外泌体及预处理方式对牙髓再生的作用

背景:现有研究已经证实外泌体可有效促进牙髓再生,而经预处理来源的外泌体其生物学功能和特性会发生显著改变,对细胞的增殖、迁移和成牙分化产生不同的影响。目的:探讨外泌体及其预处理方式在牙髓再生领域的应用现状,归纳和总结影响外泌体发挥作用的预处理方式,并阐述外泌体及其预处理方式对牙髓再生的作用。方法:检索万方、中国知网、PubMed和Web of Science数据库中2006-2022年发表的相关文献,以“外泌体,牙髓再生,预处理方式”等为中文检索词,以“Exosomes,Pulp regeneration,Preconditioning method”等为英文检索词进行检索,共纳入78篇文献进行综述分析。结果与结论:①外泌体具有良好的生物相容性、低免疫原性和无细胞毒性等优势,可以通过促进干细胞成牙、成神经和成血管化进而诱导牙髓组织的新生。②经预处理衍生的外泌体可以增强对组织的修复和再生能力,并对再生牙髓的质量有显著影响。③目前应用在牙髓再生领域中的预处理方式包括炎症刺激、低氧诱导、条件培养基和三维培养,其分泌的外泌体均能有效改善再生牙髓的质量,但是不同的预处理方式对牙髓再生的具体效果和机制在未来尚需探索。

陕北白绒山羊卵巢颗粒细胞分离及培养条件的优化

为了解析颗粒细胞的生物学特性及其在卵巢排卵、母羊高产中的生物学作用,试验以陕北白绒山羊卵巢为研究对象,比较了切剖法和注射器抽吸法分离卵巢颗粒细胞,检测细胞活率;分别用DMEM、DMEM/F12和MEM培养基加入10%FBS、β巯基乙醇和1%双抗培养颗粒细胞(即DMEM组、DMEM/F12组和MEM组),用CCK-8法检测培养24 h、48 h的细胞活力,EdU掺入法检测细胞增殖,RT-PCR法检测增殖相关基因(PCNA、CyclinD1、CDK2)及凋亡相关基因(BAX、BCL-2、Caspase3)的表达。结果表明:注射器抽吸法分离卵巢颗粒细胞所得的细胞活率高于切剖法,切剖法可以获得更多的细胞数量;MEM组的细胞活力极显著高于DMEM/F12组和DMEM组(P<0.01),DMEM/F12组细胞活力在24 h、48 h时高于DMEM组但差异不显著(P>0.05)。MEM组与DMEM/F12组EdU染色阳性细胞数差异不显著(P>0.05),MEM组与DMEM/F12组均显著高于DMEM组(P<0.05);MEM组PCNA、CyclinD1基因的表达量高于其他两组,但差异不显著(P>0.05),CDK2基因的表达量极显著高于其他两组(P<0.01),DMEM/F12组和DMEM组的PCNA、CyclinD1和CDK2基因的表达量差异不显著(P>0.05)。MEM组Caspase3的表达量低于其他两组但差异不显著(P>0.05),BCL-2/BAX的相对表达量极显著高于DMEM/F12组和DMEM组(P<0.01)。说明采用抽吸法分离卵巢颗粒细胞并辅以MEM培养基培养,可以实现对陕北白绒山羊卵巢颗粒细胞的有效体外培养。

