PKC-α、PKA-Ⅰ反义核酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞生长增殖的影响

目的 :探讨PKC -α和PKA -Ⅰ反义核酸 (asODN)对鼻咽癌CNE - 2Z细胞生长增殖的影响。方法 :分别用脂质体 (lipofectin ,LP)介导asODN转染鼻咽癌CNE - 2Z细胞。实验组 :① 0 0 1- 1 0 0 μmol/LPKC -αasODN ;②0 0 1- 1 0 0 μmol/LPKA -ⅠasODN ;③ 0 5 0 μmol/LPKC -αasODN +0 5 0 μmol/LPKA -ⅠasODN。对照组 :相应浓度的随机序列 (rODN)。用免疫组化法检测CNE - 2Z细胞PKC -α和PKA -Ⅰ的表达 ,MTT法检测其生长指数 (growthin dex ,GI) ,软琼脂克隆形成率检测其体外增殖能力。结果 :PKC -αasODN或 /和PKA -ⅠasODN均可阻断其相应PKC-α或PKA -Ⅰ的表达 (P <0 0 5 )。PKC -αasODN或PKA -ⅠasODN均能显著降低CNE - 2Z细胞GI和软琼脂克隆形成率 (P <0 0 5 ) ,且具有量效依赖关系。PKC -αasODN +PKA -ⅠasODN共同作用可使其GI和软琼脂克隆形成率非常显著降低 (P <0 0 1) ,无明显量效依赖关系 ,两者对CNE - 2Z生长抑制作用强于PKC -αasODN或PKA -Ⅰa sODN(P <0 0 5 ) ,对其软琼脂克隆形成率的抑制作用与PKC -αasODN或PKA -ⅠasODN无显著差异 (P >0 0 5 )。结论 :PKC -αasODN和PKA -ⅠasODN均可抑制CNE - 2Z细胞体外生长和增殖 ,两者具有协同作用。

Survivin反义寡核苷酸对人肝癌细胞的抑制作用

目的探讨survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人肝癌细胞HepG2的抑制作用。方法采用免疫组织化学法检测肝细胞癌(HCC)组织中survivin的表达。采用脂质体介导survivin ASODN体外转染人肝癌细胞株HepG2,Western blot检测细胞survivin蛋白的表达,FCM检测细胞的凋亡率,观察细胞在软琼脂中的集落形成能力。建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,观察survivin ASODN的体内抑癌作用。结果(1)肝癌组织中survivin表达阳性率为75.8%(25/33),明显高于癌旁组织和正常肝组织(P<0.01);(2)survivin ASODN体外转染可明显下调HepG2细胞survivin蛋白表达,ASODN组HepG2细胞凋亡率明显高于空白对照组和SODN组(P<0.01),ASODN组HepG2细胞在软琼脂中形成的集落数目明显少于空白对照组和SODN组(P<0.01);(3)ASODN组瘤体生长速度较空白对照组和SODN组明显减慢(P<0.01),ASODN组瘤体重量较空白对照组和SODN组明显减轻(P<0.05)。结论Survivin在HCC组织中高表达;survivin ASODN可以诱导HepG2细胞凋亡,在体外实验和动物实验中对HepG2细胞生长都有抑制作用。

MAPK反义寡核苷酸对肝癌细胞恶性表型的逆转作用

目的:探讨MAPK反义寡核苷酸对肝癌细胞恶性表型的逆转作用。方法:用脂质体转染法将MAPK反义寡核苷酸导入肝癌细胞株SMMC-7721中,通过细胞活力、蛋白质含量、集落形成和DNA合成的变化检测MAPK反义寡核苷酸对肝癌恶性表型的逆转作用。结果:MAPK反义寡核苷酸可明显抑制细胞活力、蛋白质含量、集落形成和DNA合成,其抑制率分别为52.6%、50.5%、54.9%和47.5%,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:MAPK反义寡核苷酸可逆转SMMC-7721细胞恶性表型,也为肝癌治疗指出了新方向。

