Livin mRNA的反义核酸诱导MCF-7乳癌细胞凋亡作用(英文)

目的 :以livinmRNA为靶点设计反义硫代脱氧寡核苷酸 (PS ODNs) ,探讨其体外抗肿瘤效应及其机制。方法 :设计以livinmRNA为靶点的反义核酸并作用于MCF 7乳癌细胞 ,用MTT、RT PCR和流式细胞仪检测等方法对其进行评价研究。结果 :在设计的一些反义核酸中 ,YMZ0 5能够有效地抑制livin基因的表达 ,增加caspase 3的活性 ,诱导MCF 7细胞凋亡 ,明显抑制其生长 ,结论 :通过抑制livin基因的表达能够抑制MCF 7乳癌细胞生长、诱导其凋亡 ,livin可能会成为抗肿瘤的新靶点。

反义核苷酸沉默Livin基因对喉鳞癌细胞凋亡影响的体外研究

目的为了保护喉功能和提高喉鳞癌病人的生活质量,我们设计反义Livin作用于喉鳞状细胞癌来减少Livin表达,分析在体外对喉鳞状细胞癌细胞凋亡的影响。方法用real-time quantitative PCR对AS-ODNs、SenODNs、Mis-ODNs、hep-2组(Control)的Livin mRNA进行分析;用Western blot对AS、Sen、Mis、与hep-2组的Livin蛋白进行分析;用流式细胞仪分析喉癌细胞的凋亡情况。结果AS-ODNs、Sen-ODNs、Mis-ODNs与Control组的Livin mRNA相对表达量以AS-ODNs组最低,为(24.03±7.02)%,AS组与Sen、Mis、Control组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。AS、Sen、Mis与Control组的Livin蛋白相对表达量以AS-ODNs组最低,为(11.65±3.68)%,AS组与Sen、Mis、Control组比较,差异亦有统计学意义(均P<0.05)。将AS、Sen、Mis转染喉鳞状细胞癌细胞,行流式细胞仪检测,结果发现AS组的凋亡率为(36.54±6.04)%,远高于Sen、Mis、Control组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在体外,Livin反义多核苷酸降低了喉鳞状细胞癌中Livin的表达,同时增强了喉鳞状细胞癌细胞的凋亡。

miR-214抑制Livin表达对喉鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨微小RNA-214(miR-214)对喉鳞状细胞癌(LSCC)细胞增殖和凋亡的影响及可能的分子机制。方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测人LSCC细胞Hep-2、FD-LSC-1、TU177和正常永生化表皮细胞Hacat中的miR-214。将miR-214模拟物(miR-214 mimics)和模拟物阴性对照(miR-NC)转染至TU177细胞,分别记作miR-214 mimics组和miR-NC组,采用RT-qPCR技术检测各组细胞中的miR-214,采用CCK-8实验和平板克隆形成实验分别检测各组细胞增殖活性和克隆形成能力,采用流式细胞术测算各组细胞凋亡率,采用Westernblotting法检测各组细胞中的Bcl-2、Bax和Livin蛋白。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-214和Livin的靶向调控关系。结果Hep-2、FD-LSC-1、TU177细胞中miR-214的相对表达量低于Hacat细胞(P均<0.05)。与miR-NC组相比,miR-214 mimics组TU177细胞增殖活性降低,克隆细胞数减少,凋亡率升高,Livin和Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,miR-214能靶向结合Livin的3'UTR区(P<0.05)。结论miR-214在LSCC细胞中呈低表达;在体外,miR-214能够抑制Livin表达从而抑制LSCC细胞的增殖并促进其凋亡。

