猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体和猪瘟疫苗不同免疫程序的免疫效果比较分析

为了评估不同免疫策略对猪场免疫效果和经济效益的影响,以确定最佳的疫苗免疫程序,本试验将处于产前1个月的四胎次健康三元母猪随机分为2个组,A组(联合免疫组)母猪于产前27 d联合免疫猪圆环病毒2型基因工程疫苗、猪肺炎支原体灭活疫苗和猪瘟活疫苗(圆柯欣+柯喘宁+稳柯健),其所产仔猪于21日龄联合免疫圆柯欣、柯喘宁和稳柯健;B组(对照组)母猪于产前34和27 d分别免疫稳柯健、猪圆环病毒疫苗和猪肺炎支原体疫苗二联疫苗(圆-支二联疫苗),其所产仔猪于14日龄免疫圆-支二联疫苗,28日龄免疫稳柯健。统计和分析免疫各组临床指标、生产性能和持续性抗体水平。结果显示,免疫疫苗后,2个组的母猪采食情况均正常;2个组的仔猪整体精神状态良好,哺乳情况正常,均未出现咳嗽和喘气等呼吸道疾病。在试验期间内,2个组的母猪的窝产健仔数和仔猪出生健仔均重并无差别。A组和B组的出生至23日龄死淘率、出生至50日龄死淘率分别为3.77%、5.11%和4.07%、5.43%,A组略优于B组。抗体监测结果显示,A组母猪的CSFV和PCV2抗体水平较B组无显著差异(P>0.05);A组仔猪的CSFV抗体阳性率与B组无明显差异(P>0.05),而PCV2抗体水平在免疫早期阶段(21日龄)明显高于B组(P<0.05)。结果表明,猪圆环病毒2型、猪肺炎支原体和猪瘟疫苗可以联合免疫,且免疫后相互之间不干扰。该联合免疫策略在确保免疫效果的同时,简化了疫苗免疫程序,为确定最佳的疫苗免疫程序提供了有价值的临床应用参考。

猪瘟病毒E2基因重组鸡痘病毒的构建及免疫保护试验

应用PCR从pMD18-T-E2质粒中扩增编码猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)E2蛋白的基因片段,定向克隆到重组鸡痘病毒表达载体FPV-P11上,构建出重组鸡痘病毒转移载体FPV-pSY-E2。用脂质体将该质粒转染至鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)后,通过蓝斑纯化试验筛选出重组鸡痘病毒FV282-CSFV-E2。PCR证实E2基因已整合至鸡痘病毒基因组中。重组鸡痘病毒3次腹腔接种小鼠,ELISA检测血清猪瘟病毒抗体滴度为1:4096。给猪颈部和腹股沟皮下分点注射免疫3次,4周后用CSFV石门强毒株以100LD50接毒量攻击,结果保护率为75%。本试验为猪瘟重组鸡痘病毒活载体疫苗的研制奠定了基础。

表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗在兔体上的免疫原性分析

研究表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在兔体上的免疫原性,并确定其最小免疫保护剂量。将rAd-E0-E2按10倍梯度稀释为107.0 IFU、106.0 IFU、105.0 IFU,分别免疫接种家兔,14d后,用猪瘟脾淋苗对各组兔子进行攻毒。结果107.0 IFU组和猪瘟脾淋苗组均未出现定型热反应(0/4),脾重/体重指数比值分别为0.055%、0.05%,脾组织切片均未见充血、淤血,用RT-PCR和IFA方法均未检测到脾脏内有猪瘟脾淋苗病毒;106.0 IFU组3/4出现定型热反应,脾重/体重指数比值为0.074%,脾组织切片3/4可见充血、淤血,用RT-PCR和IFA方法可检测到3/4脾脏有猪瘟脾淋苗病毒;105.0 IFU组和对照组全部出现定型热反应(4/4),脾重/体重指数比值分别为0.099%和0.102%,脾组织切片充血、淤血严重,用RT-PCR和IFA方法均可检测到兔子脾脏内有猪瘟脾淋苗病毒。结果表明与对照组均不保护和猪瘟脾淋苗组全部保护相比,rAd-E0-E2在兔体的最小免疫保护剂量为107.0 IFU,本研究成功完成了rAd-E0-E2在兔体上的免疫原性分析。

