六味地黄汤免疫调节活性成分化学分离的药理学导向评价

目的 :为定向追踪分离六味地黄汤发挥免疫调节作用的活性成分进行导向评价。方法 :运用化学与药理学密切合作的研究方法 ,以环磷酰胺 (Cy)处理小鼠为模型 ,抗体生成反应为活性评价指标 ,对每一步化学分离所得组分进行活性评价 ,确定活性部位。结果 :六味地黄汤及其醇溶、醇沉部分对Cy所致抗体生成反应低下具有明显的改善作用 ;后二者活性均高于其母体水煎剂 ;其中醇沉部分活性较醇溶部分强。醇沉部分又以活性炭柱层析所得组分CA4活性最强。结论 :六味地黄汤醇沉部分发挥免疫调节作用的主要活性成分来源于CA4,其主要由酸性多糖组成。

六味地黄汤活性部位CA4的免疫调节作用研究

用环磷酰胺（Ｃｙ）处理小鼠及快速老化模型小鼠（ＳＡＭ）观察了六味地黄汤有效部位ＣＡ４对免疫功能的调节作用。结果表明，ＣＡ４可明显增强ＳＡＭ抗早衰亚系ＳＡＭＲ１及早衰亚系ＳＡＭＰ８的免疫功能，促进其脾细胞抗体生成反应，增强脾细胞的增殖反应能力。ＣＡ４和Ｃｙ所致小鼠脾细胞抗体生成反应低下具有明显的改善作用。研究还发现，ＣＡ４对Ｃｙ所致胸腺Ｌ３Ｔ４＋细胞数目下降具有明显的拮抗作用，但对Ｌｙｔ２＋细胞数目的减少无改善作用。ＣＡ４明显增强正常小鼠脾细胞的Ｔ辅助活性，增强Ｃｙ处理小鼠脾脏特异性杀伤Ｔ细胞（ＣＴＬ）的活性。提示ＣＡ４对ＴＨ及ＴＣ的功能均具有调节作用。

六味地黄汤活性部位3A的免疫调节作用机理研究

目的 :对六味地黄汤活性部位 3A的免疫调节作用机理进行初步研究。方法 :观察 3A对环磷酰胺 (Cy)处理小鼠 ,荷瘤小鼠和快速老化小鼠的T细胞亚群 ,B细胞产生IgG水平 ,γ干扰素 (IFN γ)mR NA的表达水平的影响及体外活性研究。结果 :口服给予 3A对 3种模型小鼠脾脏T细胞亚群的变化均具有不同程度的恢复作用 ,并促进快速老化小鼠脾细胞分泌IgG ,提高Cy处理小鼠脾细胞IFN γmRNA的表达水平。结论 :3A对免疫功能的改善作用与调节T。

六味地黄汤及其活性组分含药血清对原代培养海马神经元的保护作用

目的 :运用血清药理学方法观察六味地黄汤 (LW)及其活性组分 (CA4、CA4 3)含药血清对原代培养胚胎大鼠海马神经元的保护作用。方法 :首先通过MTT法观察了LW及CA4、CA4 3对海马神经元存活的影响 ,进而采用流式细胞术观察LW及CA4、CA4 3对海马神经元线粒体膜电位的影响。结果 :LW及CA4、CA4 3含药血清均可不同程度地提高海马神经元的存活率 ,并且稳定线粒体膜电位与其神经保护作用具有密切关系。