anti-Livin核苷酸调低喉鳞癌裸鼠移植瘤内Livin的表达对喉鳞癌细胞凋亡的影响

目的利用anti-Livin核苷酸调低喉鳞癌裸鼠移植瘤内Livin的表达量,探讨其对喉鳞癌细胞凋亡的影响。方法28只雌性裸鼠(BALB/c-nu/nu)随机分为Livin AS-DNs(Livin反义多核苷酸)、Mis-DNs、Sen-DNs和对照组,每组7只,于各组裸鼠背部皮下注射1×10~5 Hep-2细胞成瘤,用AS-DNs、Mis-DNs、Sen-DNs和生理盐水分别对裸鼠移植瘤进行注射;测量肿瘤长径和短径变化,将肿瘤体积变化绘制成生长曲线。采用Western blot检测AS-DNs、Mis-DNs组、Sen-DNs组、对照组瘤组织Livin蛋白;利用TUNEL染色法检测各组瘤体中细胞凋亡。结果 Livin蛋白表达最低为AS-DNs组(15.02±1.68)%,MisDNs组、Sen-DNs组和对照组明显高于AS-DNs组(P<0.05);AS-DNs组裸鼠瘤体内喉鳞癌细胞的凋亡指数最高为(20.15±3.1)%,明显高于Mis-DNs组、Sen-DNs组和对照组(P<0.05);分别对裸鼠移植瘤进行注射后,AS-DNs治疗组的喉鳞癌细胞生长较Mis-DNs组、Sen-DNs组和对照组慢,差异有统计学意义(P<0.05)。结论反义Livin多核苷酸在裸鼠移植瘤内促进了喉鳞状细胞癌的凋亡,抑制了肿瘤的生长。

食管鳞状细胞癌组织中Livin与半胱氨酸蛋白酶-3的表达

目的:检测食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中Livin与半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达。方法:采用免疫组化SP法检测53例ESCC及53例癌旁正常食管组织中Livin及Caspase-3蛋白的表达。结果:ESCC组织中Livin蛋白的阳性表达率(52.8%)高于癌旁正常食管组织(7.5%,χ2=20.346,P<0.001),其阳性表达率与ESCC浸润深度及淋巴结转移有关(P均<0.05)。ESCC组织中Caspase-3的阳性表达率(39.6%)低于癌旁正常食管组织(83.0%,χ2=16.690,P<0.001),其阳性表达率与ESCC组织分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关(P均<0.05)。ESCC组织中Livin与Caspase-3蛋白的表达负关联(rP=-0.302,P=0.021)。结论:Livin和Caspase-3蛋白参与了ESCC的发生与发展;Livin蛋白可能通过抑制Caspase-3蛋白的活性发挥作用。

反义寡核苷酸对淋巴瘤细胞Livin基因表达及细胞凋亡的影响

目的分析凋亡抑制蛋白Livin基因的反义寡核苷酸(ASODN)对人淋巴瘤细胞株(Raji)Livin mRNA表达的抑制作用及其对细胞凋亡的影响。方法合成Livin特异性全硫代修饰的ASODN及其对照错义寡核苷酸(MSODN),通过脂质体转染Raji细胞,MTT法检测细胞的增殖抑制率;RT-PCR法检测转染前后Livin mRNA表达水平的变化;Hoechst染色观察细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测细胞的凋亡率。结果 Livin ASODN能显著抑制Raji细胞的增殖(P<0.01),并呈现一定的剂量效应关系。0.6μmol/L的ASODN作用Raji细胞48h后,Livin mRNA的表达水平明显下调,细胞出现凋亡的形态学改变,细胞凋亡率为(37.54±2.65)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 Livin ASODN能有效降低Livin mRNA表达水平,抑制Raji细胞增殖,并增强细胞凋亡的敏感性,有望成为淋巴瘤基因治疗的分子靶向。

Livin在舌鳞癌中的表达及意义

目的:探讨舌鳞癌组织中凋亡抑制蛋白(Livin)的表达及其临床意义。方法:免疫组织化学S-ABC方法检测10例正常舌黏膜和45例舌鳞状细胞癌标本中Livin的表达情况。结果:舌鳞癌与正常舌黏膜Livin阳性表达率分别为68.9%和0%,二者有非常显著的差异(P<0.01);livin的高表达与舌鳞癌组织学分级、TNM分期相关(P<0.05),与颈淋巴结转移密切相关(P<0.01)。结论:Livin表达与舌鳞癌发生、临床进展密切相关,有望成为舌鳞癌治疗的新靶点。

Livin和Bcl-2在喉鳞状细胞癌的表达及相关性研究

目的探讨Livin和Bcl-2蛋白在喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)组织中的表达以及其相关性。方法采用免疫组化法检测Livin和Bcl-2在喉癌组织和正常喉黏膜组织中的表达。结果喉鳞癌组织中Livin阳性率77.5%,Bcl-2阳性率72.5%,与正常喉粘膜组织比较其差异有统计学意义(P<0.05)。Livin蛋白的表达与喉鳞癌的TNM分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄、性别和组织学分级比较差异无统计学意义(P>0.05)。在喉鳞癌组织中Livin和Bcl-2蛋白的表达呈正相关(r=0.339,P<0.05)。结论 Livin的高表达提示其参与了喉鳞癌的发生、发展及转移。Livin与Bcl-2在喉鳞癌癌变中发挥了协同作用。