猪瘟疫苗研究进展

猪瘟是猪的一种高度接触性传染病 ,由于其造成巨大的经济损失 ,故而为清除本病作了很多工作。猪瘟疫苗的接种是控制猪瘟的重要手段。猪瘟疫苗包括灭活苗、弱毒苗及基因工程疫苗。猪瘟兔化弱毒苗因其优良的免疫原性是目前猪瘟防治应用最为广泛的疫苗之一。基因工程疫苗是目前猪瘟疫苗研究的热点领域 ,其包括亚单位疫苗、合成肽苗、活载体苗、核酸疫苗等。值得一提的是猪瘟病毒标记疫苗研究近年来发展迅速 ,目前已出现商品化的亚单位标记疫苗 ,可使猪瘟疫苗接种和自然感染区别更为简单、快捷。

猪瘟活疫苗(脾淋源)污染外源性兔出血症病毒的检测与启示

在进行2批猪瘟活疫苗(脾淋源)效力检验时,出现效力检验家兔突然死亡现象,为了查明家兔死亡原因,采用无菌检验、支原体检验、血凝试验、兔体中和试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)对疫苗或注苗后死亡家兔肝脏、脾脏混合病料进行了检测。结果显示,疫苗的无菌检验、支原体检验结果均为阴性;疫苗及注射疫苗死亡家兔肝脏、脾脏混合病料具有较低的血凝价,血凝试验结果均为可疑;在兔体中和试验中,中和组家兔2/2健康存活,未中和的疫苗对照组家兔2/2死亡;疫苗及注射疫苗死亡后家兔肝脏、脾脏混合病料的ELISA检测结果均为阳性。检测结果证实疫苗中含有兔出血症病毒(Rabbit Haemorrhagic Disease Virus,RHDV)。猪瘟活疫苗(脾淋源)污染RHDV的现象启示:应该加强猪瘟活疫苗(脾淋源)抗原制备过程的控制;同时有必要对猪瘟活疫苗(脾淋源)质量标准进行修订使之进一步补充完善。

用间接免疫荧光检测方法评价猪瘟兔化弱毒活疫苗效力的研究

为用体外试验方法评价猪瘟兔化弱毒活疫苗效力,以猪瘟病毒抗体(兔源)为一抗、荧光素标记羊抗兔IgG为二抗,建立了CSFV兔化弱毒株的间接免疫荧光检测方法(IFA)。特异性试验表明,用该IFA方法检测CSFV兔化弱毒株接种的RK细胞为阳性,而检测伪狂犬病毒、猪细小病毒病、牛病毒性腹泻/粘膜病毒接种的RK细胞均为阴性。CSFV兔化弱毒株和活疫苗的兔体感染量(RID)用兔体测定,半数组织感染量(TCID50)用IFA测定,拟合RID与TCID50的线性回归方程,确定1RID/mL=(TCID50/0.1mL+200)/12。

家兔与BALB/c小鼠对猪瘟病毒E2蛋白靶向化树突状细胞疫苗敏感性的比较

为比较家兔与BALB/c小鼠对猪瘟病毒E2蛋白靶向化树突状细胞疫苗的敏感性,本研究首先根据小鼠与家兔体重比,分别免疫糖基化E2蛋白与E2蛋白(家兔2mg/只,小鼠20μg/只),在不同时间采血制备血清,通过ELISA方法测定血清中IgG水平。结果显示,接种后BALB/c小鼠出现了轻度的免疫应答,而家兔产生了强而持久的免疫保护。本研究对BALB/c小鼠的接种量进行了进一步摸索,结果表明,50与100μg/只免疫效果明显优于20μg/只;其中50μg/只E2蛋白与糖基化E2蛋白免疫后,血清IgG水平较高且稳定;而100μg/只糖基化E2蛋白免疫后,免疫初期,糖基化E2蛋白组产生了免疫抑制,至21d抗体水平逐渐升高且达极高水平;但100μg/只E2蛋白免疫后,整个免疫期内抗体水平均较低,只有轻微波动。以上结果表明,家兔对糖基化E2蛋白与E2蛋白的敏感性均显著高于BALB/c小鼠,且糖基化E2蛋白免疫效果明显好于E2蛋白,BALB/c小鼠的糖基化E2蛋白最佳免疫剂量为50μg/只。

