LncRNA NEAT1调控miR-331表达对鼻咽癌细胞辐射敏感性的影响

目的探讨长链非编码(Lnc)RNA NEAT1通过靶向调控miR-331对鼻咽癌细胞辐射敏感性的影响。方法选取2018年1月至2019年1月手术切除鼻咽癌组织及对应的癌旁组织的患者48例样本,qRT-PCR检测Lnc RNA NEAT1在鼻咽癌及相应的癌旁组织、不同的鼻咽癌细胞系中的表达情况;构建Lnc RNA NEAT1沉默细胞系SUNE-1-siNEAT1及阴性对照SUNE-1-siNC,并以SUNE-1作为空白对照;电离辐射后,采用MTT实验、Transwell、免疫荧光标记检测Lnc RNA NEAT1对SUNE-1细胞辐射敏感性、侵袭能力及DNA损伤修复的影响;使用生物信息学网站starBase预测NEAT1可互补结合的微小RNA(microRNA,miRNA),再经双荧光基因报告验证Lnc RNA NEAT1与miR-331的靶向关系。结果qRT-PCR结果显示,鼻咽癌组织中Lnc RNA NEAT1的表达水平高于癌旁正常组织,且差异有统计学意义(P<0.05),Lnc RNA NEAT1在SUNE-1细胞中表达量最高,与其他细胞株相比差异均具有统计学意义(P<0.05);成功构建Lnc RNA NEAT1沉默细胞系后,与SUNE-1组和SUNE-1-siNC组相比,SUNE-1-siNEAT1组细胞辐射后OD492nm值明显下降,细胞侵袭数量明显减少,γH2AX荧光强度明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05),SUNE-1组与SUNE-1-siNC组相比,差异无统计学意义(P>0.05);starBase网站预测结果显示,Lnc RNA NEAT1与miR-331存在互补结合位点,双荧光基因报告结果显示Lnc RNA NEAT1与miR-331可靶向结合。qRT-PCR证实LncRNA NEAT1负向调控miR-331的表达。结论lnc RNA NEAT1在鼻咽癌中呈高表达,沉默Lnc RNA NEAT1表达可能通过上调miR-331水平抑制鼻咽癌细胞增殖、侵袭能力,增加鼻咽癌细胞辐射敏感性。

肺结核患者外周血单个核细胞中lncRNA NEAT1的检测及临床意义

目的探讨肺结核患者外周血单个核细胞(PBMC)中长链非编码RNA(lncRNA)核富含丰富的转录本1(NEAT1)的表达及其临床意义。方法采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测65例肺结核病患者(结核组)及30例健康体检者(健康对照组)PBMC中lncRNA NEAT1的表达量,分析其与结核病发生发展以及转归的相关性。结果 RT-PCR检测结果显示lncRNA NEAT1在肺结核患者PBMC中的相对表达水平是健康对照组的4.90±0.72倍,差异有统计学意义(P<0.01)。LncRNA NEAT1在初治和复治病例中表达差异无统计学意义(P>0.05);lncRNA NEAT1在肺部有无空洞及空洞数量分组之间表达差异有统计学意义(P<0.05),即lncRNA NEAT1随空洞累及范围的增加而升高。肺结核患者PBMC中lncRNA NEAT1表达量随着治疗时间逐渐下降,恢复至正常水平。结论肺结核患者PBMC中lncRNA NEAT1表达升高,且与肺结核的发展和转归有关,监测PBMC中lncRNA NEAT1表达或可以评估结核病患者预后情况。

