LBP对LPS诱导大鼠肺巨噬细胞TNFα、IL-10mRNA表达的调节作用

目的 探讨脂多糖结合蛋白（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＬＢＰ）对脂多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）Ｓ倪导肺巨噬细胞中ＴＮＦα和 ＩＬ－１０表达的调节作用机制。方法 经硫酸铵盐析、Ｂｉｏ－Ｒｅｘ７０阳离子交换层析和 ＭｏｎｏＱ阴离子交换层析，从大鼠急性反应期血清中分高纯化 ＬＢＰ。分别用 １０ ｎｇ／ｍｌ和 １０００ ｎｇ／ｍｌ的 ＬＰＳ刺激肺泡巨噬细胞，并加入不同浓度 ＬＢＰ，观察肺泡巨噬细胞中 ＴＮＦα和 ＩＬ－１０ｍＲＮＡ的表达。结果 纯化的大鼠 ＬＢＰ在 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ的 ６０ｘ１０３处呈现单一条带，并可增强 ＬＰＳ与单核细胞的结合。当 ＬＰＳ为 １０ ｎｇ／ｍｌ时，ＬＢＰ可明显增强 ＬＰＳ诱导肺巨噬细胞中 ＴＮＦα和 ＩＬ－１０ ｍＲＮＡ的表达，但ＬＢＰ为１０ μｇ／ｍｌ时，对ＬＰＳ的增敏作用反而有所减弱。当ＬＰＳ为１０００ｎｇ／ｍｌ时，ＬＢＰ对 ＬＰＳ无调节作用。结论 ＬＢＰ对 ＬＰＳ的调节作用呈明显的剂量依赖性，而高浓度 ＬＰＳ不需要ＬＢＰ的增敏作用，可能通过ＬＢＰ非依赖途径直接激活靶细胞。

脂多糖结合蛋白多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子的影响

目的 研究脂多糖结合蛋白 (lipopolysaccharidebindingprotein ,LBP)多抗对内毒素 (lipopolysaccharide ,LPS)急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子表达的影响 ,探讨LBP多抗对LPS炎症反应减敏作用的部分机制。方法 将从 4 0只大鼠分离、培养的肺泡巨噬细胞随机分为 4组 ,A组为正常对照组 ,B组为LPS刺激组 ,C组为LBP+LPS刺激组 ,D组为LBP多抗 +LBP +LPS组。运用RT -PCR和ELISA的方法 ,分别检测LBP多抗对LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后IL - 1β ,IL - 18的mRNA表达与TNF -α分泌量的变化。 结果 B组细胞分泌的TNF -α和IL -1β,IL - 18的mRNA表达显著高于正常对照A组 ,而C组细胞显著高于B组 ,D组却低于C组。LBP多抗显著减少LPS刺激的大鼠肺泡巨噬细胞炎症因子TNF -α的分泌和IL - 1β ,IL - 18mRNA表达。 结论 LBP多抗可能降低LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后炎症因子表达 ,减少炎症因子分泌 。

脂多糖结合蛋白多抗对大鼠肺泡巨噬细胞内毒素耐受性及Toll样受体4表达的影响

目的观察脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharidebindingprotein,LBP)多抗对大鼠肺泡巨噬细胞(alveolarmac-rophage,ΦAM)内毒素(lipopolysaccharide,LPS)耐受性与Toll样受体4(Toll-likereceptor4,TLR4)表达的影响,研究二者之间的联系。方法将从32只Wistar雄性大鼠分离所得ΦAM,按随机数字法等分为正常对照组(A)、LPS单次刺激组(B)、LPS二次重复刺激组(C)和LPS二次重复刺激+LBP多抗组。运用ELISA和RT-PCR方法分别检测各组大鼠ΦAM分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及TLR4mRNA表达的变化,Westernblot检测TLR4蛋白表达的变化。结果大鼠ΦAMTNF-α分泌和TLR4mRNA表达及TLR4的蛋白表达水平,A组分别为:(0·45±0·01),(0·77±0·06),(51·03±1·19)μg/L,B组分别为:(0·76±0·03),(1·55±0·25),(122·72±1·75)μg/L,B组与A组比较显著增加,P<0·01;C组分别为:(0·49±0·05),(1·13±0·07),(85·35±0·68)μg/L,C组与B组比较,明显减少,P<0·05。D组分别为:(0·28±0·07),(0·78±0·17),(61·06±1·36)μg/L,D组与C、B组比较,明显减少(P<0·05,P<0·01)。结论LPS重复刺激可使大鼠ΦAM对LPS产生耐受性;LPS耐受性的产生与TLR4表达下降相关;LBP多抗通过降低TLR4表达,提高大鼠ΦAM对LPS耐受性,此乃LBP抗体可用于治疗LPS所致急性肺损伤的部分分子生物学理论基础。