三种猪用疫苗联合免疫的可行性分析

为简化免疫程序,减少免疫次数,降低反复多次免疫对猪只的应激,采用三种猪用疫苗联合免疫进行可行性分析。首先将猪瘟、猪丹毒、猪多杀性巴氏杆菌病三联活疫苗与猪伪狂犬病活疫苗进行混合,测定了混合后猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪丹毒杆菌和多杀性巴氏杆菌的活性。同时,在试验猪群中开展混合疫苗与猪圆环病毒2型灭活疫苗同步两点注射的联合免疫效果评价。结果显示,三联活疫苗和猪伪狂犬病活疫苗的混合疫苗与猪圆环病毒2型灭活苗的联合免疫不会降低疫苗的免疫效果,且能够达到较单独免疫更好的免疫效果,表明采用三种猪用疫苗进行联合免疫是完全可行的。

我国猪瘟流行新特点与疫苗免疫研究

对我国的猪瘟流行的新特点进行了描述,详细分析了造成猪瘟疫苗免疫失败的6大原因,并且对疫苗的发展历史和研究进展进行了详细介绍,提出了猪瘟防控的两个关键环节为种猪群野毒感染的控制及有效的免疫接种。

猪瘟脾淋苗与细胞苗阻断带毒母猪垂直传播的效果分析

为了探讨猪瘟脾淋苗与细胞苗阻断带毒母猪垂直传播的效果,以3个有代表性的规模化猪场为研究对象,将带毒母猪随机分成3组免疫接种。试验Ⅰ组采用脾淋苗1.5头份免疫,试验Ⅱ组采用脾淋苗2头份免疫,对照组采用细胞苗4头份免疫。以酶联免疫吸附试验检测带毒母猪所产仔猪的猪瘟抗原状况。结果表明,接受猪瘟脾淋苗免疫的带毒母猪所产仔猪的抗原阳性率(20.37%,11/54)明显低于接受细胞苗免疫母猪所产仔猪的抗原阳性率(48.15%,13/27),且试验Ⅰ组与试验Ⅱ组之间无明显差异。说明猪瘟脾淋苗免疫阻断带毒母猪垂直传播效果明显。

细胞源猪瘟活疫苗E2基因遗传稳定性和免疫原性分析

测定了中国4个细胞源猪瘟活疫苗(C株)E2基因全序列,将其与GenBank上13个猪瘟病毒的E2基因序列(含C株原始毒株、7个猪瘟病毒C株以及国际上5个主要猪瘟活疫苗毒株的E2基因全序列)进行了核苷酸序列、推导的氨基酸序列进行遗传变异分析,通过生物信息学手段对预测的E2蛋白N-糖基化位点、E2蛋白磷酸化位点和理化特性以及模拟的蛋白空间结构进行了比较,并通过免疫攻毒试验对4个细胞源猪瘟疫苗(C株)的免疫效果进行了验证。结果表明,与猪瘟病毒C株原始种毒相比,尽管中国4个细胞源猪瘟活疫苗的E2基因核苷酸序列、推导的E2蛋白氨基酸序列或模拟的三维结构等发生个别核苷酸变异、个别氨基酸位点突变或缺失,但均不影响猪瘟C株的免疫原性,猪瘟疫苗C株仍然是防控猪瘟的最有效武器。

猪瘟活疫苗佐剂稀释剂的制备及免疫效果评价

本试验旨在针对性的研发一种安全性好、能有效增强免疫效果、使用方便的猪瘟活疫苗新型佐剂稀释剂(AD),并对AD的免疫增强效果进行评价。采用高压均质技术制备了AD,采用响应面试验设计优化了AD的处方和制备工艺,并对其稳定性、粒径、多分散指数(PDI)及Zeta电位进行表征。将AD与猪瘟活疫苗混合后,肌肉注射免疫BALB/c小鼠,进行佐剂增强免疫效果评价。优化处方和工艺制备的AD平均粒径为100.4nm,PDI为0.147,Zeta电位为-28.7mV,试验结果表明其稳定性良好。免疫效果评价试验结果显示,佐剂组小鼠血清中抗猪瘟病毒(CSFV)抗体水平与对照组相比有显著差异(P<0.05),抗体水平能持续较长时间,表明AD能有效诱导机体产生体液免疫应答;佐剂组小鼠血清中IL-4、IL-6和IFN-γ的水平均有明显提高,表明该疫苗佐剂能诱导机体产生细胞免疫应答。本试验制备的佐剂稀释剂与疫苗混合使用,能显著提高体液免疫和细胞免疫水平,从而增强疫苗的免疫刺激能力。

