基于网络药理学及分子对接探讨六味地黄汤治疗原发性干燥综合征的作用机制

目的 探讨六味地黄汤治疗原发性干燥综合征(primary sjogren’s syndrome, pSS)的作用机制。方法 使用公共数据库平台TCMSP、GeneCards、DrugBank、PHARMGKB、OMIM和TTD对六味地黄汤组成药物的活性成分、作用靶点及PSS的疾病靶标进行检索,将药物成分靶点与疾病靶标取交集得到六味地黄汤治疗pSS的潜在靶点;使用STRING 11.5数据库获得六味地黄汤治疗PSS的蛋白互作网络(PPI),并通过Cytoscape 3.7.2软件分析得到核心靶点;通过基因本体(GO)富集分析、基因组百科全书(KEGG)通路富集分析筛选差异生物过程及靶点通路;使用Auto Dock 1.5.6及Pymol 2.2.0软件进行分子对接,验证核心靶点与活性成分之间的亲和力。结果 筛选得到六味地黄汤的药物活性成分74个,作用靶点184个,PSS疾病相关靶点1161个,药物-疾病交集靶点69个。数据分析显示,六味地黄汤的主要活性成分包括槲皮素、山柰酚、豆甾醇、海风藤酮和薯蓣皂苷元,六味地黄汤治疗pSS的8个核心靶点包括AKT1、CASP3、JUN、MMP9、NFKBIA、TP53、VEGFA。GO富集主要涉及脂多糖、氧化应激、活性氧代谢等生物过程。KEGG富集主要涉及抗炎、氧化应激等相关通路。分子对接结果显示,8个核心靶点与相应的活性成分的结合能均≤-5 kcal/mol,其中槲皮素与8个核心靶点均能较好地结合,可能是六味地黄汤干预pSS的主要有效成分。结论 六味地黄汤可能通过作用于AKT1、CASP3、JUN、MMP9、NFKBIA、TP53、VEGFA、IL-1β等关键靶点,通过“IL-17信号通路”“Th17细胞分化”“HIF-1信号通路”等发挥抗炎、免疫调节、抗氧化应激的作用,其中槲皮素可能是其发挥作用的主要有效成分。

六味小青龙汤抑制p38MAPK/p22phox通路减轻哮喘大鼠慢性炎症作用机制研究

目的探讨六味小青龙汤抑制p38MAPK/p22phox哮减轻喘大鼠慢性炎症的作用机制。方法120只SD大鼠分为空白组,模型组,六味小青龙汤低、中、高剂量组,地塞米松组6组,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组大鼠干预后血清,支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察各组肺组织病理改变,比较肺组织炎症细胞浸润;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组肺组织p38MAPKmRNA、p22phoxmRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组DUOX1、DUOX2、p38MAPK及HO-1蛋白表达。结果模型组BALF IL-4、IL-5、TNF-α水平均高于空白组(P<0.05),地塞米松及六味小青龙汤能降低哮喘大鼠BALF中IL-4、IL-5含量(P<0.05)。p22phoxmRNA、p38MAPKmRNA在模型组中表达升高(P<0.05),中剂量六味小青龙汤能降低p22phoxmRNA表达(P<0.05),低、中、高剂量六味小青龙汤组均能使p38MAPKmRNA表达降低(P<0.05),地塞米松对p22phoxmRNA、p38MAPKmRNA表达的影响不明显(P>0.05)。DUOX1在初期模型组中表达较空白组升高,六味小青龙汤高剂量能降低DUOX1的表达(P<0.05)。DUOX2在模型组中较空白组表达升高,六味小青龙汤中、高剂量能降低DUOX2的表达(P<0.05)。HO-1在模型组中较空白组表达升高,高剂量六味小青龙汤以及地塞米松能降低HO-1的表达(P<0.05)。p38MAPK蛋白在模型组中较空白组表达升高,六味小青龙汤中、高剂量以及地塞米松均能降低p38MAPK蛋白表达(P<0.05)。六味小青龙汤及地塞米松组肺组织炎症细胞浸润均较模型组改善。结论六味小青龙汤可抑制p38MAPK/p22phox通路减轻哮喘大鼠肺组织病变和慢性炎症,下调p38MAPKmRNA、22phoxmRNA与DUOX1、DUOX2、HO-1、p38MAPK蛋白表达,降低IL-4、IL-5、TNF-α水平。

