LncRNA CASC7/miR-21/Wnt2b轴介导糖尿病肾病小鼠肾纤维化的机制研究

目的 探究miR-21靶向调控肾纤维化的发生发展机制,为临床糖尿病肾病(DN)的治疗提供新的思路。方法 24只C57BLKS/J-Leprdb/db小鼠随机分为实验1组、实验2组与对照组,每组8只。实验1组进行单侧肾切除术,术后2月,实验1组和实验2组小鼠采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立糖尿病肾病动物模型。HE染色法观察肾组织病理学改变,Masson染色法观察肾组织纤维化状况,qRT-PCR法检测各组肾组织中LncRNA CASC7、miR-21、Wnt2b、SMAD7表达水平,western blot法检测Wnt2b和SMAD7的蛋白表达水平,荧光素酶报告系统鉴定LncRNA CASC7和miR-21靶向关系。Pearson相关性分析肾组织中LncRNA CASC7和miR-21的表达水平与糖尿病肾病肾纤维化之间的关系。结果染色试验中观察到实验1组与实验2组小鼠肾小球肥大,系膜细胞及系膜基质增生,肾小管上皮细胞空泡变性。肾组织存在炎性细胞浸润、肾小管萎缩与间质纤维化。肾组织纤维化评分:实验1组(2.87±0.66)分>实验2组(2.17±0.62)分>对照组(0.57±0.14)分,差异有统计学意义(P>0.05);LncRNA CASC7、miR-21、Wnt2b、SMAD7表达水平:实验1组>实验2组>对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,实验1组和实验2组Wnt2b和SMAD7蛋白表达均升高,且实验1组高于实验2组,差异有统计学意义(P<0.05);荧光素酶报告表明LncRNA CASC7可与miR-21靶向结合。Pearson相关性分析结果显示,肾组织中LncRNA CASC7和miR-21的表达水平与糖尿病肾病肾纤维化呈正相关(r=0.412、0.371,P均<0.05)。结论 LncRNA CASC7可通过调控下游miR-21改变Wnt2b、SMAD7的表达,从而参与调控Wnt2b、SMAD通路,并介导DN肾纤维化的发展。

LncRNA CASC7/miR-98-5p/SIRT3轴调控慢性阻塞性肺疾病大鼠气道炎症反应和平滑肌细胞变化

目的:探讨LncRNA CASC7/miR-98-5p/SIRT3轴对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道炎症反应和支气管平滑肌细胞(BSMCs)的影响。方法:收集临床标本用于检测CASC7、miR-98-5p、SIRT3的表达。双荧光素酶报告实验用于验证CASC7/miR-98-5p、miR-98-5p/SIRT3之间的靶向关系。建立COPD大鼠模型,ELISA检测大鼠血清中炎症相关因子表达。对BSMCs进行分组转染,使用ELISA、CCK-8、流式细胞术检测细胞炎症因子的表达、增殖能力、凋亡情况。Western blot检测PI3K信号通路相关因子的表达。结果:相对于正常样本,CASC7、SIRT3在COPD中低表达,miR-98-5p高表达,且CASC7、SIRT3与miR-98-5p的表达均呈负相关(均P<0.05)。CASC7能够调控miR-98-5p/SIRT3表达并影响PI3K信号通路变化。过表达CASC7或miR-98-5p抑制剂可阻滞炎症因子分泌和BSMCs增殖,促进BSMCs凋亡,但这种效果被SIRT3敲减部分挽救(均P<0.05)。结论:CASC7能够通过调控miR-98-5p/SIRT3轴进而减少气道炎症因子分泌,抑制BSMCs的增殖,并诱导其凋亡,CASC7在COPD的进展中扮演重要角色。

LncRNA CASC7与miR-27b-3p在肺结核外周血单核细胞中的表达及意义

目的探讨长链非编码RNA CASC7(LncRNA CASC7)与微小RNA-27b-3p(miR-27b-3p)在肺结核外周血单核细胞中的表达及意义。方法结核菌H37Rv、H37Ra分别感染单核细胞,采用qRT-PCR法检测CASC7、miR-27b-3p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测CASC7与miR-27b-3p的靶向关系;选取2018年3月至2019年10月本院收治的肺结核患者120例为研究组,根据活动性肺结核诊断标准将肺结核患者分为非活动性肺结核组60例、活动性肺结核组60例,同时选取同期健康体检者60例为对照组;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测CASC7、miR-27b-3p的表达量;ROC分析CASC7与miR-27b-3p对肺结核的诊断价值。结果与感染前比较,H37Rv、H37Ra感染后单核细胞中CASC7的表达水平显著降低(P<0.05),miR-27b-3p的表达水平显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实CASC7可靶向结合miR-27b-3p;与对照组比较,研究组患者外周血单核细胞中CASC7的表达水平显著降低(P<0.05),且活动性肺结核组显著低于非活动性肺结核组(P<0.05),miR-27b-3p的表达水平显著升高(P<0.05),且活动性肺结核组显著高于非活动性肺结核组(P<0.05);ROC分析显示CASC7的敏感度为57.50%,特异度为91.67%,AUC面积为0.781;miR-27b-3p的敏感度为57.50%,特异度为81.67%,AUC面积为0.665;联合检测的敏感度为96.67%,特异度为60.00%,AUC面积为0.802。结论肺结核外周血单核细胞与结核菌感染单核细胞中CASC7表达下调,miR-27b-3p表达上调,对肺结核辅助诊断及靶向治疗均具有一定参考价值。