六味地黄汤水提醇溶部位对2型糖尿病大鼠胰岛及肾脏组织形态结构的影响

目的研究六味地黄汤水提醇溶部位对2型糖尿病大鼠胰岛及肾脏的影响。方法采用高糖、高脂饲料喂养4周后,再行腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)且空腹血糖(FBG)≥16.7 mmol/L的大鼠建立2型糖尿病动物模型,将其随机分为空白组、模型组、罗格列酮组和六味地黄汤水提醇溶部位组,观察给药1个月后大鼠空腹血糖(FBG)和大鼠胰岛、肾脏组织的形态结构。结果六味地黄汤水提醇溶部位能降低2型糖尿病大鼠FBG值(P<0.01),对其受损的胰岛及肾脏有修复作用。结论六味地黄汤水提醇溶部位能够修复2型糖尿病大鼠的胰岛及肾脏,胰岛及肾脏是具干预2型糖尿病作用的靶位之一。

黄芩汤不同分离精制方法的比较研究

目的:确定黄芩汤较佳的提取和分离精制方法。方法:选用L9(34)正交表,以黄芩苷、芍药苷、甘草酸多指标综合评分法,对提取次数、加水量、提取时间等因素进行考察,确定提取工艺条件,进一步对醇沉和大孔树脂两种分离精制方法进行比较。结果:提取工艺确定为加12倍量水煎煮3次,每次1 h。大孔树脂法分离所得精制物中有效成分含量高于醇沉物。结论:大孔树脂法优于醇沉法,有利于有效成分的富集,为开发黄芩汤新剂型提供科学合理的精制方法。

超滤技术在六味地黄软胶囊多糖精制工艺中的应用

目的:研究超滤技术应用于六味地黄软胶囊多糖精制的工艺及可行性。方法:采用超滤技术结合药效实验确定六味地黄多糖中有效部位,再对超滤膜的材质、构型、膜通透量、收集药液量等进行考察,确定最佳超滤条件。结果:采用聚砜材质的中空纤维膜,先采用50 K截流量纤维膜超滤,收集原体积1.25倍超滤液,再采用30 K截流量纤维膜超滤,收集原体积1.25倍超滤液,最佳超滤条件为压力0.1 Mpa,温度35℃,超滤时间不超过50 min最佳。结论:超滤膜技术精制六味地黄软胶囊多糖相比传统的水提醇沉等方法具有操作简便,超滤过程条件温和,能耗低,精制效果好等优点,有较好的产业化应用前景。

响应面法优化促孕灌注液中总黄酮的提取工艺

【目的】采用响应面法优化促孕灌注液中总黄酮的提取工艺,为促孕灌注液总黄酮的实际生产提供参考。【方法】采用水煎醇沉法制备促孕灌注液,以总黄酮得率为指标,在单因素试验的基础上,采用响应面的中心组合设计,考察液(mL)料(g)比(下同)、煎煮时间、提取次数3个因素对促孕灌注液中总黄酮得率的影响,对总黄酮的提取工艺参数进行优化分析。【结果】单因素试验结果表明,最佳浸泡时间为10min,液料比为15∶1,煎煮时间为30min,提取次数为3次。选择对总黄酮得率影响明显的液料比、煎煮时间、提取次数3个因素进行响应面优化分析试验,得到总黄酮最优提取条件为:液料比17.5∶1,煎煮38min,提取3次。在最优提取工艺条件下,促孕灌注液总黄酮的理论得率为14.082mg/g,实测得率为14.193mg/g,二者误差较小。【结论】优化得到了促孕灌注液中总黄酮提取工艺,该工艺稳定、重复性好、总黄酮得率高。

正交设计优化半夏泻心汤的水提醇沉工艺

目的:采用正交试验设计优化半夏泻心汤的水提醇沉工艺条件。方法:采用正交试验设计法,以小檗碱、巴马汀、黄芩苷、黄芩素的含量为考评价指标,考察加水量、浸泡时间、煎煮时间对半夏泻心汤水提醇沉工艺的影响。结果:正交试验优选确定的工艺条件为加水20倍,浸泡60min,煎煮40min。结论:半夏泻心汤的水提醇沉工艺条件合理、稳定、可行。

煎药机煎法对中药复方汤剂总浸出物及有效成分的影响

目的观察与探讨煎药机煎法对中药复方汤剂总浸出物及有效成分的影响,同时更好地为煎药机煎法提供重要的理论依据。方法选择六味地黄汤作为本文研究的代表方剂,并将汤剂浸出物与汤剂内的丹皮酚含量作为指标,比较以及评价煎药机煎法与传统的煎药方法的汤剂质量。结果在煎药机煎液中,丹皮酚的含量为0.018 7 g/L,与传统煎液相比有明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而总浸出物则明显少于传统煎液,差异有统计学意义(P<0.05)。结论六味地黄汤在经煎药机煎法与传统煎煮方法煎煮后,质量有明显差异,煎药机煎法值得广泛性应用,但传统煎法仍旧是常用方法,并且煎药机煎煮浸出物含量高,便于携带,比较适合现代人的生活需求,具有较好的临床治疗效果,值得临床应用推广。