G15逆转六味地黄汤冻干粉对慢性应激海马细胞的保护作用

目的探讨六味地黄汤(LW)冻干粉对皮质酮诱导损伤的HT22海马细胞的保护作用及G15的逆转作用。方法利用皮质酮构建慢性应激损伤HT22神经元细胞体外模型,将神经元分为对照组,模型组,LW(320 mg·L^(-1))组、LW+G15低剂量组(10μmol·L^(-1))和LW+G15高剂量组(30μmol·L^(-1)),并进行相应干预。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HT22细胞的存活率。采用TUNNEL染色检测细胞凋亡率。结果与对照组比较,CORT诱导损伤的模型组细胞OD值显著下降和细胞凋亡数明显增加(P<0.05)。与模型组比较,LW可明显增加海马细胞OD值和降低凋亡细胞(P<0.05)。与LW组比较,LW+G15高剂量组可降低海马细胞OD值和增加凋亡细胞(P<0.05)。结论G1530μmol·L^(-1)可逆转LW冻干粉对皮质酮损伤小鼠HT22海马细胞的保护作用。

六味地黄汤对衰老模型大鼠血液流变性的影响

目的 :研究六味地黄汤及其三补三泻配伍对衰老加阴虚血瘀模型大鼠血液流变性的影响。方法 :用复合因素制备衰老加阴虚血瘀动物模型 ,观察六味地黄汤及其配伍对血液流变性的影响 ,并通过红细胞变形能力、血凝学指标、血小板聚集等探讨了其作用机理。结果 :六味地黄汤全方能抑制模型大鼠体外血栓的形成 ,改善血液流变性 ,并通过延长凝血时间、TT、APTT ,抑制血小板聚集 ,提高红细胞变形能力 ,降低Fg等 ,以全方作用为最强。 结论 :六味地黄汤具有改善模型大鼠血液流变性、抑制血栓形成的作用 。

六味地黄汤对衰老加阴虚血瘀模型大鼠的保护作用

目的研究六味地黄汤及其配伍对血栓形成的影响。方法采用体内、体外血栓形成方法,应用不同的动物模型,观察六味地黄汤及其配伍对血栓形成的抑制作用。并通过血凝学指标、血小板聚集率和血栓素(TXB2)、前列环素(6-K-PGF1α)、内皮素(ET)等探讨了其作用的可能机理。结果六味地黄汤全方能抑制体内、体外血栓的形成,并能延长凝血时间、TT、APTT,抑制血小板聚集,提高血浆6-K-PGF1α含量,抑制TXB2、ET产生。全方作用强于三补或三泻方。结论六味地黄汤具有抑制血栓形成的作用,三补与三泻配伍具有协同和增效作用。

六味地黄汤抗血栓作用机理研究

目的:研究六味地黄汤及其配伍对衰老血瘀模型大鼠血栓形成的作用及机理。方法:建立衰老血瘀大鼠模型,观察六味地黄汤及其配伍对体外血栓形成的影响,测定血小板聚集、6-K-PGF1α/TXB2、ET、Fg、t-PA/PAI、自由基等以探讨其作用的可能机理。结果:六味地黄汤全方能抑制模型大鼠血小板聚集率的升高,降低Fg,减少内皮细胞分泌TXB2、PAI、ET,增加6-K-PGF1α和t-PA的水平,提高SOD活性,降低MDA和脂褐质的含量,抑制血栓形成。结论:六味地黄汤通过改善模型大鼠内皮细胞分泌功能,调节凝血和纤溶系统,改善自由基代谢,而达到抑制血栓形成的目的。