响应面法优化生防暹罗芽孢杆菌JZ1-4-10的发酵参数

【目的】优化暹罗芽孢杆菌JZ1-4-10的发酵培养基组分配比和发酵条件,以提高其对马铃薯干腐病菌的抑菌活性,为后续相关生防制剂的工业开发及农业应用打下理论基础。【方法】通过单因素试验筛选菌株JZ1-4-10生长的最佳碳源、氮源、无机盐及适宜浓度,通过响应面法获得菌株JZ1-4-10的最佳发酵培养基组分配比,在此基础上优化菌株JZ1-4-10的发酵温度、pH、接种量、装液量和摇床转速等发酵条件。【结果】菌株JZ1-4-10的最佳碳源、氮源和无机盐分别为玉米粉、大豆蛋白胨和KCl。以玉米粉(A)、大豆蛋白胨(B)和KCl(C)为因变量,菌株JZ1-4-10对马铃薯干腐病病原菌茄病镰刀菌的抑菌活性为响应值,拟合得到菌株JZ1-4-10抑菌率(y)的二次多项回归方程为y=64.02+0.4937A+2.31B-2.19C-1.17AB+138AC-1.81BC-4.73A2-4.58B2-3.86C2,其中,玉米粉、大豆蛋白胨和KCl间的交互作用对菌株JZ1-4-10抑菌活性的影响均达显著水平(P<0.05),尤其玉米粉与KCl及大豆蛋白胨与KCl的交互作用对抑菌活性的影响达极显著水平(P<0.01)。响应面分析优化得到菌株JZ1-4-10的最佳发酵培养基组分配方:玉米粉0.94%、大豆蛋白胨1.23%、KCl 0.72%,且该条件下菌株JZ1-4-10的抑菌活性的实际值为65.20%,与试验预测的64.63%非常接近。经单因素优化后菌株JZ1-4-10的最佳发酵条件为装液量90 mL/250 mL、接种量1.5%、摇床转速160 r/min、培养温度30℃、pH 7。【结论】优化后的培养基提高了菌株JZ1-4-10的产孢量和抑菌活性,优化的发酵方案可用于快速、大批量培养菌株JZ1-4-10菌悬液。

双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法

双歧杆菌在维护宿主健康方面具有重要作用,因此对其高密度培养条件的探索具有重要意义。目前,双歧杆菌的高密度培养主要受到培养基组分和培养条件优化的影响。报道了一种用于双歧杆菌高密度培养的补料培养基及补料方法。该方法使用补料与碱泵耦合的方法进行补料,通过控制发酵培养基的pH值来调节补料培养基的补入量。此外,还进行了补料培养基的优化实验,通过调整氢氧化钠和葡萄糖浓度的比例,比较了不同补料培养基的发酵性能。实验结果表明该补料培养基及补料方法适用于两歧双歧杆菌、青春双歧杆菌、动物双歧杆菌、长双歧杆菌等多种双歧杆菌,而且能够达到较高的活菌密度。提出的补料培养基及补料方法可为双歧杆菌的高密度培养提供有效的解决方案。

微生物降解法在氟化工废水处理中的应用研究

氟化工废水中的有机氟化物浓度高且难分解,因此处理难度较高。现行处理方法在实际应用中氟降解率较低,且处理后废水纯净度也较低,无法达到预期的处理效果。研究了微生物降解法在氟化工废水处理中的应用,首先采用加压蒸气灭菌法对降解菌配制环境进行消毒灭菌,然后配制琼脂基础培养基并利用培养基培育降解菌,最后利用降解菌液对氟化工废水进行降解处理,从而实现基于微生物降解法的氟化工废水处理。试验结果证明,氟降解率达到96%以上,废水纯净度在0.8以上,因此,微生物降解法在氟化工废水处理中具有良好的应用前景。

滇中高原石漠化区典型苔藓植物组织培养技术研究

为探索苔藓植物组织培养技术,以滇中高原石漠化区优势苔藓大灰藓(Calohypnum plumiforme)、小石藓(Weissia controversa)和蕊形真藓(Bryum coronatum)为研究对象,研究培养基类型、消毒方式、不同激素浓度等对苔藓植物生长的影响。结果表明,短期繁殖苔藓可将消毒的原位土壤淋溶液作为培养基,且外植体在接种前不消毒,向培养基中添加6-BA 0~0.8 mg/L,但不同苔藓植物最适培养条件有差异。大灰藓较适宜的培养条件:以原位土壤淋溶液为培养基,不消毒外植体,添加6-BA 0.5 mg/L。小石藓较适宜的培养条件:以原位土壤淋溶液为培养基,不消毒外植体,添加6-BA 0.5~0.8 mg/L(或不添加激素)。蕊形真藓较适宜的培养条件:以KNOP为培养基,不消毒外植体,添加6-BA 0.2 mg/L。