不同煎煮时间下六味地黄方粉末饮片与传统饮片的指纹图谱和多成分含量比较

目的 比较六味地黄方粉末饮片与传统饮片(后文称为“粉末饮片”和“传统饮片”)提取过程中多成分的变化规律,为六味地黄方的现代工艺研究提供科学依据。方法 以粉末饮片和传统饮片为样品,分别在浸泡60 min时,头煎0、5、10、15、20、25、30、40、50、60 min时和二煎5、10、20、30、40 min时取样。采用高效液相色谱法建立不同煎煮时间下2种饮片的指纹图谱,进行相似度评价和色谱峰的指认,并测定其中5-羟基糠醛、儿茶素、莫诺苷、马钱苷、獐芽菜苷、二氢槲皮素、丹皮酚和苯甲酰芍药苷8个指标成分的含量。结果 不同煎煮时间下,2种饮片与各自对照指纹图谱R的相似度均大于0.98。在传统饮片指纹图谱中,共指认出5个色谱峰,分别为5-羟基糠醛、莫诺苷、獐芽菜苷、二氢槲皮素、丹皮酚;在粉末饮片指纹图谱中,共指认出6个色谱峰,分别为5-羟基糠醛、莫诺苷、獐芽菜苷、二氢槲皮素、丹皮酚、苯甲酰芍药苷。含量测定结果显示,在头煎过程中,前5 min内粉末饮片中几乎所有成分的煎出速率均较传统饮片快;40 min后,除5-羟基糠醛和丹皮酚外,其余活性成分的含量均低于传统饮片。在二煎过程中,除丹皮酚和马钱苷外,其余成分的含量均是粉末饮片高于传统饮片;传统饮片中儿茶素在头煎中被完全煎出,而粉末饮片中儿茶素在二煎中依然可被检测到。2种饮片中8种成分的总煎出量差异不大。结论 六味地黄方粉末饮片化学成分与传统饮片相比无明显优势,无法节省煎煮时间和药材用量。

响应面法对六味地黄方醇沉工艺的优化研究

优化六味地黄方醇沉工艺,获得最优的醇沉工艺,为醇沉过程苷类控制提供理论依据。采用P-B试验设计,以莫诺苷、马钱苷、芍药苷为指标,考察醇沉前液密度、醇沉温度、搅拌速度、加醇浓度、静置温度、静置时间、醇含量、加醇方式、离心、醇洗10个参数对醇沉工艺的影响,得出六味地黄方浸膏苷类醇沉关键工艺参数。并采用Box-Behnken响应面法对关键工艺参数与醇沉效果的影响进行研究与探讨,得出关键工艺参数之间的交互影响以及与指标成分的相关性方程。通过对各个指标结果建立二次回归模型,并对二次回归方程求解得到六味地黄方苷类醇沉的最优工艺参数:醇沉前浸膏密度为1.13 g·m L-1,加入95%乙醇醇沉至含醇量为34%,580 r·min-1搅拌15 min,静置17 h,离心得到醇沉上清液,验证实验结果与模型预测值接近。采用响应面法优化六味地黄方苷类醇沉工艺确定工艺参数的方法合理可行。

不同煎煮方法对六味地黄汤浸出物及主成分含量的影响

目的:考察煎药机煎法对中药复方汤剂总浸出物及有效成分的影响,为科学评价煎药机煎药和中药饮片"后下"提供依据。方法:以经典方"六味地黄汤"为代表方,以汤剂浸出物和汤剂中丹皮酚的含量为指标,评价汤剂质量。结果:丹皮酚在煎药机煎液中的含量为0.0187 g.L-1,显著高于传统煎液,而总浸出物则相反。结论:传统煎法与煎药机煎法煎煮的六味地黄汤剂在质量上存在较大差异。

六味地黄方醇沉工艺研究

目的通过对六味地黄方醇沉工艺合理化研究,得到稳定的、可产业化的醇沉工艺。方法以马钱苷、芍药苷、莫诺苷、甘露三糖、多糖质量分数、相对分子质量分布及浸出物等为评价指标,对乙醇加入方式、离心方式及是否加入乙醇洗涤工艺进行考察,筛选出最佳醇沉工艺。结果醇沉工艺中以体积计算加入乙醇的量较合理;采用乙醇洗涤法可有效完成多糖部位与醇沉上清液的分离;改进工艺后,多糖浸出物质达标,苷类、甘露三糖的质量分数达标。结论经优化后的乙醇醇沉工艺具有易操作、可控性好、重复性好的特点,可以开展产业化推广。

中药(复方)成分提取动力学数学模型建立及粒径对六味地黄汤中梓醇浓度的影响

目的:建立封闭体系中药(复方)成分溶出动力学数学模型,并对六味地黄汤中有效成分梓醇的提取动力学参数进行研究与分析。方法:将数学建模方法应用于中药提取过程的研究中,根据提取原理、Fick定律建立中药提取过程的数学模型,并对数学模型进行拟合和参数分析,可求得函数表达式。再运用该模型研究六味地黄汤中梓醇的动力学参数。结果:建立了包含三项e的指数形式的成分溶出浓度解析及各参数分析方法。提取六味地黄汤的适宜药材粒度为60目,此时梓醇的最大达峰时间(tmax)为195.1min,达峰浓度(Cmax)为0.01223mg·mL-1,最大提取效率(P)为72.95%,损失率(D)为7.62%。结论:封闭可溶中药(复方)扩散体系的成分溶出符合线性动力学数学模型,各参数可根据溶出浓度表达式关系计算得到。

