肿瘤细胞迁移过程的动态评估方法

目的建立肿瘤细胞迁移过程的多角度、实时动态、定量评估方法。方法建立细胞迁移观测模型,分别加入小檗碱及Rg3培养24h,用活细胞工作站随机选取8个不同观测点,连续观测24h。所取得的数据从迁移面积、距离、单个细胞迁移速度、单位面积细胞增殖数量等多角度进行分析。结果该方法可以长时间观察划痕内细胞的迁移过程;小檗碱高、中剂量组(25,12.5μmol·L-1)可抑制A549细胞的迁移过程(P<0.01),且迁移面积、距离、速度及细胞增殖数量4项指标的结果基本一致,人参皂苷Rg3(0.1mmol·L-1)可以在各时间点(6,12,24h)抑制细胞迁移速度(P<0.01),24h可抑制细胞迁移面积及距离(P<0.01),但可促进细胞增殖(P<0.01)。结论该方法灵敏、简便、快速,可广泛应用于细胞迁移过程的动态观察。

新生大鼠心肌telocytes在体外培养状态下的分裂方式

目的探讨体外培养新生大鼠心肌telocytes的分裂方式。方法采用0.1%胶原酶I/0.125%胰蛋白酶联合消化法分离培养新生大鼠心肌telocytes,活细胞工作站动态捕捉和苏木素染色检测telocytes的分裂方式。结果酶联合消化法培养新生大鼠心肌telocytes纯度高、活力好,增殖迅速。无丝分裂时,胞核变大,以出芽方式生长,形成哑铃状细胞核,核芽逐渐拉伸并与母细胞分离。有丝分裂前中期,染色质缩短变粗为染色体,整齐地排列在赤道板处;分裂末期,染色体到达两极,子核已初步形成;胞质分裂期,胞质逐步拉开,形成两个子细胞。在有丝分裂不同时期,心肌telocytes均保持其原有的形态特征。结论体外培养心肌telocytes增殖时有丝分裂和无丝分裂两种方式并存。

活细胞工作站实时摄影技术在间充质干细胞迁移实验中的应用

莱卡活细胞工作站AF6000可以提供自由的多维活细胞图像采集、控制、分析等强大功能,可以充分保证整个活细胞采集过程中光学、电学、温度、适度、pH值等多个条件的高度协调和稳定,并在活细胞拍摄过程中保持高清晰、高反差和高速度的成像效果,充分体现了维持细胞生命活动性与获得完美活细胞图像的和谐统一。将活细胞工作站应用于实时观察间充质干细胞迁移行为,无疑为干细胞研究提供新的检测手段。

新生大鼠心脏成纤维细胞体外分裂方式

目的 观察体外培养状态下心脏成纤维细胞（CFs）的形态特征和分裂增殖方式。方法原代培养新生大鼠CFs，免疫荧光双标法分别检测波形蛋白和磷酸化组蛋白H3（H3P）共表达，波形蛋白和微管蛋白共表达。利用活细胞工作站和荧光显微镜观目的 观察处于不同分裂期的细胞时相。结果CFs 0．5～1h贴壁，培养2～3d细胞增殖旺盛，大量细胞进入有丝分裂期，其中多数CFs先隆起变圆，而少数则仍维持扁平状进行分裂。偶见无丝分裂现象。圆隆型有丝分裂时长为20～30min，扁平型分裂时长为40～50min。分裂前期胞核形状规则，H3P开始表达；前中期核膜破裂，纺锤体形成；中期染色体排列在赤道面，H3P高表达，纺锤体呈典型纺锤样；后期染色单体分开并移向两极，H3P在染色单体上持续表达；末期两个子核形成，微管聚集在两子核之间；胞质分裂期，两个子细胞形成，H3P不表达。结论体外培养的CFs存在圆隆型和扁平型两种有丝分裂形态，在分裂方式上存在有丝分裂和无丝分裂两种形式。

活细胞工作站技术在小鼠卵母细胞实时观察中的应用

目的将活细胞工作站(LCS)应用于实时观察小鼠卵母细胞后期成熟和极体排放过程。方法运用LCS技术平台,利用hoechst 33342标记DNA,同时结合明场观察,实时记录小鼠卵母细胞后期成熟和第二极体排放过程。结果在建立最适工作条件后,成功将LCS技术平台应用于小鼠卵母细胞观察,获得了第二极体排放的实时影像。结论 LCS技术可成功地应用于小鼠卵母细胞观察,为进一步扩展LCS应用范围,获得卵母细胞及早期胚胎生长发育过程的实时影像打下良好的基础。

破骨细胞微管正端蛋白动态成像观察

目的采用活细胞成像技术观察破骨细胞微管正端蛋白EB1在细胞内的分布及运动,初步研究微管在破骨细胞功能中的作用。方法 1用脂质体转染方法(阳离子脂质体Lip2000)转染EB1-GFP基因至Raw264.7细胞系,G418筛选转染成功的Raw264.7细胞,荧光显微镜下观察后GFP蛋白免疫荧光染色确定稳定转染EB1-GFP的Raw264.7细胞系建立;2活细胞工作站下观察转染EB1-GFP的Raw264.7细胞中EB1蛋白的运动;3用含100ng/m LRANKL和30ng/m L M-CSF的培养基分别诱导稳定转染EB1-GFP的Raw264.7细胞与正常Raw264.7细胞为破骨细胞,进行TRAP染色鉴定,比较两组细胞形态有无差别;4Raw264.7细胞系诱导出破骨细胞后,用细胞免疫荧光染色方法观察破骨细胞EB1蛋白的形态及分布;5活细胞工作站下观察稳转EB1-GFP的Raw264.7细胞诱导出的破骨细胞内EB1蛋白的运动状态。结果 1脂质体转染方法建立了稳定转染EB1-GFP基因的Raw264.7细胞系;2观察到破骨前体细胞Raw264.7的微管正端蛋白(EB1)的运动轨迹;3转染EB1-GFP基因的Raw264.7细胞与正常Raw264.7细胞诱导的破骨细胞TRAP染色无明显差别;4活细胞工作站观察破骨细胞微管正端蛋白EB1的运动状态,结果表明破骨细胞微管活动性较破骨前体细胞Raw264.7活动性低。结论 1EB1-GFP基因对破骨前体细胞系Raw264.7诱导破骨细胞无明显影响;2微管活动性降低可能与破骨细胞骨吸收活性相关。

成釉细胞受体介导的内吞功能的研究

目的:相对定量地研究成釉细胞的内吞功能,并在细胞水平上动态观察成釉细胞的内吞过程,以期为成釉细胞内吞功能研究提供2种新的可行的方法。方法:用视磺酸和地塞米粉(RA/DEX)诱导分泌期成釉细胞LS8细胞成熟,对照组细胞不经诱导处理。分别用激光共聚焦显微镜和活细胞工作站观察细胞内吞荧光标记的FITC-白蛋白的过程。结果:2种方法均显示RA/DEX诱导组细胞内吞活动较对照组强。结论:激光共聚焦显微镜和活细胞工作站都是研究成釉细胞内吞功能的有效方法。