黄芪六味生脉汤加减结合耳穴贴压治疗复发性尿路感染临床观察

目的 研究黄芪六味生脉汤加减结合耳穴贴压治疗复发性尿路感染临床疗效及安全性。方法 研究合计纳入复发性尿路感染患者93例,均由该院2019年2月—2020年1月收治,以随机数字表法将93例患者分为两组,予以对照组患者(47例)常规治疗,予以观察组患者(46例)常规治疗+黄芪六味生脉汤加减及耳穴贴压治疗,比较两组患者临床治疗效果、治疗前后中医证候(小便频急不畅、尿黄浑浊、滴沥涩痛、腰痛、乏力等)积分变化以及白细胞介素-6(IL-6)及C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、白细胞计数(WBC)水平变化、患者症状缓解时间及生活质量评分(SF-36)、患者治疗不良反应,随访12个月,观察患者复发率情况。结果 较观察组(95.65%,44/46),对照组有效率(82.98%,39/47)低,P<0.05;治疗前,两组患者中医证候(小便频急不畅、尿黄浑浊、滴沥涩痛、腰痛、乏力等)积分、IL-6、CRP、PCT、WBC水平比较,P>0.05,治疗后各组患者中医证候(小便频急不畅、尿黄浑浊、滴沥涩痛、腰痛、乏力等)积分、IL-6、CRP、PCT、WBC等水平均改善,观察组患者治疗后中医证候(小便频急不畅、尿黄浑浊、滴沥涩痛、腰痛、乏力等)积分、IL-6、CRP、PCT、WBC等水平均优于对照组,P<0.05;观察组患者症状缓解时间短于对照组患者,SF-36评分高于对照组,P<0.01;两组均无不良反应,P>0.05;观察组患者1年复发率(0.00%)低于对照组(8.51%,4/47),P<0.05。结论 黄芪六味生脉汤加减结合耳穴贴压治疗复发性尿路感染临床疗效显著,患者症状改善快,恢复好,复发率低,值得应用。

态靶辨证在湿毒瘀阻型肠上皮化生中的运用——肠化消瘀汤加六味地黄丸大蜜丸

湿毒瘀阻型是肠上皮化生的常见类型,多因饮食不调,久食膏粱厚味,日久酿生湿热,内蕴脾胃而引起,亦可因感受湿热交阻于中焦而致病。基于"态靶结合"辨证组方思想治疗本病当以"湿毒瘀阻"为态,胃黏膜肠上皮化生为靶。治疗要点概括如下:胃喜润恶燥,治疗要点一为改善胃内湿热或者虚寒的环境,改善黏膜生存状态,使其滋润;其二为保护消化道黏膜,不局限于胃黏膜;其三是仍需要继续寻找针对某一靶点的特效药。仝小林院士以肠化消瘀汤配合六味地黄丸治疗本病,肠化消瘀汤清热解毒,利湿活血,切断来路;六味地黄丸蜜丸保护胃黏膜,并能改善肠上皮化生,临床疗效显著,治疗思路值得借鉴。

从“滋阴补肾论”中药方六味地黄汤对细菌性阴道炎(阴虚内热型)疗效、阴道菌群、免疫功能影响探究

目的 观察细菌性阴道炎(阴虚内热型)采取从“滋阴补肾论”中药方六味地黄汤治疗效果。方法 纳入细菌性阴道炎(阴虚内热型)患者107例(2019年5月—2021年7月收治),将纳入的107例患者以随机数字表法分成参照组与治疗组,参照组53例患者,采取甲硝唑片+苯扎溴铵溶液外阴清洗治疗,治疗组54例患者甲硝唑片+苯扎溴铵溶液外阴清洗+中药方六味地黄汤治疗,数据观察:疗效、细菌学效果、治疗前后中医证候积分(阴道灼感、白带量少、外阴瘙痒、心烦易怒、头晕眼花、口干尿赤等)变化、症状消失时间(白带减少、外阴瘙痒、阴道疼痛等)、血清C反应蛋白(CRP)及白介素4(IL-4)、白介素6(IL-6)水平变化、阴道微生态情况及阴道菌群分布情况、阴道免疫细胞功能变化、性生活质量(FSFI)评分变化、不良反应。结果 参照组患者治疗总有效率为96.30%(52/54),治疗组患者治疗总有效率为83.02%(44/53)(P<0.05)。治疗组患者细菌清除率(96.30%,52/54)高于参照组(83.02%,44/53),细菌再感染率(0.00%)低于参照组(7.55%,4/53)(P<0.05)。治疗组患者症状消失时间(白带减少、外阴瘙痒、阴道疼痛等)均比参照组短(P<0.05)。比较两组患者治疗前中医证候积分(阴道灼感、白带量少、外阴瘙痒、心烦易怒、头晕眼花、口干尿赤等)、CRP及IL-4、IL-6水平、阴道微生态情况及阴道菌群分布情况、阴道免疫细胞功能指标、FSFI评分等指标(P>0.05),治疗后两组患者中医证候积分(阴道灼感、白带量少、外阴瘙痒、心烦易怒、头晕眼花、口干尿赤等)、CRP及IL-4、IL-6水平、阴道微生态情况及阴道菌群分布情况、阴道免疫细胞功能指标、FSFI评分等指标均改善,与参照组比较,治疗组治疗后中医证候积分(阴道灼感、白带量少、外阴瘙痒、心烦易怒、头晕眼花、口干尿赤等)、CRP及IL-4、IL-6水平、阴道微生态情况及阴道菌群分布情况、阴道免疫细胞功能指标、FSFI评分等指标更佳(P<0.05)。治疗组见1例恶心,参照组见1例头晕,1例呕吐(P<0.05)。结论 细菌性阴道炎(阴虚内热型)采取从“滋阴补肾论”中药方六味地黄汤治疗效果佳,安全可靠,患者阴道菌群情况及阴道免疫功能改善,值得应用。