既往免疫兔影响猪瘟活疫苗质检效果的实验研究

目的研究既往免疫兔对猪瘟活疫苗(CSFV)质量检定结果的影响。方法选择30日龄、60日龄、90日龄接种兔出血症灭活疫苗(RHDV)的清洁级獭兔、新西兰兔,分别静脉注射1∶1000、1∶1900、1∶2800、1∶3700等不同稀释度的猪瘟活疫苗工作抗原,每个稀释度4只,通过监测兔体温反应判断是否感染猪瘟病毒,比对不同品种兔、不同免疫时间对不同剂量猪瘟病毒敏感性的差异。结果 48只实验獭兔有47只呈现定型热反应(反应率97.9%),新西兰兔只有35只(反应率为72.9%),两者差异非常显著(P<0.01);獭兔不同日龄接种组之间(P=1.000)、猪瘟病毒剂量组之间(P=1.000)差异均不显著;新西兰兔1∶1900和1∶2800剂量合并组定型热反应较1∶1000和1∶3700剂量合并组,差异显著(P<0.05)。结论獭兔比新西兰兔用来检定猪瘟活疫苗结果较好;既往免疫獭兔各日龄组、剂量组对猪瘟活疫苗质量检定结果无实际影响;新西兰兔1∶1900和1∶2800剂量合并组定型热反应相对较高。

猪瘟弱毒标记疫苗候选株RecC-M1对猪的安全性研究

为探究猪瘟弱毒标记疫苗候选株RecC-M1(将牛病毒性腹泻病毒1型E^(rns)和猪瘟病毒基因2型流行株E2高变区分别置换弱毒疫苗C株对应区域构建而成)对猪的安全性,本实验以2.0×10^(5)FAID_(50)(50%荧光抗体感染剂量)高剂量的RecC-M1株经颈部肌肉注射接种12头35日龄猪瘟病毒(CSFV)抗体阴性仔猪,另设生理盐水对照组6头。接种后观察各组猪的临床症状,并于接种后不同时间(0、1 d、3 d、5 d、7 d、14 d、28 d和42 d)采血用于细胞计数;接种后7 d和42 d各取6头猪(包括第42 d对照组6头猪),剖杀后观察各组织剖检病变,并取各组织制作切片观察组织病变,采用qPCR检测病毒在各组猪各组织中的分布。根据qPCR结果,选择阳性组织样品(扁桃体、肾脏和淋巴结)的病理切片采用免疫组化法检测RecC-M1株在猪上述各组织中的分布。于接种后0~7 d、14 d、28 d和42 d分别采集各组猪的鼻拭子和肛拭子样品以及不同时间采集的血液,均采用qPCR检测各组猪的病毒血症及排毒;采用间接ELISA分别检测各组猪血清中分别针对BVDV及CSFV相应抗原的抗体水平。结果显示,RecC-M1组猪在42 d的观察期内均未出现临床症状,体温、白细胞数和淋巴细胞数与阴性对照组猪均无明显差异,且均在正常范围内;剖检及组织病变观察结果显示,接种后7 d和42 d猪的各组织均未见淤血或出血;扁桃体、淋巴结、脾、肾、膀胱、回盲瓣等CSFV嗜性组织均未见明显的病理学变化;各组织样品的qPCR结果显示,接种后7 d所有6头猪的肾脏和扁桃体样品和2头猪的淋巴结样品中均检出CSFV核酸,而接种后42 d所有猪的组织样品均为阴性;免疫组化结果显示,接种后7 d猪扁桃体和肾脏样品中CSFV抗原均呈阳性,接种后42 d猪的所有组织样品则均转为阴性;病毒血症和排毒的qPCR结果显示,接种后14 d内部分猪血液、鼻拭子和肛拭子样品中检出CSFV核酸,接种后28 d和42 d所有猪血液、鼻拭子和肛拭子则均为阴性。间接ELISA结果显示,接种后14 d针对BVDV1 E^(rns)抗体开始上升,而针对CSFV E2的抗体则在接种后7 d开始上升,此后两种抗体水平均随时间的推移呈持续上升趋势。阴性对照组猪各组织均未见明显剖检及组织病变,各组织CSFV抗原,各组织、血液及拭子样品均为阴性,也未产生针对相应病毒抗原的抗体。上述结果表明,高剂量的RecC-M1株对猪是安全的,本研究为RecC-M1株作为猪瘟弱毒标记疫苗的产业化开发奠定实验基础。

