流式细胞术检测结核分枝杆菌死活菌混合样本中活菌比例的研究

目的探讨利用基于荧光素二乙酸酯(FDA)的流式细胞术检测结核分枝杆菌(MTB)混合菌液中活菌比例的性能,为应用流式细胞术定量检测与分析MTB异质性耐药方法的创建提供实验依据。方法将10株1麦氏浊度MTB纯培养活菌悬液和其相应的1麦氏浊度85℃加热30 min处死的MTB菌液按一定比例混合得到MTB死活菌混合菌液(其中活菌比例分别为100%、75%、50%、25%和0%),应用FDA分别对其进行染色后,流式细胞仪检测其平均荧光强度(MFI),求其与对应100%活菌样本MFI值的比值来模拟MTB异质性耐药检验中的FDA敏感指数,双变量直线回归分析得到敏感指数与实际活菌比例之间的直线回归方程,并利用该方程计算另外10组死活菌混合菌液样本中MTB活菌比例。结果(1)死菌与活菌MTB样本经FDA染色后MFI值比较差异有统计学意义(P<0.05),该方法用于区分死菌与活菌的界值为1834,用该界值鉴定其余20个死、活未知的MTB样本,其检测的灵敏度为100%、特异度为100%。FDA染色能够明确鉴别MTB的死、活。(2)10组已知活菌比例的MTB死活菌混合菌液样本经FDA染色后各比例之间MFI值比较差异有统计学意义(P<0.05),敏感指数(Y)与混合样本中活菌比例(X)之间的直线回归方程:Ŷ=0.986X+0.016,该直线回归方程差异有统计学意义(P=0.000)。(3)应用这种染色方法对其余50个MTB死活菌混合菌液样本进行检测,计算活菌比例与实际活菌比例之间差异无统计学意义(P>0.05),基于FDA染色方法的流式细胞术可用于MTB死活菌混合菌液样本中活菌比例的检测。结论通过基于FDA染色的流式细胞术具有准确检测MTB混合菌液样本中活菌比例的潜力,该方法在MTB异质性耐药检测中将具有广阔的应用前景。