LBP多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞IL-10、IL-18基因表达的影响

目的 探讨脂多糖结合蛋白 (lipopolysaccharidebindingprotein ,LBP)多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞IL 10、IL 18基因表达的影响 ,为LBP多抗治疗急性肺损伤提供实验依据。方法 Wistar雄性大鼠 40只 ,随机分段等分为 5组 ,A组为正常对照组 ;B组为LPS处理组 ;C组为LPS注射前 3 0min加LBP多抗预处理组 ;D组为LPS和LBP多抗同时处理组 ;E组为LPS注射后 3 0min加LBP多抗处理组。分离培养各组大鼠肺泡巨噬细胞 ,用RT PCR方法测定其IL 10、IL 18mRNA表达。结果 LPS显著增加IL 10、IL 18mRNA表达 (B组 ) ;LBP多抗能显著降低二者的表达 ,尤以预处理组(C)更明显。结论 LBP多抗能显著降低内毒素急性肺损伤炎症因子的IL 10、IL

LBP对LPS激活巨噬细胞内p38信号通路的影响

目的 :探讨脂多糖结合蛋白 (LBP)对脂多糖 (LPS)激活肺泡巨噬细胞内p38信号通路的调节作用。方法 :经硫酸铵盐析、Bio -Rex70阳离子交换层析和MonoQ阴离子交换层析 ,从大鼠急性期血清中分离纯化LBP。分别用 0 0 1mg/L和 1mg/L的LPS刺激肺泡巨噬细胞 ,并加入不同浓度LBP( 0mg/L、0 0 1mg/L、0 1mg/L、1mg/L和 10mg/L) ,观察肺泡巨噬细胞中p38蛋白激酶的磷酸化程度。结果 :纯化的大鼠LBP在SDS -PAGE的 6 0kD处呈现单一条带 ,并可增强LPS与单核细胞的结合。当LPS浓度为 0 0 1mg/L时 ,1mg/L以下的LBP可明显增敏LPS对肺泡巨噬细胞内p38信号通路的激活 ,并且这种增敏作用随LBP浓度的增加而增强。但LBP为 10mg/L时 ,LBP对LPS的增敏作用反而有所减弱 ;当LPS为 1mg/L时 ,LBP对LPS激活肺泡巨噬细胞内p38信号通路无调节作用。结论 :LBP对低浓度LPS( 0 0 1mg/L)激活肺泡巨噬细胞内p38信号通路有明显的调节作用 ;而高浓度LPS( 1mg/L)不需LBP的增敏作用 。

异丙酚对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞高迁移率族蛋白B1启动子转录活性的影响

目的探讨异丙酚对脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导肺泡巨噬细胞（alveolar macrophages，AM）高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1 protein，HMGBI）启动子转录激活的影响。方法以基因重组技术将HMGBI启动子克隆人荧光素酶报告基因表达载体pGL3-Basic，得到重组质粒pGt3-HMGB1P，采用脂质体介导的转染技术将质粒转染AM细胞。根据转染质粒和施加刺激的不同分为以下各组：未转染组；转染pGL3-Basic组；转染pGL3-HMGB1P组；转染pGL3-HMGB1P＋IPS（100mg／L）刺激组；转染pG13-HMGB1P＋IPS（100mg／L）＋异丙酚（5mg／L）处理组。通过检测荧光素酶活性来观察启动子活性变化，分别采用Western blot和RT-PCR方法检测细胞HMGB1蛋白和mRNA的表达。应用单因素方差分析进行不同组别间的比较。结果酶切和测序结果证实重组体pGt3-HMGB1P构建正确，荧光素酶活性检测显示pGL3-HMGB1P在AM细胞中有效表达。与转染pGL3-HMGB1P组比较，转染pGL3-HMGB1P＋LPS刺激组HMGB1启动子的转录活性（423±27），HMGB1蛋白（0．49±0．03）和mRNA（0．48±0．04）的表达均显著增加（P〈0．05）；与转染pGL3．HMGB1P＋LPS刺激组比较，转染pGL3．HMGB1P＋LPS＋异丙酚处理组HMGB1动子的转录活性（207±13），HMGB1蛋白（0．17±0．02）和mRNA（0．13±0．02）的表达均显著降低（P〈0．05）。结论异丙酚在转录水平通过抑制LPS诱导HMGB1启动子的转录激活而影响HMGB1的表达。