Survivin反义寡核苷酸抑制肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的作用

目的:研究survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人肝癌耐药细胞株移植裸鼠皮下后,移植瘤生长的抑制作用。方法:将人肝癌耐药细胞系SMMC-7721/ADM裸鼠移植瘤模型,随机分为:空白对照组、单纯脂质体转染组、正义链转染组、200μg/LASODN组、400μg/LASODN组和600μg/LASODN组,观察裸鼠移植瘤体积,计算抑瘤率。免疫组化检测Survivin蛋白的表达。结果:A组、B组和C组移植瘤随时间增长而增大,但3组间无显著差异(P>0.05)。D组、E组和F组注射ASODN后,裸小鼠移植瘤的体积随着注射ASODN时间的延长和ASODN浓度的增加,移植瘤生长越来越小,并呈时间-剂量-效应依赖性。实险第20dD组、E组和F组的肿瘤抑制明显大于A组、B组和C组(P<0.05)。HE染色见对照组移植瘤细胞密集成群,核大深染,而ASODN组见肿瘤细胞少,癌细胞皱缩变圆,胞核固缩深染。免疫组化见对照组肝癌细胞浆Survivin蛋白表达较强,而ASODN组Survivin蛋白表达较弱。结论:Survivin反义寡核苷酸能够抑制裸鼠皮下移植瘤的生长。

反义PKCα对CNE-2Z细胞周期的影响

目的 :观察蛋白激酶Cα亚型 (PKCα)的反义寡核苷酸对鼻咽癌CNE - 2Z细胞生长、细胞周期和cyclinE表达的影响。方法 :脂质体法转染反义PKCα,MTT法测细胞生长 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,免疫细胞化学及点印迹法检测cyclinE表达。结果 :①随着反义PKCα的浓度增加 ,细胞生长指数逐渐降低 (P <0 0 1)。②反义PKCα使细胞G1期百分比增高 (P <0 0 5 )。③反义PKCα使细胞cyclinE的表达减弱 ,扫描定量反义PKCα组为对照组的 6 6 5 %± 18 4 % (P <0 0 5 )。结论 :反义PKCα可通过抑制cyclinE表达、阻滞细胞于G1期从而抑制CNE -

整合素连接激酶反义寡核苷酸对卵巢上皮性癌细胞生长的抑制作用

目的探讨整合素连接激酶（ILK）反义寡核苷酸（ASODN）对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞生长的抑制作用。方法将ILK-ASODN转染入卵巢癌细胞株HO8910细胞，阻断其表达ILK。实验分为6组，分别为空白对照组（A组）、脂质体对照组（B组）、ILK-正义寡核苷酸（SODN）100nmol／L组（C组）和ILK-ASODN 60nmol／L组（D组）、ILK-ASODN 80nmol／L组（E组）、ILK-ASODN 100nmol／L组（F组）。采用RT-PCR技术和蛋白印迹法检测各组HO8910细胞ILK mRNA和蛋白表达量的变化；水溶性四氮唑1（WST-1）法及流式细胞术评价HO8910细胞转染ILK-ASODN后对该细胞体外增殖的抑制作用及对该细胞周期和凋亡的影响。结果ILK-ASODN转染后HO8910细胞ILK mRNA表达量明显下降，D、E、F3个实验组分别为0．307±0．011、0．198±0．008、0，与A、B两对照组（分别为0．343±0．006、0．342±0．009）比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。ILK-ASODN转染后HO8910细胞ILK蛋白表达量也明显下降，D、E、F3个实验组分别为26．3±0．8、20．6±0．4、0；细胞生长受到明显抑制，细胞凋亡率明显增高，3个实验组分别为7．31％、8．84％、11．27％；G0／G1期细胞增多。3个实验组分别为49．25％、56．28％、67．61％。以上指标分别与A、B组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论ILK-ASODN转染卵巢癌HO8910细胞后可以明显抑制其生长。

干细胞生长因子反义寡核苷酸对肝癌细胞中原癌基因蛋白质c-kit及碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的探讨干细胞生长因子(SCF)反义寡核苷酸对肝癌HepG2细胞中原癌基因蛋白质c-kit、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及意义。方法以脂质体作为转染载体,转染SCF反义寡核苷酸于HepG2细胞。实验分三组:(1)空白对照组;(2)转染SCF反义寡核苷酸组;(3)转染SCF错义寡核苷酸组。Western blot方法检测转染前后肝癌细胞中SCF、bFGF蛋白的表达,RT-PCR检测转染前后肝癌细胞中c-kit与bFGF mRNA的表达,用流式细胞仪检测转染SCF反义寡核苷酸后HepG2细胞凋亡率。结果与转染错义寡核苷酸组相比,SCF反义寡核苷酸对HepG2细胞中c-kit、bFGF的表达有明显抑制作用,转染SCF反义寡核苷酸可明显增加HepG2细胞凋亡率(P<0.01)。结论 SCF在肝癌细胞凋亡中有重要调节作用,SCF/c-kit有可能作为PI3K/Akt信号通路的上游对肝癌细胞bFGF的表达起重要调控作用。