缺氧诱导肝癌细胞EMT转化及耐药的初步实验研究

【目的】观察缺氧对肝癌细胞侵袭转移能力的影响,并进一步探讨缺氧环境下肝癌细胞耐药机制。【方法】利用HepG2、SMMC-7721细胞建立肝癌细胞缺氧模型,利用倒置显微镜观察细胞形态学变化;Transwell迁移与侵袭实验检测肿瘤细胞体外侵袭转移能力;MTT法检测肿瘤细胞活性;Western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vinmentin、N-cadherin和肿瘤耐药基因ABCG2的表达;采用流式细胞术检测凋亡和细胞周期变化。【结果】缺氧培养48 h后的肝癌细胞从上皮细胞样表型转化为间质细胞样表型;缺氧条件下肝癌细胞E-cadherin表达显著下降,Vimentin和N-cadherin表达显著升高（P〈0.05）。同时,缺氧条件下肝癌细胞迁移和侵袭能力显著增强（P〈0.05）。缺氧可导致HepG2、SMMC-7721停滞于静止期（G0/G1）的细胞数显著增多,缺氧条件下肝癌细胞对cisplatin耐药性显著增加（P〈0.05）; 缺氧条件下ABCG2蛋白表达增加（P〈0.05）。【结论】缺氧能诱导肝癌细胞EMT转化而致侵袭转移,同时可导致对cisplatin耐药。

沙利度胺联合表阿霉素治疗小鼠H22肝癌移植瘤的实验研究

目的 探讨沙利度胺联合表阿霉素治疗小鼠 H22肝癌移植瘤的疗效。方法 培养 H22肿瘤细胞，制造皮下移植瘤小鼠模型60只。按照不同治疗方法将小鼠模型分成三组，每组20只，其中A组小鼠采用沙利度胺联合表阿霉素治疗；B组小鼠仅采用表阿霉素治疗；C组采用生理盐水对照，在治疗d7、d14、d21和d30测量各组小鼠肿瘤直径，统计治疗后12个月内三组小鼠死亡率。结果 A组小鼠d14肿瘤直径为（11．37 ± 1．03） mm ，显著短于同期B组（19．32 ± 1．12） mm和C组（28．39 ± 1．19） mm ；A组小鼠d30肿瘤直径为（9．23 ± 1．08）mm ，显著低于B组（12．23 ± 1．04 mm）和C组（29．29 ± 1．03 mm）。A组死亡率10％（2／20）显著低于B组45％（9／20）和C组80％（16／20）。结论 沙利度胺联合表阿霉素治疗小鼠 H22肝癌移植瘤疗效满意。

安罗替尼对人肝癌细胞裸鼠移植肿瘤生长及生物钟基因表达的影响

【目的】探讨安罗替尼对人肝癌细胞裸鼠移植后肿瘤生长情况及相应生物钟基因表达的影响。【方法】选取实验无胸腺裸鼠共36只,取人肝癌HepG2细胞,移植于小鼠左侧腋皮下,建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型。接种完成1周后,随机分为安罗替尼处理组和对照组,每组18只。安罗替尼组给予安罗替尼50 mg/(kg·d)灌胃,空白对照组给予二甲基亚砜(DMSO)1OO μL/20(g·d)灌胃,每日1次,连续2周。在灌胃开始前和灌胃结束后24 h测量肿瘤体积情况。待2周后处死小鼠并剥离肿瘤,采用实时PCR(Real-Time PCR)法检测生物钟基因Per(Per1、Per2、Per3)、CLOCK、Cry(Cry1、Cry2)、Bmall、Dec2和Timeless mRNA表达水平,同时运用western blot评估上述基因及蛋白质表达情况。【结果】与对照组相比,安罗替尼组裸鼠移植瘤较对照组生长缓慢,体积趋向于缩小。RT-PCR提示肝癌细胞中生物钟基因在安罗替尼作用下,Per1、Per2的mRNA表达量明显增加(P<0.05),同时下游蛋白质表达量增加,而Dec2的mRNA表达量及下游蛋白质表达则明显受抑制(P<0.05);Cry1的mRNA表达量不变,但相应的下游蛋白质表达受抑制。【结论】安罗替尼能显著调节肝癌细胞中多种生物钟基因表达,调控其相应表达产物生成,可抑制肝癌移植瘤的生长,其作用机制之一可能与调控生物钟基因表达密切相关。

榄香烯对H22肝癌荷瘤小鼠TRAF6、Caspase-8表达的影响

目的 观察榄香烯对H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤组织中肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶8（Caspase-8）基因表达的影响.方法 采用皮下接种H22肝癌细胞株的方法复制小鼠肝癌模型.将BALB/c小鼠40只按随机数字表法分4组（每组10只）：模型组,榄香烯低、高剂量组,顺铂组.处死小鼠后称取各组小鼠肿瘤的重量.采用荧光定量RT-PCR方法检测各组药物对小鼠肝癌肿瘤组织TRAF6、Caspase-8基因表达的影响.结果 榄香烯低、高剂量组的抑瘤率分别为24.2％、27.4％,顺铂（DDP）组抑瘤率为28.2％,与模型组比较,榄香烯低、高剂量组与DDP组小鼠肝癌瘤重明显减轻（P＜0.01）.与模型组比较,榄香烯低、高剂量组与DDP组肝癌小鼠肿瘤组织中的TRAF6 mRNA表达水平下降,而Caspase-8 mRNA表达水平升高,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 榄香烯具有抑制肝癌生长的作用,其分子机制可能是下调肿瘤组织TRAF6表达,上调Caspase-8表达,促进肝癌细胞凋亡达到抗肿瘤的作用.