基于生物信息学和实验验证分析六味地黄汤治疗肾纤维化的分子机制

目的:基于生物信息学分析六味地黄汤治疗肾纤维化的分子机制并验证。方法:从美国国家生物技术信息中心(NCBI)旗下的基因表达数据库(GEO)获得包含29个正常肾组织和23个肾纤维化组织的基因芯片数据集GSE12682和注释文本GPL571,使用Strawberry Perl和R软件筛选肾纤维化差异表达基因(DEGs)。通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获得六味地黄汤中六味药的成分表和作用基因靶点。使用Strawberry Perl整合出两者的交叉靶点,并用Cytoscape软件和R软件制作蛋白质-蛋白质相互作用(Protein-protein interaction,PPI)网络,利用STRING网站进行基因本体(GO)生物功能分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。12只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、依那普利10 g/kg组和六味地黄汤6.25 g/kg组,HE染色、Masson染色观察肾组织病理改变,免疫组化法检测肾组织血管内皮生长因子信号A(VEGFA)、血管内皮生长因子信号受体1(VEGFR1)两种蛋白的表达差异。结果:通过疾病、药物取交集靶点得到六味地黄汤针对肾纤维化的26个基因靶点;GO提示这些基因影响2种细胞组分、210条生物过程;KGEE表明关键通路为血管内皮生长因子信号(VEGF)信号通路、ERBB信号通路、FcεRI信号通路、白介素-17(IL-17)信号通路等。验证试验表明,与正常对照组相比,模型对照组肾组织胶原容积分数增加,VEGFA和VEGFR1蛋白表达明显下调(P<0.05);与模型对照组相比,六味地黄汤组肾组织胶原容积分数降低,VEGFA和VEGFR1蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:六味地黄汤可通过多基因靶点、多信号通路治疗肾纤维化,其中上调VEGF信号通路是其抗纤维化的重要分子机制。

六味降脂汤对高脂血症大鼠肠道菌群及小肠NPC1L 1、ACAT2和APOB48蛋白表达的影响

目的:探究六味降脂汤对高脂血症可能的干预机制以及对肠道菌群的影响。方法:60只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阿托伐他汀0.9 mg/kg组及六味降脂汤5.4、10.7、21.4 g/kg。除正常对照组外,其余各组给予高脂饲料合并高脂乳剂灌胃6 w制备高脂血症大鼠模型,造模成功各组灌胃给予相应药物,8 w后采集血清、粪便及小肠组织样本,检测大鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)含量;同时采用16S rDNA高通量测序分析肠道菌群的多样性和结构变化;免疫组织化学法检测大鼠小肠组织NPC1L1、ACAT2及APOB48蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清TC、TG、LDL-C含量显著升高,小肠NPC1L1、ACAT2及APOB48蛋白表达显著上调(P<0.01),肠道菌群Beta多样性改变;与模型对照组比较,各给药组TC、TG、LDL-C含量均明显降低(P<0.05或P<0.01),六味降脂汤10.7 g/kg组小肠NPC1L1、ACAT2及APOB48蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01),肠道菌群结构改变,在门水平上,厚壁菌门(Firmicutes)相对丰度明显降低,拟杆菌门(Bacteroidetes)相对丰度明显升高(P<0.05或P<0.01);属水平上,布劳特氏菌属(Blautia)相对丰度明显升高,乳杆菌属(Lactobacillus)及Ruthenibacterium相对丰度明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:六味降脂汤可能通过下调小肠NPC1L1、ACAT2和APOB48蛋白的表达,影响肠道微生物群,调节高脂血症大鼠体内脂质代谢,从而达到降脂作用。

