ,该作用呈时间。

新生儿脐血单核细胞在脂多糖刺激下分泌IL-6及出现IL-6m RNA表达的实验研究

目的 :通过观察LPS对新生儿脐血单个核细胞 (MC)分泌IL 6及表达IL 6mRNA基因的影响 ,探讨严重细菌感染时新生儿机体防御反应机制。方法 :取肝素抗凝剂脐血 ,用密度离心分离法分离MNC ,以RPMI16 40培养液调整细胞浓度为1× 10 6 ml- 1 ,将细胞悬液铺于 2 4孔培养板上 ,依次加入不同浓度脂多糖 (LPS)培养 36h或同一浓度LPS(1μg ml)培养不同时间 ,收集培养上清液及细胞 ,分别用ELISA和RT PCR方法测定IL 6及IL 6mRNA表达情况。结果 :①脐血MNC在LPS刺激 3、6、12、18、2 4、36h后IL 6分泌水平逐步增高 ,6h以后增加尤为明显 ,与其他各时间点比较有非常显著的差异 (P <0 0 0 1)。LPS刺激组与无LPS对照组相同时间点比较 ,6h内IL 6变化水平无差异 ,6h以上各点有显著差异 (P <0 0 1)。RT PCR方法检测显示LPS刺激后 3h即可见IL 6mRNA基因表达。②脐血MNC受不同浓度LPS刺激时 ,IL 6分泌水平随LPS浓度递增。③全部脐血MNC均检测到IL 6mRNA基因表达。结论 :LPS能诱导新生儿脐血MNCIL 6mRNA基因转录 ,从而促使IL 6合成、分泌 ,该作用呈时间、剂量依赖性变化。

脂多糖对新生儿脐血单个核细胞产生IL-6及IL-6mRNA表达水平的影响

【目的】 通过观察LPS对新生儿脐血单个核细胞 (MNC)分泌IL 6及表达IL 6mRNA基因的影响 ,探讨严重细菌感染时新生儿机体防御反应机制。 【方法】 取细胞浓度为 1× 1 0 6个 /ml的脐血MNC悬液按每孔 0 .9ml置入 2 4孔培养板 ,每八孔为 1组 ,共 6组 ,按倍比稀释法各组加入不同浓度LPS培养 36小时。同法另设 6组各加同一浓度LPS(1 μg/ml)培养不同时间 ,再设 6组不加LPS者按相应时间培养作为对照组。样本处理完毕后收集上清液及细胞分别用ELISA和RT PCR方法测定IL 6及IL 6mRNA表达情况。 【结果】 脐血MNC在PLS刺激 3、6、1 2、1 8、2 4、36小时后IL 6分泌水平逐步增高 ,6小时以后增加尤为明显 ,与其他各时间点比较差异非常显著 (P <0 .0 0 1 )。LPS刺激组与对照组相同时间点比较 ,6小时内IL 6变化水平无差异 ,6小时以上各点差异有显著性 (P <0 .0 1 )。RT PCR方法检测显示LPS刺激后 3小时即可见IL 6mRNA基因表达。脐血MNC受不同浓度LPS刺激时 ,IL 6分泌水平随LPS浓度递增。全部脐血MNC均检测到IL 6mRNA基因表达。 【结论】 LPS能诱导新生儿脐血MNCIL 6mRNA基因转录 ,从而促使IL 6合成、分泌 ,该作用呈时间。