Livin蛋白在喉癌组织中表达及与喉癌细胞凋亡关系的研究

目的探讨Livin蛋白在喉鳞癌组织中的表达以及其与喉癌细胞凋亡的关系。方法应用免疫组化SP法分别检测67例喉鳞癌组织和36例癌旁组织中Livin蛋白的表达情况;同时用末端脱氧核苷酸转移酶介导的荧光素标记dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测喉癌细胞凋亡率,计算凋亡指数(AI)。分析二者的关系。结果 Livin在喉鳞癌组织中的表达高于癌旁组织(P<0.01)。Livin的表达在喉癌不同分化程度、淋巴结有无转移及不同临床分期间有显著性差异(P均<0.05),在不同临床分型、有无吸烟史、不同性别及年龄间无显著性差异(P均>0.05)。喉癌组织癌细胞凋亡指数明显低于癌旁组织(P<0.05)。喉鳞癌组织中Livin的表达与凋亡细胞数呈显著负相关(r=-0.415,P<0.05)。结论 Livin蛋白在喉鳞癌的表达与临床病理学特征密切相关,该蛋白的检测有助于诊断喉癌和评估喉癌患者的恶性程度及预后。

凋亡抑制基因Livin在喉鳞状细胞癌中的表达及与预后的关系

目的分析Livin基因在喉鳞状细胞癌组织中的表达情况,并探究其在喉鳞状细胞癌发生、发展及预后中的作用及机制,为喉鳞癌的临床诊断、治疗以及病情预测提供可参考依据。方法选取2013年3月至2016年10月南充市中心医院耳鼻咽喉头颈外科经手术切除的34例喉鳞癌组织、19例癌旁组织和15例正常喉黏膜组织,分别应用SP免疫组化法检查Livin的表达情况,并结合患者的病理结果和随访资料,探究Livin表达与各临床特点以及预后的关系。结果 Livin在喉鳞癌组织中的高表达率为70.59%,在癌旁组织中的高表达率15.79%,在正常喉黏膜组织中无Livin高表达,差异有统计学意义(P<0.05);在喉鳞癌中,Livin高低表达与临床分期、淋巴结是否转移、病理分级以及病程差异有统计学意义(P<0.05),但与患者年龄、性别、肿瘤病灶大小和临床分型差异无统计学意义(P>0.05);经Cox回归性分析发现,Livin阳性表达、病程长、淋巴结转移、病理分级和癌症晚期是影响喉鳞癌患者生存率的独立危险因素。结论 Livin基因的阳性表达在喉鳞癌的发生、发展及预后中发挥着重要作用,可将其作为判断喉鳞癌病情进展及预后的主要指标之一。

RNA干扰Livin基因联合顺铂对喉鳞状细胞癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨RNA干扰Livin基因联合顺铂对喉鳞状细胞癌细胞系Hep-2细胞增殖和凋亡的影响。方法取人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞株1株进行体外培养,取对数生长期细胞随机分为对照组(细胞未经任何处理)、干扰组(细胞经RNA干扰Livin转染)、顺铂组(细胞经6μmol/L顺铂处理)、联合组(细胞经RNA干扰Livin转染+6μmol/L顺铂处理),每组设置6个复孔。处理48 h后,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测各组细胞增殖抑制率,采用流式细胞仪双染法检测细胞凋亡率和细胞周期分布,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达。结果联合组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率均高于干扰组、顺铂组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合组G;/G;期细胞占比均高于干扰组、顺铂组,S期和G;/M期细胞占比均低于干扰组、顺铂组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合组Bcl-2 mRNA水平低于干扰组、顺铂组,Bax mRNA水平高于干扰组、顺铂组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论RNA干扰Livin基因联合顺铂处理喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,可抑制细胞增殖并促进细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因以及改变细胞分裂周期有关。

靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1反义核酸抑制消化系肿瘤细胞增殖效果的差异

目的比较靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1反义核酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASO)对消化系统肿瘤细胞(肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞)的增殖抑制作用和致凋亡作用的差异。方法分别合成靶向Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1的反义核酸和随机序列反义核酸(randomolig odeoxynucleotide,RODN),采用脂质体Li-pofectamineTM 2000转染细胞,WST法检测相同浓度的5种ASOs对肝癌HepG2细胞、胃癌MGC-803细胞、结肠癌Lovo细胞的增殖抑制作用和致凋亡作用。结果 Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1等5种ASOs中,不论是对细胞增殖抑制还是致凋亡作用,均以Bcl-xlASO、Mcl-1ASO的作用效果较好。结论在Bcl-2、Bcl-xl、Mcl-1、Bcl-w、A1等5种ASOs中,Bcl-xlASO、Mcl-1ASO可明显抑制消化系肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。

bcl-2反义寡核苷酸对肾癌细胞Bcl-2蛋白表达抑制及诱导凋亡作用

目的:评价bcl-2反义寡核苷酸对肾细胞癌细胞Bcl-2蛋白表达抑制及诱导凋亡作用。方法:合成与已知人类基因无同源性的bcl-2反义寡核苷酸(AS1与翻译起始端互补,AS2与编码区互补),以阳离子脂质体Lipofectin为转染载体,MTS比色实验测定细胞活率,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定bcl-2 mRNA的表达,Western杂交法测定Bcl-2蛋白表达,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术测定凋亡细胞。结果:所测定的5个肾癌细胞株均有稳定的。bcl-2 mRNA表达;转染的反义寡核苷酸对ACHN细胞Bcl-2蛋白的表达有明显抑制作用,而正义寡核苷酸无明显影响,AS2的抑制作用大于AS1;反义寡核苷酸可诱导ACHN细胞的凋亡,AS1和AS2的诱导率分别为32.1％和43.2％。结论:bcl-2反义寡核苷酸可抑制肾癌细胞Bcl-2蛋白的表达,并进而诱导细胞的调亡。

反义ATM在体外对喉鳞状细胞癌ATM蛋白表达影响的研究

目的:用ATM反义多核苷酸作用于喉鳞状细胞癌以研究其对ATM蛋白表达的影响,进而推测其对放射治疗的敏感性。方法:用Western blot对AS、Sen、Misl、ipo与hep-2组的ATM蛋白进行分析。结果:AS、Sen、Misl、ipo与hep-2组(对照组)的ATM蛋白相对表达量以AS-lipo组最低,为48.14±5.53%,AS组与Sen、Misl、ipo、hep-2组比较有显著性差异。结论:ATM反义多核苷酸降低了喉鳞状细胞癌细胞中ATM蛋白的表达,其可能使喉鳞状细胞癌细胞对放射治疗的敏感性增强。

反义ATM多核苷酸对喉鳞状细胞癌ATM mRNA、蛋白影响的体外研究

目的:设计反义ATM多核苷酸作用于喉鳞状细胞癌以探讨其对ATM mRNA、蛋白表达的影响。方法:用Westernblot和real-time quantitative PCR对AS-ODNs、Sen-ODNs、Mis-ODNs、lipo与hep-2组的ATM蛋白和ATM mRNA进行分析。结果:AS-ODNs、Sen-ODNs、Mis-ODNs、lipo与hep-2组(对照组)的ATM蛋白及ATM mRNA相对表达量以AS-lipo组最低,分别为(48.14±5.53)%和(11.03±2.51)%,AS组与Sen、Mis、lipo、hep-2组比较有差异(P<0.05)。结论:反义ATM多核苷酸降低了喉鳞状细胞癌细胞中ATM mRNA、蛋白的表达,其可能使喉鳞状细胞癌细胞对放射治疗的敏感性增强。

人端粒酶RNA反义寡核苷酸诱导食管癌EC9706细胞凋亡观察

目的:观察人端粒酶RNA功能区的硫代修饰性反义寡核苷酸(ASODN)对食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用。方法:应用20μmol/LASODN1次/d、连续7d转染EC9706细胞,分别于转染前及转染后第1d、3d、5d、7d采用端粒酶活性的定性及定量检测技术测定ASODN对EC9706细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用,采用细胞DNA凋亡条带检测、TUNEL检测及吖啶橙荧光染色法观察细胞的凋亡情况。结果:与转染前比较,ASODN转染后各时点EC9706细胞端粒酶活性降低,凋亡细胞增多(P<0.05或0.01)。转染后第3d开始出现DNA凋亡条带,第7d出现从靠近加样孔处向远端延伸的相差180～200bp的十几条DNA凋亡条带。结论:ASODN可通过抑制EC9706细胞端粒酶活性诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制食管癌细胞的增殖。