早期糖尿病肾病的证型分布及其治疗的理论研究

糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病较常见的微血管并发症,常引起终末期肾病,最终演变为肾衰竭,危及生命。出自《小儿药证直诀》的六味地黄汤,具有滋阴补肾之功效,古典医籍记载及现代医学均已证实此方对糖尿病具有较好的疗效。补阳还五汤出自《医林改错》,补气活血通络,故常用来治疗气虚血瘀证。该文收集查阅相关医家文献资料,统计分析得出DN发生率最高的证型为气阴两虚兼血瘀证。文章从中医理论、西医机制研究等方面,阐述六味地黄汤合补阳还五汤治疗早期DN的理论研究,以期为临床应用提供参考。

六味地黄汤对DMBA诱发性乳腺癌的抑制作用及对MMP-9和VEGF表达的影响

目的:研究六味地黄汤对DMBA诱发性乳腺癌抑制作用,及对肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法:将60只雌性SD大鼠随机分为空白对照组、DMBA模型组、六味地黄汤6.4、3.2、1.6 g/kg剂量组和阳性药物三苯氧胺组。除空白对照组外,每只大鼠灌胃两次DMBA(间隔1周,每次剂量0.1g/kg)诱发乳腺癌。同时开始给予药物干预,并触诊所有大鼠乳腺肿瘤发生情况并记录体重变化;诱导15周后处死动物,统计各组大鼠乳腺肿瘤的发病率,测量肿瘤重量,并采用ELISA法检测血清中环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)含量,SP法免疫组化检测各组动物乳腺癌组织中VEGF、MMP-9的表达情况。结果:与模型组比较,六味地黄汤6.4g/kg剂量组大鼠乳腺肿瘤平均潜伏期显著延长,平均肿瘤体积、平均瘤重显著降低(P<0.05);六味地黄汤6.4g/kg剂量组血清中cAMP含量及cAMP/cGMP显著降低;六味地黄汤1.6和6.4g/kg剂量组VEGF和MMP-9强阳性率均明显降低,且VEGF与MMP-9的表达呈正相关。结论:滋阴方药六味地黄汤可以抑制乳腺癌发生及恶化,可能的机制是通过干预乳腺癌组织中VEGF和MMP-9的表达。

六味地黄汤对慢性肾功能衰竭大鼠TGF-β1和BMP-7蛋白表达的影响

目的观察六味地黄汤对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠肾小管上皮细胞-间充质转化(EMT)的影响。方法将60只SD大鼠随机分正常组10只,假手术组10只,模型组20只,六味地黄汤组20只,模型组和六味地黄汤组进行5/6肾切除术建立CRF大鼠模型,假手术组分离肾被膜不切除肾脏,正常组不作任何处理。六味地黄汤组予以六味地黄汤灌胃[生药6.75g/(kg·d)],其余各组以等体积蒸馏水灌胃,每天1次,共给药8周。用免疫组织化学、Western Blot、RT-PCR方法检测各组大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和骨形成蛋白-7(BMP-7)及其mRNA表达的差异。结果与假手术组比较,模型组TGF-β1和BMP-7蛋白表达面密度值增加(P<0.01),平均灰度值降低(P<0.01),TGF-β1 mRNA表达水平上调(P<0.01),BMP-7 mRNA表达水平下调(P<0.01);与模型组比较,六味地黄汤组TGF-β1表达面密度值降低,平均灰度值增加(P<0.01),BMP-7表达面密度值增加,平均灰度值降低(P<0.01),TGF-β1mRNA表达水平下调,BMP-7 mRNA表达水平上调(P<0.01)。结论六味地黄汤通过下调TGF-β1蛋白及其mRNA表达水平,上调BMP-7蛋白及其mRNA表达水平,抑制CRF大鼠肾小管的EMT,可能是抗肾间质纤维化的作用机制。

六味地黄汤对BALB/c小鼠海马在体LTP的影响

目的:考察六味地黄汤对BALB/c小鼠海马在体LTP的影响。方法:六味地黄汤单次或连续灌胃7 d后,考察其对正常BALB/c小鼠及皮质酮致LTP损伤模型动物海马在体LTP的影响。结果:皮下注射皮质酮10～50 mg/kg可剂量依赖性的抑制PS增幅;六味地黄汤单次或连续灌胃7 d对正常BALB/c小鼠PS没有明显影响,但可明显增加皮质酮致LTP损伤模型动物的PS增幅。结论:六味地黄汤对皮质酮致LTP损伤具有明显的改善作用,提示改善神经突触可塑性是六味地黄汤发挥益智作用的机制之一。