六味地黄生物制剂总多糖的精制工艺优选

目的:优化六味地黄生物制剂总多糖的精制工艺,为该制剂的开发提供参考。方法:以粗多糖质量为指标,采用正交试验考察醇沉浓度、醇沉时间、药液相对密度对总多糖醇沉工艺的影响。在单因素试验基础上,以蛋白质清除率和总多糖保存率的综合评分为指标,采用正交试验优化三氯乙酸(TCA)-正丁醇法脱蛋白工艺。以色素清除率和总多糖保存率的综合评分为指标,利用正交试验优化活性炭除色素工艺。结果:最佳醇沉工艺为醇沉浓度85%,醇沉时间6 h,药液相对密度1.05;粗多糖质量8.92 mg。最佳脱蛋白工艺为粗多糖溶液与TCA-正丁醇体积比1∶2,TCA-正丁醇(1∶15),振荡时间20 min,静置时间0.5 h;蛋白质清除率80.23%,总多糖保存率85.45%。最佳除色素工艺为脱色温度40℃,活性炭加入量6%,脱色时间40 min;色素清除率74.84%,总多糖保存率78.69%。结论:优选的精制工艺稳定可行,适用于六味地黄生物制剂总多糖保健产品的开发。

滋肾宁神方提取工艺安神药效筛选研究

目的:筛选滋肾宁神方的提取工艺。方法:通过小鼠自主活动实验及睡眠实验,对水提、醇提、水提醇沉、部分水提部分醇提等4种不同提取工艺进行筛选。结果:水提醇沉工艺提取物可显著减少小鼠自主活动,明显延长阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡;水提工艺提取物可明显延长阈剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间。4种工艺提取物均可提高小鼠入睡率,其中水提醇沉工艺提取物对小鼠入睡率的提高最显著。结论:选择水提醇沉工艺为滋肾宁神方的提取工艺。

思的明胶囊提取工艺研究

目的:优选思的明胶囊的最佳提取工艺。方法:选用L9(34)正交试验,分别对煎煮和醇沉2个工艺步骤进行优选,以干膏率为煎煮工艺指标,梓醇总提取量为醇沉工艺综合评分指标;采用高效液相色谱法测定梓醇含量。结果:最佳提取工艺为药材加8倍量水,煎煮2次,每次煎煮1h,水提液过滤、合并、浓缩至1.0g(生药).mL-1,再用乙醇沉淀,醇沉浓度为75%,沉淀24h,过滤取上清液,微波真空浓缩干燥得干膏。结论:本方法稳定、合理,可作为思的明胶囊的最佳提取工艺。

六味地黄醇提物联合顺铂对人肝癌BEL-7402细胞凋亡和肿瘤血管生成因子的影响

目的:探讨六味地黄醇提物联合顺铂对人肝癌BEL-7402细胞凋亡及肿瘤血管生成的影响。方法:体外培养BEL-7402细胞,以不同质量浓度的六味地黄醇提物作用于细胞,CCK-8法检测其对细胞生长的影响,选择后续实验浓度。将BEL-7402细胞分为正常对照组、六味地黄醇提物100 mg/ml组、顺铂1 mg/ml组、六味地黄醇提物100 mg/ml+顺铂1 mg/ml组。CCK-8法检测细胞增殖抑制率,细胞成像分析系统观察BEL-7402细胞形态学变化,Hoechst染色法观察细胞凋亡现象,免疫荧光法检测肿瘤血管生成相关因子:血管内皮生长因子(VEGF)、促血管生成素-2(Ang-2)、血小板反应素(TSP)、金属蛋白酶-2组织抑制因子(TIMP-2)蛋白表达水平的影响。结果:六味地黄丸醇提物能呈剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞活性,选择100 mg/ml用于后续实验。与正常对照组比较,各用药组细胞抑制率均明显升高;细胞胞质回缩,漂浮的死细胞增多;胞核偏于一侧,染色质浓染,呈马蹄形或月牙状的典型凋亡特征;细胞内VEGF、Ang-2蛋白表达明显降低,而TSP、TIMP-2蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01)。与顺铂1 mg/ml组和六味地黄醇提物100 mg/kg组比较,顺铂1 mg/ml+六味地黄醇提物100 mg/ml组更能明显抑制BEL-7402细胞增殖;细胞内VEGF、Ang-2蛋白表达明显降低,而TSP、TIMP-2蛋白表达明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:六味地黄醇提物及其联合顺铂能诱导BEL-7402细胞凋亡,并可能通过下调细胞内肿瘤血管相关VEGF、Ang-2蛋白表达、上调TSP、TIMP-2蛋白表达增强对BEL-7402细胞的抑制作用。