胃癌外泌体lncRNA CASC11调控TLR4/NF-κB通路诱导M2型巨噬细胞极化

目的:探究胃癌外泌体lncRNA CASC11对M2型巨噬细胞极化的影响及机制。方法:人单核细胞THP-1加入PMA诱导其分化为M0型巨噬细胞,M0型巨噬细胞和胃癌细胞MGC-803中转染空白质粒(Vector组)和lncRNA CASC11过表达质粒(lncRNA CASC11组),qRT-PCR转染后巨噬细胞中i NOS、CD16、CD206、Arg-1、Ym1、TNF-α、IL-1β、TGF-β和IL-10 mRNA的表达,流式细胞术检测CD206^(+)CD14^(+)细胞比例。提取人胃粘膜细胞GES-1、人胃癌细胞株MGC-803、SGC7901、MKN45以及Vector和lncRNA CASC11组MGC803细胞所分泌的外泌体(GES-1 exo、MGC-803 exo、MKN45 exo、SGC7901 exo、Vector exo、CASC11exo),qRT-PCR检测lncRNA CASC11在GES-1、MGC-803、SGC7901、MKN45细胞、转染后的MGC-803细胞及其外泌体中的表达。将PBS、GES-1 exo、MGC-803 exo、MKN45 exo、SGC7901 exo、Vector exo、CASC11exo与M0型巨噬细胞共孵育后,qRT-PCR检测细胞中lncRNA CASC11、i NOS、CD16、CD206、Arg-1、Ym1、TNF-α、IL-1β、TGF-β和IL-10的表达,CD206^(+)CD14^(+)细胞比例,Western blot检测TLR4表达以及NF-κB磷酸化水平。结果:lncRNA CASC11在胃癌细胞及其外泌体中均高表达。相比于Vector组,lncRNA CASC11组巨噬细胞中i NOS、CD16、TNF-α和IL-1β表达显著下调,CD206、Arg-1、Ym1、TGF-β和IL-10表达显著上调,CD206^(+)CD14^(+)细胞比例显著增加。相比于PBS组,MGC-803 exo、MKN45 exo和SGC7901 exo组巨噬细胞中i NOS、CD16、TNF-α和IL-1β表达显著下调,lncRNA CASC11、CD206、Arg-1、Ym1、TGF-β和IL-10表达显著上调,CD206^(+)CD14^(+)细胞比例显著增加,TLR4表达以及NF-κB磷酸化水平均显著减少。相比于Vector exo,CASC11 exo中lncRNA CASC11表达显著增加,相比于Vector exo组细胞,CASC11 exo组巨噬细胞中i NOS、CD16、TNF-α和IL-1β表达显著下调,lncRNA CASC11、CD206、Arg-1、Ym1、TGF-β和IL-10表达显著上调,CD206^(+)CD14^(+)细胞比例显著增加,TLR4表达以及NF-κB磷酸化水平均显著减少。结论:胃癌外泌体lncRNA CASC11抑制TLR4/NF-κB信号通路而诱导M2型巨噬细胞极化。

lncRNA CASC11靶向调控miR-146a-3p对结肠癌细胞增殖、侵袭的影响

目的探究长链非编码RNA癌症易感候选基因11(lncRNA CASC11)通过靶向调控miR-146a-3p对结肠癌细胞增殖及侵袭的影响及其可能的作用机制。方法通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测人结肠黏膜上皮细胞、人结肠癌组织源细胞及3种不同的人结肠癌细胞系HCT116、SW620及SW480中lncRNA CASC11、miR-146a-3p的表达量,同时体外培养SW620细胞系并分为对照组(未处理组)、lncRNA CASC11 siRNA组、lncRNA CASC11 siRNA阴性对照组及lncRNA CASC11 siRNA+miR-146a-3p inhibitor共转染组,分别予以相应处理后,用MTT法及EdU染色检测各组SW620细胞增殖活性;Transwell小室侵袭实验检测各组SW620细胞侵袭能力;免疫荧光染色(ICF)检测各组SW620细胞凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达情况;qRT-PCR及蛋白免疫印迹检测各组SW620细胞miR-146a-3p及上皮间质转化标志蛋白Vimentin、E-cadherin mRNA及蛋白表达水平;双荧光素酶报告基因实验检测SW620细胞中lncRNA CASC11对miR-146a-3p的靶向调控作用;qRT-PCR和蛋白免疫印迹法检测SW620细胞中lncRNA CASC11对c-Met表达水平的调控作用。结果与人结肠黏膜上皮细胞相比,HCT116、SW480、SW620中lncRNA CASC11表达明显升高(均P<0.05),而miR-146a-3p表达明显降低(均P<0.05)。与对照组相比,lncRNA CASC11 siRNA组细胞活性、EdU阳性率、侵袭细胞数及Vimentin mRNA表达降低(均P<0.05),细胞Bax/Bcl-2比值、miR-146a-3p及E-cadherin mRNA表达均升高(均P<0.05);lncRNA CASC11 siRNA阴性对照组与对照组相比各检测结果无明显差异(均P>0.05);与lncRNA CASC11 siRNA组相比,共转染组细胞活力、EdU阳性率、侵袭细胞数、Vimentin mRNA表达升高(均P<0.05),细胞Bax/Bcl-2比值、miR-146a-3p及E-cadherin mRNA表达均降低(均P<0.05)。在SW620细胞中,lncRNA CASC11可靶向下调miR-146a-3p的表达,上调下游c-Met基因的表达。结论lncRNA CASC11通过靶向下调miR-146a-3p介导结肠癌细胞的生物学行为,敲低lncRNA CASC11基因可促进miR-146a-3p表达,抑制结肠癌细胞增殖及侵袭。

