水痘减毒活疫苗冻干工艺的优化

目的:对冻干水痘减毒活疫苗的冻干工艺参数进行筛选和优化。方法:通过设计单因素试验和正交试验对水痘减毒活疫苗的关键冻干工艺参数进行优化,采用优化后的冻干曲线制备冻干水痘减毒活疫苗,并测定制品水分含量、外观、病毒滴度等指标。结果:最佳工艺参数为升华干燥温度-20℃,升华干燥真空度10 Pa,解析干燥温度30℃,解析干燥时间8 h;采用优化后冻干曲线制备的疫苗外观为乳白色或白色疏松体,复溶后为澄明液体,可微带乳光,无异物;各种理化性质及水分含量均符合规定,且制品病毒滴度符合标准。结论:优化后的冻干曲线适用于冻干水痘减毒活疫苗的制备。

猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)生产用毒种不同代次生物学特性的研究

将猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)基础毒种F7传至F13,并将PRV F8~PRVF13六个代次毒种接种仔猪进行安全性检验,PRVF8、PRVF10、PRVF13三个代次毒种接种仔猪进行免疫原性检验,用以研究猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)生产用毒种不同代次生物学特性。安全性检验结果显示,各代次毒种经颈部肌肉接种仔猪,观察期内仔猪精神、食欲、体温均正常;免疫原性检验结果显示,免疫组仔猪攻毒后精神、食欲、体温均正常,对照组仔猪攻毒后体温升高,全部发病并死亡。以上结果表明,猪伪狂犬病活疫苗(Bartha-K61株,传代细胞源)不同代次的生产毒种对仔猪均安全且保持良好的免疫原性。

鸡传染性支气管炎强毒分离株遗传进化分析和免疫保护试验

从山东省发病鸡群中分离鉴定了一株鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus,IBV）强毒株SDIB821/2012,对其进行S1基因序列测定分析和免疫保护试验。S1基因遗传进化分析结果显示,SDIB821/2012属于以QXIBV为代表的基因型,与同属一个基因型的IBV参考株氨基酸同源性为91.6%～98.5%,与疫苗株491同源性为77.6%,与H120和MA5同源性均为74.8%。免疫保护试验结果显示,根据试验鸡临床症状和发病死亡情况,弱毒活疫苗491对SDIB821/2012的保护率为90%,而H120和MA5对SDIB821/2012的保护率分别仅为40%和33%。攻毒后各免疫组喉头、泄殖腔棉拭样品以及气管、肺脏和肾脏组织均可检测到病毒,表明3种IB疫苗均不能对SDIB821/2012提供完全的免疫保护。

乙型脑炎减毒活疫苗细菌内毒素检查方法及质量标准的建立

目的建立乙型脑炎减毒活疫苗细菌内毒素检测的方法及质量标准。方法参照《中华人民共和国药典》(三部)中细菌内毒素检查法检测,并与家兔热原实验结果进行对比。结果使用凝胶限量法检测乙型脑炎减毒活疫苗细菌内毒素,限值为40 EU/mL,即将样品稀释至160倍,在该稀释度下样品对试验没有干扰。结论该方法简便、灵敏、结果可靠,可用于乙型脑炎减毒活疫苗中间产品的细菌内毒素检查。

单克隆抗体在甲肝减毒活疫苗毒种检定中应用

目的 利用单克隆抗体代替常规的人、猴免疫血清进行甲型肝炎减毒活疫苗毒种外源因子检查及鉴别试验。方法 选择适宜的单克隆抗体浓度与甲肝病毒进行中和试验 ,观察单克隆抗体的中和作用 ;利用单克隆抗体中和毒种 ,进行外源因子检查 ,并应用于鉴别试验。结果 此单克隆抗体可中和 10 5细胞培养半数感染量 (CCID50 )甲肝病毒 ,比人、猴免疫血清的中和能力高约 10 0倍 ;将此高效价的单克隆抗体中和毒种后进行血吸附及非血吸附外源因子检查 ,结果均为阴性 ;此单克隆抗体还可用于毒种鉴别试验。结论 此高效价的单克隆抗体可代替人、猴免疫血清应用于毒种的外源因子检查及鉴别试验。

麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次对病毒滴度稳定性试验的影响

目的 了解麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次的稳定性范围.方法 用DMEM培养液将Veto细胞137代连续传至173代,检测其细胞活力,并观察Vero细胞的形态,接种麻疹减毒活疫苗参考品进行病毒滴定及热稳定性试验.结果 170代以下Vero细胞形态良好,细胞活力在85％以上,麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验的结果：137～ 169代Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验无统计学差异（P＞0.05）,170代以上代次的Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗热稳定性试验有明显统计学差异（P＜O.01）.结论 169代以下Vero细胞为检定用麻疹减毒活疫苗最佳细胞代次.