联合应用反义bcl-2和反义IL-6寡核苷酸对小细胞肺癌细胞株NCI-H446的作用

目的 观察联合应用反义 bcl- 2硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (bcl- 2 AS- PS- ODN)和白细胞介素 6 (IL - 6 )AS- PS- ODN对小细胞肺癌细胞株 NCI- H4 4 6增殖和活力的影响。 方法 以 bcl- 2 AS- PS- ODN和 IL- 6 AS- PS-ODN单独及联合作用于 NCI- H4 4 6 ,经细胞克隆形成实验、细胞增殖实验观察其对细胞增殖和活力的影响 ,经细胞凋亡线粒体流式检测试剂盒检测细胞凋亡的变化 ,经半定量 RT- PCR检测 IL - 6 m RNA表达水平的变化。 结果 细胞增殖曲线、细胞克隆形成实验及细胞凋亡实验显示联合用药能更强地抑制细胞活力 ,促进细胞凋亡。 bcl- 2 AS-PS- ODN单独作用时 ,IL- 6 m RNA表达上升 74 .3% ,IL- 6 AS- PS- ODN单独作用以及与 bcl- 2 AS- PS- ODN联合作用时 ,IL- 6分别下调 6 7.7%和 5 2 .4 %。 结论 联合用药较单独用药对 NCI- H4 4

人端粒酶RNA反义寡核苷酸靶向治疗对裸鼠食管癌移植瘤的作用

目的:观察人端粒酶RNA(hTR)硫代修饰性反义寡核苷酸(ASODN)对裸鼠食管癌移植瘤的治疗作用。方法:10只裸鼠随机等分为ASODN组和对照组。2组裸鼠均给予EC9706细胞悬液皮下注射,当裸鼠食管癌移植瘤长至50mm3时,ASODN组进行每24h1次、连续7d的ASODN治疗,对照组给予PBS。分别于治疗后4d、8d测量2组肿瘤体积,第8d取裸鼠肿瘤组织常规病理切片观察形态学改变,TUNEL染色观察癌细胞凋亡情况。结果:治疗后第4d,ASODN组及对照组食管癌移植瘤体积(V/mm3)分别为55.8±12.0和98.5±18.2(P<0.01),第8d分别为64.8±21.6和173.0±21.2(P<0.01)。TUNEL染色显示,ASODN组肿瘤组织中可见大量呈片状分布的凋亡细胞,对照组仅见少量散在的凋亡细胞。对照组肿瘤细胞异型性较ASODN组明显。结论:hTR反义寡核苷酸可有效抑制裸鼠食管癌移植瘤的生长及恶性表型的产生。

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对子宫内膜癌细胞株的影响

目的观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对癌细子宫内膜癌细胞株的作用。方法用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与子宫内膜细胞株共同温育一定时间后,观察细胞形态变化,检测细胞Bcl-2蛋白表达情况,测定端粒酶活性。结果端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导子宫内膜癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,在形态学上表现为出现细胞质浓缩,变圆,核染色不均匀,核物质边聚成新月形或块壮;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,反义寡核苷酸在细胞进入DNA合成期前引起DNA损伤,使细胞停滞在G0～G1期,并诱导细胞凋亡。结论端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制端粒酶活性,诱导子宫内膜癌细胞凋亡,从而抑制子宫内膜癌的增殖。

HOTAIR与miR-613表达对食管鳞癌细胞增殖和凋亡影响

目的探讨HOX转录反义RNA(HOTAIR)和微小RNA(miR)-613在食管鳞癌细胞中的调控关系及其对细胞增殖与细胞凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测食管鳞癌细胞中HOTAIR和miR-613的表达情况,双荧光素酶报告基因实验检测HOTAIR和miR-613靶向关系,CCK-8法和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡。结果与其他食管鳞癌细胞相比,人食管鳞癌细胞株Eca-109细胞中HOTAIR表达最高而且miR-613表达水平最低(F=48.56、56.28,P<0.05)。HOTAIR可靶向调控miR-613的表达。下调HOTAIR的表达明显抑制了Eca-109细胞增殖,提高了细胞凋亡和miR-613表达水平(F=205.28~396.53,P<0.05);抑制miR-613表达后,Eca-109细胞增殖能力明显增强,而细胞凋亡能力明显减弱(F=51.04、511.37,P<0.05)。结论下调HOTAIR可通过调控miR-613表达抑制食管鳞癌Eca-109细胞增殖并促进其凋亡。