不同来源条件培养基对人牙髓干细胞增殖的影响

背景:利用条件培养基与人牙髓干细胞共培养,初步探索可以快速促进人牙髓干细胞增殖的方法,为今后细胞治疗、扩增高质量种子细胞提供研究基础。目的:初步探究不同来源条件培养基对人牙髓干细胞增殖的影响。方法:体外分离培养人牙髓干细胞,并用流式细胞术鉴定。然后将胎牛血清超高速低温离心产物、骨折患者尿液超高速低温离心产物、骨髓来源树突状细胞体外培养上清液、人皮肤成纤维细胞培养上清液与低糖DMEM培养液配置成条件培养基后,再分别与人牙髓干细胞共培养,使用细胞无标记培养观察装置(BioStation-T)连续拍摄各组细胞生长72 h的照片、使用实时无标记细胞分析仪(RTCA)动态监测150 h,比较各组细胞的标准化细胞指数值的差异。结果与结论:①人牙髓干细胞为典型的间充质干细胞形态,表达间充质干细胞表面标志物CD90和CD105,不表达CD34和CD45;②细胞无标记培养观察装置动态监测时,发现胎牛血清超高速低温离心组的颗粒物质被吸收时间要显著早于其他实验组和空白对照组;③在实时无标记细胞分析仪检测时,与空白对照组相比,胎牛血清超高速低温离心组、骨髓来源树突状细胞体外培养上清液组、人皮肤成纤维细胞培养上清液组的标准化细胞指数值均显著升高(P<0.001),骨折患者尿液超高速低温离心组的标准化细胞指数值显著降低(P<0.001);④结果表明,胎牛血清超高速低温离心产物、骨髓来源树突状细胞体外培养上清液、人皮肤成纤维细胞培养上清液所配置的条件培养基能促进人牙髓干细胞增殖,其中胎牛血清超高速低温离心产物所配置的条件培养基对细胞还有一定保护作用。

基于高通量测序的连续传代富集土壤可培养菌菌群变化规律研究

利用高通量测序技术研究连续传代富集过程中,固体和液体牛肉膏蛋白胨可培养土壤细菌多样性的变化规律,量化可培养菌占水稻土本底微生物群落的比例。通过设置常规营养和1/10低营养处理,包括常规牛肉膏蛋白胨固体培养(NA)、液体培养(NB),低营养固体培养(1/10 NA)和低营养液体培养(1/10 NB),开展连续传代富集10次,获得第1、3、5、7、10代细菌培养物并提取DNA,同时直接提取水稻土中所有微生物基因组DNA并对16S rRNA基因进行高通量测序,分析水稻土可培养菌群落变化规律及其占本底土著微生物的比例。结果表明,水稻土本底微生物多样性Chao指数为4806,在连续传代培养10次过程中,降幅最高为98.9%,其中,固体和液体可培养微生物Chao指数以第1代为最低,分别为49.7和142.0,低营养1/10固体和液体培养下,Chao指数分别为75.1和531.0。高通量测序16S rRNA基因后发现水稻土本底土著微生物共713属,连续10次传代富集培养过程中,固体和液体常规培养基中分别检测到52属和600属,低营养1/10固体和液体培养下,分别为62属和597属,可培养菌占比最高分别为8.7%和83.7%。连续第1、3、5、7和10次传代培养过程中,固体培养基每代独有微生物属分别为7、2、3、4和3属,液体培养基独有属则分别为5、1、102、44和24属,低营养1/10培养也得到了类似结果。假单胞菌属(Pseudomonas)是水稻土连续10次传代过程中绝对的优势类群,特别在固体培养基中相对丰度变幅范围为97.70%~99.47%,与水稻土本底土壤中相对丰度相比,增幅最高为74倍。低营养1/10固体条件下,随着传代次数的增加,杆菌属(Bacillus)和代尔夫特菌属(Delftia)成为优势类群,在第10代的相对丰度最高分别为18.07%和13.82%。液体连续传代10次过程中,假单胞菌属也是绝对优势类群,但与固体可培养菌相比略下降为45.48%~55.99%,梭菌属(Clostridium)则是第2大优势类群,其相对丰度范围为23.58%~42.40%,而赖氨酸芽孢杆菌属(Lysinibacillus)则保持相对稳定的增长趋势,其相对丰度范围为1.46%~6.74%。相反,低营养1/10液体培养下,梭菌属和赖氨酸芽孢杆菌属随着培养代数增加而急剧降低,假单胞菌属则成为绝对优势菌,而类芽孢杆菌属(Paenibacillus)则呈现随着传代次数增加而增加的趋势。上述结果表明,水稻土本底微生物多样性最多达可培养菌的96.7倍,连续传代富集培养过程中,水稻土可培养微生物Chao指数先增加后降低,固体和液体培养分别获得74和662属,可培养菌占水稻土所有微生物比例分别为10.4%和92.8%。在固体和液体传代培养过程中,假单胞菌属均占据绝对优势地位,液体可培养微生物多样性明显高于固体。低营养1/10固体和液体培养条件下,可培养微生物类群显著增加,第1代出现的部分微生物类群逐渐被某些优势菌替代,表明连续传代富集培养过程中,在不同代际均富集了生理代谢特征具有明显差异的类群,连续传代富集并不会导致种群结构同质化和单一化。