3种PCR引物对猪瘟活疫苗中支原体污染的检测

本研究以GenBank中登录的几种常见支原体的16S rRNA基因序列为标准,依据其属、种特征设计了3对引物,对猪肺炎支原体DNA进行PCR扩增,建立PCR扩增体系和条件。然后以此体系和条件对从市场上随机购买的猪瘟活疫苗样品进行检测。结果显示:3对PCR引物都可以从疫苗样品中检测到支原体的污染,3对引物的检出率分别为20%、17.1%和14.3%,说明猪瘟活疫苗中的支原体污染为多种支原体的混合污染,污染源较为复杂。

猪睾丸(ST)细胞系作为猪瘟活疫苗生产用细胞基质的研究

为评估猪睾丸(ST)细胞系作为猪瘟活疫苗生产用细胞基质的可行性,本试验取猪睾丸(ST)基础细胞库、工作细胞库不同代次细胞分别进行致瘤性检验和胞核学检验。结果表明,ST细胞在传代过程中无致瘤性且染色体遗传稳定。本试验取不同代次的ST细胞繁殖猪瘟病毒液并测定其毒液效价;取不同代次的ST细胞繁殖的猪瘟病毒分别对猪进行免疫攻毒测定其免疫原性。结果表明,将ST工作细胞传至第30代,其仍能良好地表达猪瘟病毒,且产毒稳定,病毒滴度高,连续收毒,病毒产量高,其所表达的猪瘟病毒仍保持良好的免疫原性。上述结果表明,猪睾丸(ST)细胞系适宜作为猪瘟活疫苗生产用的细胞基质。

猪瘟活疫苗(兔源)免疫猪体后血液转录组学变化初探

为了研究猪瘟活疫苗(兔源)免疫猪体后的免疫应答,本试验选择未免疫猪瘟疫苗且猪瘟抗原抗体阴性的4周龄小猪10头,随机分成2个组别,分别免疫猪瘟活疫苗(兔源)、健康家兔脾淋组织(组织对照),采集免疫后3 d的前腔静脉血液样本,利用RNA-Seq技术进行转录组测序分析,并采用荧光定量PCR(RT-qPCR)方法验证。结果表明:猪瘟活疫苗(兔源)免疫组与脾淋组织对照组相比,外周血中差异表达基因有317个(P<0.05),其中上调表达的基因数量为221个,下调表达的有96个;差异基因GO功能富集分析显示,与生物过程相关的有483个,细胞组分相关的98个,分子功能相关的有87个,其中显著差异转录的mRNA主要参与对病毒的防御反应(defense response to virus)、病毒过程(viral process)等生物过程;KEGG信号通路富集分析表明,涉及的通路数量有215个,与免疫和抗炎相关的有甲型流感(Influenza A)、EB病毒感染(Epstein-Barr virus infection)、RIG-I样受体(RIG-I-like receptor signaling pathway)、TNF信号通路(TNF signaling pathway)、NOD-like受体信号通路(NOD-like receptor signaling pathway)等,其中CXCL10、RSAD2、OAS1、OAS2、MX1、ISG15等基因上调表达;随机筛选了CXCL10、NOS3、CD86、NOD14个差异表达基因进行RT-qPCR验证,结果显示RT-qPCR和测序结果间的差异表达基因趋势基本一致,说明猪瘟活疫苗(兔源)免疫3 d可刺激猪体先天性免疫应答。