化瘀祛痰方调控长链非编码RNA-NEAT1/miR-27b对高脂血症大鼠胆固醇代谢的影响及机制研究

目的探讨化瘀祛痰方通过影响长链非编码RNA-NEAT1(Lnc-NEAT1)/miRNA-27b(miR-27b)调节高脂血症大鼠胆固醇代谢防治血脂异常机制研究。方法使用32只SPF级SD大鼠,将其随机分为4组,正常组、模型组、化瘀祛痰方组以及辛伐他汀组,其中每组8只。模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组大鼠采用喂饲高脂饲料的方法建立高脂血症模型。造模8周后,灌胃给药。化瘀祛痰方组给予化瘀祛痰方进行灌胃,辛伐他汀组给予辛伐他汀进行灌胃。给予正常组和模型组相应体积的生理盐水进行灌胃。4周后通过全自动生物化学分析仪检测血清甘油三酯(triglyceride, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)的含量;采用HE染色观察肝脏组织病理变化,RT-qPCR法检测Lnc-NEAT1、miR-27b基因表达。RT-qPCR法与Western Blot法分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、肝X受体(LXR)、腺苷三磷酸结合盒转运体G5(ABCG5)、腺苷三磷酸结合盒转运体G8(ABCG8)基因及蛋白表达。结果相较于正常组,模型组大鼠TC、TG和LDL-C相关水平显著升高,HDL-C水平显著降低,肝细胞体积变大,脂肪空泡明显。大鼠肝脏Lnc-NEAT1基因表达显著降低,miR-27b基因表达显著升高(P<0.01)。PPARγ、LXR、ABCG5、ABCG8基因及蛋白表达均显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型组相比,经化瘀祛痰方及辛伐他汀干预的高脂血症大鼠血清血脂异常得以改善,TC、TG和LDL-C水平显著降低,HDL-C水平显著升高,肝细胞脂肪空泡明显减少,化瘀祛痰方组大鼠肝脏miR-27b表达显著降低(P<0.01),Lnc-NEAT1表达显著升高(P<0.01)。化瘀祛痰方组和辛伐他汀组大鼠肝脏PPARγ,LXR,ABCG5,ABCG8基因及蛋白水平呈上升趋势,其中,化瘀祛痰方组大鼠肝脏LXR基因及蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01)。结论化瘀祛痰方可能通过影响Lnc-NEAT1/miR-27b/PPARγ纠正高脂血症大鼠胆固醇代谢异常,进而起到防治血脂异常的作用。

长链非编码RNA NEAT1调控miR-486/FOXO1轴参与椎间盘髓核细胞退变的机制研究

目的 :明确长链非编码RNA核富集转录本1(lncRNA NEAT1)、miR-486、FOXO1之间的相互关系,探讨三者在椎间盘退变(intervertebral disc degeneration,IDD)组织中的表达及相关性,阐明NEAT1通过调控miR-486/FOXO1轴参与IDD进展的具体机制。方法 :利用双荧光素酶报告基因、RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)试验等明确NEAT1、miR-486与叉头框蛋白O1(forkhead box protein O1,FOXO1)的生物学关系;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)、免疫印迹(Western blot)检测15例对照和30例IDD髓核组织中NEAT1、miR-486与FOXO1的表达,统计其与Pfirrmann分级的关系;采用白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导法构建髓核细胞退变模型,NEAT1小干扰RNA(NEAT1 small interfering RNA,si-NEAT1)和过表达质粒转染髓核细胞构建细胞沉默或过表达模型;细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)和流式细胞术检测髓核细胞增殖和凋亡;RT-qPCR检测细胞NEAT1与miR-486表达;Western blot检测FOXO1及细胞外基质(extracellular matrix,ECM)中聚集蛋白聚糖(aggrecan)、二型胶原(collagenⅡ)、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase,MMP-13)和含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样基质金属蛋白酶4 (a disintegrin-like and metalloproteinase with thrombospondin type l motifs 4,ADAMTS4)的表达。结果:NEAT1可通过碱基互补配对方式海绵吸附miR-486;miR-486靶向FOXO1的3′-非编码区(3′-UTR)抑制FOXO1蛋白表达。在IDD髓核组织中,NEAT1与FOXO1表达上调,与Pfirrmann分级呈显著正相关(P<0.001);而miR-486表达下调,与Pfirrmann分级呈显著负相关(P<0.001)。分子细胞学实验证实,IL-1β诱导髓核细胞退变后,NEAT1的过表达进一步促进了髓核细胞凋亡(P<0.01),加重了Aggrecan和CollagenⅡ的表达抑制(P<0.01),增强了MMP-13和ADAMTS4的表达(P<0.01);相比之下,NEAT1的沉默则逆转了髓核细胞凋亡(P<0.01),有效恢复了Aggrecan和CollagenⅡ表达(P<0.01),同时显著降低了MMP-13和ADAMTS4的表达(P<0.01)。结论:NEAT1调控miR-486/FOXO1分子轴并促进髓核细胞凋亡和ECM降解进而参与IDD病理机制过程。