中温大曲产淀粉酶菌株的筛选鉴定及培养条件优化

为获得高产淀粉酶菌株,丰富淀粉酶生产菌株资源,该研究以中温大曲为样品,利用淀粉水解圈法初筛、摇瓶发酵复筛得到高产淀粉酶菌株,结合菌落形态观察、革兰氏染色和16S rRNA同源序列分析对其进行菌种鉴定,通过单因素试验、Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验确定其产淀粉酶的最佳培养条件。结果表明,共分离筛选得到6株产淀粉酶菌株,其中一株产淀粉酶活最高的菌株(编号为DQ47)被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其最佳培养条件为:可溶性淀粉60 g/L,酵母粉37 g/L,发酵温度39℃,装液量85 mL/250 mL,转速175 r/min,初始pH值6,接种量3%。在此优化条件下,淀粉酶活力为8158.23 U/mL,是优化前的14.75倍。

草鱼肌纤维原代培养的适宜培养基筛选

原代培养的细胞离体时间短,生物学性状和体内细胞相似,为研究生物体的正常生理学和生物化学性质、化合物对生物体的作用等提供了模型系统。探讨不同培养基对草鱼肌纤维的培养效果,筛选出适合草鱼肌纤维原代培养的培养基,可为后期草鱼肌纤维原代培养研究提供参考。分别选用DMEM、M199、L-15三种培养基采用组织块法培养草鱼肌纤维,在倒置显微镜下观察不同培养基对草鱼肌纤维生长状态和细胞形态、细胞迁出时间和细胞达到首次传代时间的影响;采用细胞计数法计算不同培养基对细胞增殖情况以及细胞贴壁率的影响;用MTT比色法测定不同培养基对细胞活力的影响。与DMEM和L-15相比,M199培养基培养的草鱼肌纤维从组织块中开始迁出时间短(P<0.05),细胞贴壁率高,2 h细胞贴壁率高达(44.60±11.46)%(P<0.05),而DMEM、L-15培养基培养的细胞2 h贴壁率分别为(33.25±8.35)%、(22.83±0.70)%(P<0.05);同时M199组的细胞增殖速度快,进入对数生长期仅需72 h,且传代培养72 h后的草鱼肌纤维平均扩增倍数最高(P<0.05);MTT法测细胞活力发现,M199培养基培养的草鱼肌纤维平均OD值为1.03±0.17显著高于DMEM和L-15组的OD值(分别为0.06±0.02和0.05±0.02)。综上M199培养基对于草鱼肌纤维的生长具有较好的促进作用,该培养基中的生长增殖速率均明显高于DMEM和L-15培养基,且肌纤维贴壁和伸展状态更好。M199培养基可作为草鱼肌纤维原代培养的培养基。