应用树鼩对硫酸乙酰肝素佐剂的安全性初步评价

目的通过检测佐剂硫酸乙酰肝素(HS)对树鼩皮肤的刺激性反应以及佐剂与甲型肝炎减毒活疫苗(Hep A-1)联合免疫树鼩后主要组织器官的病理分析,探讨以树鼩作为动物模型进行安全性评价的可行性。方法根据给药次数和皮肤是否完整将树鼩随机分组,采用树鼩同体自身左右对比的方法进行皮肤刺激性实验。根据疫苗及佐剂种类将树鼩随机分组,采用皮下免疫方式,免疫后20周取主要组织器官制备病理切片,HE染色,观察主要组织器官病理学特征。结果佐剂HS单次及多次给药对树鼩完整皮肤组和破损皮肤组的受试部位均不产生红斑、水肿等刺激性变化。与对照组相比,HepA-1免疫组以及HepA-1联合HS免疫组的心、肝、脾、肺、肾及大脑组织病理观察,均未见明显异常。结论证实了以树鼩作为动物模型进行疫苗安全性评价的可行性,为以后疫苗及药物评估平台建设提供了基础数据。

伪狂犬活疫苗C株抗体消长规律及攻毒保护试验

应用中和试验法对伪狂犬活疫苗C株免疫仔猪进行抗体水平动态监测,结果表明,疫苗接种7 d产生中和抗体,42 d抗体水平达到高峰,180 d时抗体仍保持较高水平。攻毒试验证实,免疫后80%免疫仔猪获得保护。确定伪狂犬活疫苗C株免疫保护期可持续6个月。

家禽活疫苗中禽白血病病毒污染检测方法比较

本研究对家禽活疫苗中禽白血病病毒的不同检测方法进行了对比,通过直接ELISA检测法、RT-PCR法、病毒分离法和SPF鸡抗体检测法,对不同来源的家禽活疫苗进行了禽白血病病毒污染的检测。通过进一步测序验证发现,直接ELISA检测法和RT-PCR检测法都可出现"假阳性"。试验结果表明,病毒分离法虽然结果准确,但是操作难度大、技术要求高,而SPF鸡抗体检测法既简单、准确,又能确切反映疫苗的纯净性,利于推广应用。

两种商品化新型冠状病毒中和抗体检测试剂盒的应用性能评价

目的评价两种商品化新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)中和抗体检测EIA试剂盒的应用性能。方法使用两种商品化SARS-CoV-2中和抗体ELISA检测试剂盒(A和B),以疫苗免疫前血清44例、免疫后1个月血清120例、COVID-19患者愈后6个月的恢复期血清64例作为样本盘,进行中和抗体检测,同时通过活病毒微量中和试验(micro-neutralization test,micro-NT)检测上述血清样本的50%中和抗体滴度(50%neutralization titer,NT50)。分析两种商品化试剂盒与活病毒中和试验在定性及定量结果上的一致性。结果定性结果分析发现,以micro-NT检测结果作为标准,A和B试剂盒的阳性符合率分别为97.40%和100.00%;阴性符合率分别为97.30%和95.95%;约登指数分别为0.95和0.96。定量结果分析发现,对于疫苗免疫后样本,A、B试剂盒与micro-NT检测结果的相关系数分别为0.24(P<0.05)和0.52(P<0.0001);对于恢复期血清样本,A、B试剂盒与micro-NT检测结果相关系数分别为0.81(P<0.0001)和0.89(P<0.0001)。结论A和B两种商品化中和抗体检测试剂盒与micro-NT定性结果具有良好一致性,两种试剂盒对恢复期血清样本的中和抗体滴度检测与micro-NT结果表现出了更强的相关性。

麻疹减毒活疫苗市场监督检验质量分析和评价

目的为保障麻疹减毒活疫苗(Measles Attenuated Live Vaccin,MV)的安全性和有效性,通过对市场流通的MV进行评价性抽验,以了解流通环节和使用中的MV质量状况。方法从24个省(自治区、直辖市)、设区的市(地区、州、盟)、县(区、市、旗)级疾病预防控制中心(CDC)以及基层使用单位抽取MV样品,通过检测其病毒滴度,评价和分析MV在流通中的质量状况。结果在各级CDC及基层使用单位抽取的54批MV样品,其病毒滴度均符合2005年版《中国药典》三部的规定要求。在市场流通的MV的病毒滴度与其出厂时的病毒滴度比较,病毒滴度平均下降(0.2lg±0.3)。结论MV具有较好的稳定性,其质量均符合2005年版《中国药典》三部的规定要求,同时也表明疫苗运输和保藏的冷链系统较好。

乙脑病毒SA14-14-2减毒株分枝杆菌检测分析

目的对乙脑减毒活疫苗生产用毒种即乙脑病毒SA14-14-2减毒株的现行主种子批、工作种子批进行分枝杆菌检测,更好地控制外源因子对乙脑减毒活疫苗生产用毒种的污染。方法运用改良罗氏培养基培养法对乙脑病毒SA14-14-2减毒株的4个批号毒种样本进行分枝杆菌检测。结果 4个批号的乙脑病毒SA14-14-2减毒株毒种样本(主种子批,批号:9903;工作种子批,批号:JEV-W-7-20120701、JEV-W-7-20120702及JEV-W-7-20131201)的分枝杆菌培养结果无菌落生长。结论本次试验中4个批号的乙脑病毒SA14-14-2减毒株毒种样本分枝杆菌培养检测为阴性,说明乙脑毒种样本没有受到分枝杆菌污染,进而保障了乙脑减毒活疫苗的安全性。