六味地黄苷糖对睡眠剥夺小鼠所致焦虑抑郁样行为的作用及其机制研究

目的观察六味地黄苷糖(LW-AFC)对睡眠剥夺小鼠所致焦虑抑郁样行为的作用及其机制。方法雄性C57小鼠依据小鼠体质量和自主活动性随机分为正常对照组、睡眠剥夺模型组、LW-AFC 0.8 g/kg、1.6 g/kg和3.2 g/kg组。应用72 h多平台水环境法建立失眠动物模型。给药组预防给药7 d后进行睡眠剥夺72 h,同时给予LW-AFC至建模后第14天。采用旷场实验评价小鼠的焦虑样行为,采用悬尾和强迫游泳实验评价小鼠的抑郁样行为,应用液相芯片分析技术检测小鼠海马组织中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及抗炎因子IL-4的含量。采用Pearson相关性分析LW-AFC对睡眠剥夺小鼠细胞因子的影响与焦虑抑郁样行为的相关性。采用Western印迹法检测小鼠海马星形胶质细胞激活标志物胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的变化。结果与正常对照组相比,睡眠剥夺模型组小鼠在旷场中央的探索时间显著缩短(P<0.05),悬尾和强迫游泳的不动时间显著延长(P<0.05),小鼠海马组织中GFAP表达显著升高(P<0.01),IL-1β、IL-6和TNF-α含量均显著增加(P<0.01),IL-4含量显著降低(P<0.01);与睡眠剥夺模型组相比,LW-AFC 1.6和3.2 g/kg组小鼠旷场实验的中央探索时间显著延长(P<0.05),GFAP表达量显著降低(P<0.05)。LW-AFC 3个剂量组小鼠悬尾和强迫游泳的不动时间显著缩短(P<0.05,P<0.01),海马组织中IL-1β和IL-6含量均显著降低(P<0.05,P<0.01);LW-AFC 1.6和3.2 g/kg组小鼠海马组织中TNF-α含量均显著降低(P<0.01),IL-4含量显著增加(P<0.05,P<0.01)。Pearson相关性分析结果提示,LW-AFC改善小鼠的焦虑抑郁样行为与促炎细胞因子(IL-1β、TNF-α)密切相关(P<0.05,P<0.01)。结论 LW-AFC能改善睡眠剥夺导致的小鼠焦虑和抑郁样行为改变,其机制可能与其调节细胞因子的失衡以及抑制星形胶质细胞活化有关。

六味地黄苷糖对高糖诱导的胎盘滋养层细胞增殖侵袭及ERK/MMP-9信号通路的作用机制研究

目的:探究六味地黄苷糖(LW-AFC)通过调控ERK/MMP-9信号通路对高糖诱导的胎盘滋养层细胞增殖侵袭作用机制研究。方法:将在ATCC细胞库购买胎盘滋养层细胞分为空白对照组(空白组):胎盘滋养层细胞正常培养,不做任何处理;高糖诱导组(诱导组):采用高糖诱导的方式制作高糖胎盘滋养层细胞模型;六味地黄苷糖组(苷糖组):在高糖诱导胎盘滋养层细胞模型完成后给予LW-AFC培养。通过MTT法检测胎盘滋养层细胞增殖率,Western blot法检测胎盘滋养层细胞中ERK/MMP-9的蛋白含量,Transwell小室实验检测胎盘滋养层细胞侵袭情况,qRT-PCR法检测胎盘滋养层细胞中ERK/MMP-9mRNA的表达含量,克隆法检测胎盘滋养层细胞迁移情况的差异性,探究LW-AFC对高糖诱导的胎盘滋养层细胞增殖侵袭及ERK/MMP-9通路表达的影响。结果:随着时间的推移,诱导组胎盘滋养层细胞的增殖率降低,与诱导组比较,苷糖组细胞增殖率显著升高(P<0.05)。苷糖组与诱导组比较,苷糖组滋养层细胞侵袭能力显著高于诱导组细胞(P<0.05)。诱导组、苷糖组与空白组比较,空白组细胞克隆数量显著较多(P<0.05);苷糖组与诱导组比较,诱导组胎盘滋养层细胞克隆数量显著低于苷糖组(P<0.05)。诱导组胎盘滋养层细胞中ERK/MMP-9蛋白表达、ERK/MMP-9 mRNA表达量最高,空白组胎盘滋养层细胞蛋白表达、mRNA表达量低于苷糖组、诱导组(P<0.05),苷糖组与诱导组比较,苷糖组胎盘滋养层细胞ERK/MMP-9蛋白表达、ERK/MMP-9 m RNA表达量显著低于诱导组(P<0.05)。结论:LW-AFC能够提升高糖诱导的胎盘滋养层细胞的增殖速率,增加细胞迁移、侵袭的数量,LW-AFC的作用机制可能与下调ERK/MMP-9通路表达含量有关,这一试验结果可逐步应用于临床妊娠糖尿病患者的治疗中。