蚕蛹虫草栽培方法优化试验

不同菌种、培养基配方、接种方法对蛹虫草人工栽培的影响不同。对蚕蛹虫草菌种、培养基配方、接种方法三因素进行优化,以接种后蚕蛹感菌率、出草整齐程度、转色情况等为评价指标进行试验。通过菌株活性检测,筛选出性状稳定的蚕蛹虫草菌种;通过液体菌种培养基配方筛选试验,筛选出发菌快的液体菌种培养基配方;分别采用喷洒、浸泡、注射的方式接种蚕蛹虫草液体菌种,筛选出最优接种方法为注射。

基于Box-Benhnken响应面法对银柴胡继代快繁培养基的优化

[目的]解决银柴胡种苗繁殖周期长、受外界环境影响大等问题。[方法]以银柴胡不定芽为试验材料,采用单因素试验及Box-Benhnken响应面法,对比继代快繁培养基中6-BA、NAA、蔗糖浓度对银柴胡不定芽生长的影响,探究最佳培养基培养配方。[结果]通过回归模型方程的分析并结合实际验证,MS+6-BA 2.04 mg/L+NAA 0.27 mg/L+蔗糖18.54 g/L为银柴胡继代快繁最佳培养基。[结论]以优化后的培养基进行继代快繁,银柴胡不定芽生长评分可达86.70,继代快繁效果较好,可为银柴胡种苗高质量、短周期快繁提供依据。

化妆品中日勾维多细菌源菌检验方法的建立

为了建立化妆品中日勾维多细菌源菌检验方法,以标准菌株ATCC 33028和化妆品中分离的日勾维多细菌源菌为试验菌,配制选择性培养基和鉴别培养基,高效地鉴定日勾维多细菌源菌。日勾维多细菌源菌在双倍葡萄糖胆盐培养基中培养48 h后,均产酸、产气;在卵磷脂吐温80-七叶苷琼脂培养基上的菌落均为深灰色,菌落周围的培养基呈深褐色。利用双倍葡萄糖胆盐培养基和卵磷脂吐温80-七叶苷培养基初步建立化妆品中日勾维多细菌源菌检验方法,并有效地检测出了化妆品中的日勾维多细菌源菌。

中小工贸企业安全文化建设的探究

在许多学者的研究基础之上,采用问卷调查法对中小工贸企业在安全文化建设方面存在的问题进行调查、整理和完善,发现其企业安全文化建设中存在的主要问题,并根据存在的问题,通过一系列外部力量和内部措施的实施,强化企业安全文化建设,推动和促进中小工贸企业的安全生产和可持续发展。

乳酸菌计数培养基和培养方法的筛选

对保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌活菌计数的培养基和培养方法的研究结果表明 ,采用保加利亚乳杆菌选择性培养基的双层平板法和酸化的 MRS培养基的试管法可对保加利亚乳杆菌进行选择性计数 ;采用 MRS培养基的双层平板法和 MRS培养基的试管法可对嗜热链球菌进行选择性计数 ;采用改进的 MRS和西