猪瘟活疫苗(传代细胞源)免疫产生期和免疫持续期试验

将三批猪瘟活疫苗(传代细胞源)以单剂量分别接种仔猪进行免疫产生期试验。在免疫同时以及免后1、2、3、4、5日连同对照组分别攻击猪瘟强毒,攻毒后观察16天,结果表明,猪瘟活疫苗(传代细胞源)免后4日即可产生坚强的免疫保护力。将三批猪瘟活疫苗(传代细胞源)以单剂量分别接种仔猪进行免疫持续期试验。在免后3个月、6个月、9个月、12个月、15个月连同对照组分别攻击猪瘟强毒,攻毒后观察16天,结果表明,猪瘟活疫苗(传代细胞源)的免疫持续期可长达15个月。

PRRSV-VR2332减毒活疫苗不影响猪瘟疫苗和猪圆环病毒2型灭活疫苗诱导的抗体产生

本研究拟评估仔猪接种猪繁殖与呼吸综合征减毒活疫苗对猪圆环病毒病疫苗、猪瘟疫苗免疫的干扰情况,并分析不同免疫方式对仔猪生长性能的影响,以期为探究PRRSV减毒活疫苗与PCV2、CSF疫苗的联合免疫提供数据参考。本研究先以100头仔猪为研究对象,将其随机分为A、B、C、D 4组。其中A组仔猪免疫PRRSV减毒活疫苗7 d后免疫PCV2疫苗;B组仔猪同期分点注射PRRSV减毒活疫苗和PCV2疫苗;C组仔猪仅免疫PCV2疫苗;D组仔猪仅免疫PRRSV减毒活疫苗。另外再筛选100头仔猪,随机分为E、F、G、H 4组。E组仔猪于免疫PRRSV减毒活疫苗12 d后免疫CSF疫苗;F组仔猪同期分点注射PRRSV减毒活疫苗和CSF疫苗;G组仔猪仅免疫CSF疫苗;H组仔猪仅免疫PRRSV减毒活疫苗。免疫4周后,测定仔猪血清中相关抗体水平。同时,称量免疫前后各组仔猪的体重,计算不同免疫方案仔猪的平均日增重。结果表明:A~D组中,A组和B组仔猪在免疫4周后均产生了较高水平的PRRSV及PCV2抗体,且A组抗体水平略高于B组。C组仔猪仅产生了PCV2抗体,D组仔猪产生了较高水平的PRRSV抗体。E~H 4组中,E组和F组仔猪均产生了较高水平的PRRSV及CSFV抗体。G组仔猪仅产生了高水平的CSFV抗体,H组仔猪仅产生了高水平的PRRSV抗体。A、B、C、D 4组中B组仔猪的平均日增重最高;而E、F、G、H 4组中E组仔猪的平均日增重显著高于其他3组。PRRSV减毒活疫苗与PCV2疫苗或CSF疫苗同期分点免疫、免疫PRRSV减毒活疫苗一段时间后再免疫PCV2或CSF疫苗均能诱导仔猪产生高水平的抗体;在体液免疫方面,PRRSV减毒活疫苗免疫与否均未对另外二种疫苗表现出明显的干扰作用。在仔猪28日龄时同期分点免疫PRRSV减毒活疫苗与PCV2疫苗,12 d后再免疫CSF疫苗的免疫方案不仅能诱导仔猪产生高水平抗体,还可以使仔猪具备较高的平均日增重。

猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗抗原菌选择性显色培养基的研发和应用

为研制便于检测猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗抗原含量的选择性显色计数琼脂(以下简称猪三联显色培养基)以代替传统的马丁琼脂,对比研究了干粉马丁琼脂、新鲜马丁琼脂和猪三联显色培养基的理化特性和生长特性,并通过活菌计数方法平行对比了猪丹毒单价苗、猪肺疫单价苗和猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗的抗原含量。结果显示,猪三联显色培养基在活菌计数的准确性和重复性上均与干粉马丁琼脂保持一致,而且两种菌的菌落回收率均能达到0.9以上。研究表明,猪三联显色培养基可以代替马丁琼脂作为检测猪丹毒和猪肺疫抗原菌含量的计数琼脂,在猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗生产过程中监测疫苗质量。