LncRNA CASC11在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨lncRNA CASC11在非小细胞肺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法收集2016年2月-2018年2月在辽宁中置盛京老年病医院进行手术治疗的69例非小细胞肺癌患者的癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR检测lncRNA CASC11的表达,并分析lncRNA CASC11表达水平与临床特征的相关性。利用GEPIA网站分析来自TCGA和GTEx项目的518例非小细胞肺癌组织以及207例对照样本组织中lncRNA CASC11的表达及其与预后的关系。结果实时荧光定量PCR检测结果显示,非小细胞肺癌组织中lncRNA CASC11的表达水平高于癌旁组织[(0.090±0.005)vs(0.177±0.011),t=0.003,P<0.001];lncRNA CASC11表达水平与肿瘤大小、TNM分期有关(P<0.05)。GEPIA网站分析结果显示,lncRNA CASC11在非小细胞肺癌组织中的表达水平高于正常组织[(0.181±0.021)vs(0.072±0.003),P<0.05];lncRNA CASC11的表达水平越高,患者的预后越差,但差异无统计学意义(Logrank P=0.19,HR=1.4,HR P=0.19)。结论lncRNA CASC11在非小细胞肺癌组织中呈高表达,可能参与了非小细胞肺癌的进展。

LncRNA CASC11在甲基丙烯酸环氧丙酯诱导16HBE细胞恶性转化过程中的作用

目的研究甲基丙烯酸环氧丙酯(glycidyl methacrylate,GMA)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)恶性转化过程中趋势性上调差异表达LncRNA CASC11的作用。方法低浓度(8μg/mL)GMA重复染毒16HBE细胞后,收集染毒后第10代(P10)、20代(P20)和30代(P30)细胞及其同期二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)对照组细胞,采用高通量LncRNA芯片筛选上述不同时期相关的差异表达LncRNAs,应用时间序列分析和生物信息学工具RPISeq筛选并预测特定LncRNA的可能作用靶点,实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法分别检测特定LncRNA相对表达量及其靶蛋白含量。结果GMA诱导16HBE细胞恶性转化过程中特定差异表达LncRNA CASC11呈趋势性上调,与同期对照组细胞比较,在染毒后P10、P20、P30代细胞中分别下调1.64倍、上调2.01倍和上调2.66倍。与同期DMSO对照组相比,在染毒后P10、P20、P30代细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶1(cyclin-dependent kinase 1,CDK1)及细胞周期蛋白B1、细胞周期蛋白B2表达水平均降低,与芯片结果一致。结论GMA诱导16HBE细胞恶性转化过程中相关差异表达LncRNA CASC11呈趋势性上调,其可能是通过抑制CDK1阻断或延迟细胞周期进程。

lncRNA CASC11在膀胱癌患者中的表达及其临床意义

目的探究膀胱癌(BC)患者血清长链非编码RNA (lncRNA)肿瘤易感候选基因11(lncRNA CASC11)的表达水平及其临床意义。方法选取2016年1月至2019年3月在复旦大学附属徐汇医院收治的98例BC患者(BC组)和95例良性泌尿系统疾病患者(良性疾病组)的临床资料, 并选取同期98例健康体检者设为对照组。以BC患者的血清lncRNA CASC11平均表达水平为界, 分为lncRNA CASC11高表达组(50例)和lncRNA CASC11低表达组(48例)。比较各组的血清lncRNA CASC11、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、糖类抗原125(CA125)水平;比较不同临床特征的BC患者的血清lncRNA CASC11表达水平;分析血清lncRNA CASC11、CYFRA 21-1、CA125对BC的诊断价值;分析BC患者的血清lncRNA CASC11表达水平与CYFRA 21-1、CA125的相关性;分析血清lncRNA CASC11表达水平与BC患者预后的关系。结果与对照组比较, 良性疾病组、BC组患者的血清lncRNA CASC11、CYFRA 21-1、CA125水平均升高(均P<0.001);与良性疾病组比较, BC组患者的血清lncRNA CASC11、CYFRA 21-1、CA125水平均升高(均P<0.05)。Ⅲ~Ⅳ期的BC患者血清lncRNA CASC11表达水平均高于Ⅰ~Ⅱ期的BC患者(均P<0.001), 发生淋巴结转移的BC患者血清lncRNA CASC11表达水平高于无淋巴结转移的BC患者(P<0.001);血清lncRNA CASC11、CYFRA 21-1诊断BC的曲线下面积(AUC)分别为0.875、0.848, 高于CA125(AUC=0.675), lncRNA CASC11、CYFRA 21-1联合诊断BC的AUC为0.941, 高于二者单独诊断, 且联合诊断BC的灵敏度为91.8%, 特异度为86.3%。BC患者的血清lncRNA CASC11表达水平与CYFRA 21-1、CA125均呈正相关(均P<0.05);经Kaplan-Meier生存分析结果显示, lncRNA CASC11低表达组的平均生存期为34.63个月(95%CI:33.37~35.88), lncRNA CASC11高表达组的平均生存期为30.12个月(95%CI:27.57~32.67), 差异有统计学意义(P<0.05);log-rank检验结果显示, lncRNA CASC11低表达组的累积生存率高于lncRNA CASC11高表达组, 差异有统计学意义(χ^(2)=9.136, P=0.003)。结论 lncRNA CASC11在BC患者的血清中表达上调, 检测血清lncRNA CASC11表达水平可有助于临床诊断、评估BC患者的预后。