云杉花粉的贮藏及萌发研究

研究了云杉花粉在离体培养条件下,蔗糖浓度、pH值、贮藏条件对其萌发和花粉管生长的影响,同时还优化了培养基的组分配比。结果表明:培养基中蔗糖浓度和pH值对云杉花粉的萌发影响显著,并有明显的交互效应。蔗糖低浓度和高浓度都不利于云杉花粉的萌发。不同的云杉种对培养基中蔗糖浓度要求不同,粗枝云杉和欧洲云杉花粉萌发的适宜培养基的蔗糖浓度和pH值分别为7.5%、5.5,10%、5.5。在暗培养条件下,欧洲云杉花粉6 h开始萌发,粗枝云杉8 h开始萌发,欧洲云杉较粗枝云杉提早2 h,同时欧洲云杉花粉萌发率总体高于粗枝云杉;欧洲云杉花粉管的生长历程为20 22 h,而粗枝云杉为16 h左右;欧洲云杉的花粉管长度比粗枝云杉长10μm以上。2种云杉不同个体基因型间的花粉萌发率和花粉管长度存在极显著差异。贮藏方法对花粉的生活力有很大影响,在云杉花粉保存过程中温度是主要条件,冷冻比冷藏好,不宜常温保存。

农杆菌培养方式和预培养基激素配比对甘蓝型油菜下胚轴转化效应分析

利用根癌农杆菌共培养法转化甘蓝型油菜"华双4号"下胚轴,通过组织化学染色法检测报告基因gus的表达情况,研究了农杆菌培养方式和预培养基激素配比对转化效果的影响.结果表明,用LB培养基活化后的农杆菌再用添加AS的MS培养液继续培养6～30h对转化有明显的促进作用;不同的农杆菌培养方式对转化的影响有明显的差异,在试验的6种农杆菌培养方式中s2-5的转化效果最好,即收集活化后的农杆菌用MS+AS+抗生素重悬培养24h,再用MS+AS培养6h;2,4-D与6BA之间的相互作用对转化有重要影响,在试验的预培养基激素组合中,2,4-D2.00mg/L6BA0.25mg/L的组合转化效率最高;抗性愈伤率与转化效率之间不一定具有相关关系.

药用植物的丛枝菌根接种方法研究

本文借鉴菌根技术在农林业研究方面的研究成果,对丛枝菌根真菌在药用植物种植研究中的繁殖技术进行了分类总结。主要从药用植物AM真菌的培养方法及培养基质、不同孢子表面灭菌方法对侵染的影响、不同菌剂和寄主植物对侵染效果的影响、pH值对AM真菌侵染的影响、促生根细菌对AM真菌侵染效果的影响、信号物质对药用植物AM真菌培养的影响几个方面进行论述。结果发现丛枝菌根的影响因素复杂,寄主植物的种类、菌剂的种类、培养方法和条件等因素都对菌根孢子萌发和侵染有显著影响。结合药用植物的特殊性和研究实例,提出了中药植物接种丛枝真菌应综合考虑:药用植物接种菌根的目的、药用植物的生长特性、接种剂的特性、药用植物与菌根真菌的相互影响等因素,并在此基础上选择适当的方法和条件进行药用植物的接种实验。

培养基对菌产微生物絮凝剂的影响研究

研究了培养基成分种类及其用量对菌产微生物絮凝剂的影响。结果表明,较高的C/N比对菌产絮凝剂有利,碳源中的蔗糖是菌株Aeromonassp.N11产絮凝剂的良好碳源,氮源以采用复合氮源为佳。培养基中加入酵母膏有利于絮凝剂的产生。NaCl能够促进所产絮凝剂的絮凝活性,碳源蔗糖和氮源脲对菌产絮凝剂的影响最大。利用正交实验得出产絮凝剂培养基的最佳配比为蔗糖20g/L,酵母膏08g/L,脲05g/L,硫酸胺05g/L,NaCl7g/L。

慈竹组织培养消毒方法筛选及丛芽诱导研究

选择慈竹当年生生长健壮半木质化尚未萌芽的枝条作为外植体,对慈竹组织培养中的消毒方法进行筛选和激素处理及培养基对其丛芽诱导的影响实验。结果表明,将外植体首先用自来水冲洗2 h,然后用70%酒精擦拭1遍,最后用0.1%的升汞消毒2次,每次12 min消毒效果最好,污染率较低,褐化率也较低。不同浓度激素组合下6-BA浓度为3.0 mg/L时,丛芽诱导率最高,达73.11±3.42%。MS培养基丛芽诱导率显著高于3/4 MS培养基和1/2 MS培养基。