六味地黄苷糖对睡眠剥夺小鼠所致焦虑抑郁样行为的作用及其机制研究

目的观察六味地黄苷糖(LW-AFC)对睡眠剥夺小鼠所致焦虑抑郁样行为的作用及其机制。方法雄性C57小鼠依据小鼠体质量和自主活动性随机分为正常对照组、睡眠剥夺模型组、LW-AFC 0.8 g/kg、1.6 g/kg和3.2 g/kg组。应用72 h多平台水环境法建立失眠动物模型。给药组预防给药7 d后进行睡眠剥夺72 h,同时给予LW-AFC至建模后第14天。采用旷场实验评价小鼠的焦虑样行为,采用悬尾和强迫游泳实验评价小鼠的抑郁样行为,应用液相芯片分析技术检测小鼠海马组织中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α以及抗炎因子IL-4的含量。采用Pearson相关性分析LW-AFC对睡眠剥夺小鼠细胞因子的影响与焦虑抑郁样行为的相关性。采用Western印迹法检测小鼠海马星形胶质细胞激活标志物胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)的变化。结果与正常对照组相比,睡眠剥夺模型组小鼠在旷场中央的探索时间显著缩短(P<0.05),悬尾和强迫游泳的不动时间显著延长(P<0.05),小鼠海马组织中GFAP表达显著升高(P<0.01),IL-1β、IL-6和TNF-α含量均显著增加(P<0.01),IL-4含量显著降低(P<0.01);与睡眠剥夺模型组相比,LW-AFC 1.6和3.2 g/kg组小鼠旷场实验的中央探索时间显著延长(P<0.05),GFAP表达量显著降低(P<0.05)。LW-AFC 3个剂量组小鼠悬尾和强迫游泳的不动时间显著缩短(P<0.05,P<0.01),海马组织中IL-1β和IL-6含量均显著降低(P<0.05,P<0.01);LW-AFC 1.6和3.2 g/kg组小鼠海马组织中TNF-α含量均显著降低(P<0.01),IL-4含量显著增加(P<0.05,P<0.01)。Pearson相关性分析结果提示,LW-AFC改善小鼠的焦虑抑郁样行为与促炎细胞因子(IL-1β、TNF-α)密切相关(P<0.05,P<0.01)。结论 LW-AFC能改善睡眠剥夺导致的小鼠焦虑和抑郁样行为改变,其机制可能与其调节细胞因子的失衡以及抑制星形胶质细胞活化有关。

六味地黄苷糖对高糖诱导的胎盘滋养层细胞增殖侵袭及ERK/MMP-9信号通路的作用机制研究

目的:探究六味地黄苷糖(LW-AFC)通过调控ERK/MMP-9信号通路对高糖诱导的胎盘滋养层细胞增殖侵袭作用机制研究。方法:将在ATCC细胞库购买胎盘滋养层细胞分为空白对照组(空白组):胎盘滋养层细胞正常培养,不做任何处理;高糖诱导组(诱导组):采用高糖诱导的方式制作高糖胎盘滋养层细胞模型;六味地黄苷糖组(苷糖组):在高糖诱导胎盘滋养层细胞模型完成后给予LW-AFC培养。通过MTT法检测胎盘滋养层细胞增殖率,Western blot法检测胎盘滋养层细胞中ERK/MMP-9的蛋白含量,Transwell小室实验检测胎盘滋养层细胞侵袭情况,qRT-PCR法检测胎盘滋养层细胞中ERK/MMP-9mRNA的表达含量,克隆法检测胎盘滋养层细胞迁移情况的差异性,探究LW-AFC对高糖诱导的胎盘滋养层细胞增殖侵袭及ERK/MMP-9通路表达的影响。结果:随着时间的推移,诱导组胎盘滋养层细胞的增殖率降低,与诱导组比较,苷糖组细胞增殖率显著升高(P<0.05)。苷糖组与诱导组比较,苷糖组滋养层细胞侵袭能力显著高于诱导组细胞(P<0.05)。诱导组、苷糖组与空白组比较,空白组细胞克隆数量显著较多(P<0.05);苷糖组与诱导组比较,诱导组胎盘滋养层细胞克隆数量显著低于苷糖组(P<0.05)。诱导组胎盘滋养层细胞中ERK/MMP-9蛋白表达、ERK/MMP-9 mRNA表达量最高,空白组胎盘滋养层细胞蛋白表达、mRNA表达量低于苷糖组、诱导组(P<0.05),苷糖组与诱导组比较,苷糖组胎盘滋养层细胞ERK/MMP-9蛋白表达、ERK/MMP-9 m RNA表达量显著低于诱导组(P<0.05)。结论:LW-AFC能够提升高糖诱导的胎盘滋养层细胞的增殖速率,增加细胞迁移、侵袭的数量,LW-AFC的作用机制可能与下调ERK/MMP-9通路表达含量有关,这一试验结果可逐步应用于临床妊娠糖尿病患者的治疗中。