LncRNA CBR3-AS1调节miR-448/TFAM轴对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)CBR3-AS1对结直肠癌(CRC)细胞恶性生物学行为的影响及其机制。方法 收集济南市第五人民医院2021年1月至2022年6月获取的40对CRC组织和邻近癌旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人CRC组织、癌旁组织和CRC细胞系、正常结直肠上皮细胞中LncRNA CBR3-AS1、微小RNA-448(miR-448)及线粒体转录因子A(TFAM)mRNA表达。根据不同CRC细胞系中LncRNA CBR3-AS1的表达水平筛选后续实验使用的细胞系。验证miR-448与LncRNA CBR3-AS1、TFAM的靶向关系。在目标细胞中转染靶向LncRNA CBR3-AS1的小干扰RNA(si-CBR3-AS1)、miR-448抑制物(miR-448 inhibitor),采用qRT-PCR、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LncRNA CBR3-AS1、miR-448及TFAM mRNA和蛋白表达;采用CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合实验和Transwell实验分别检测细胞活力、凋亡率、迁移及侵袭能力。结果 CRC组织和细胞中LncRNA CBR3-AS1及TFAM mRNA呈高表达,miR-448呈低表达,且HCT116细胞中LncRNA CBR3-AS1的表达最高,故选择HCT116细胞进行后续靶向验证和转染实验。经验证,HCT116细胞中miR-448与LncRNA CBR3-AS1、TFAM均存在靶向关系。转染si-CBR3-AS1可降低HCT116细胞中LncRNA CBR3-AS1及TFAM mRNA和蛋白表达水平,同时降低细胞活力、划痕愈合率、迁移细胞数、侵袭细胞数,升高miR-448表达水平及凋亡率;转染si-CBR3-AS1基础上转染miR-448 inhibitor可减弱干扰LncRNA CBR3-AS1表达对HCT116细胞的影响。结论 干扰LncRNA CBR3-AS1可抑制CRC细胞的恶性生物学行为,其机制可能与靶向miR-448/TFAM轴有关。

LncRNA CBR3-AS1在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义

目的检测多发性骨髓瘤患者血清中长链非编码羰基还原酶3反义RNA1(LncRNA CBR3-AS1)的表达水平,并分析其临床意义。方法该研究纳入石家庄市人民医院2012年1月至2020年3月期间初诊的100例多发性骨髓瘤患者作为观察组,另纳入50名65岁以下的健康体检人员作为对照组。用RT-qPCR技术检测LncRNA CBR3-AS1在血清中的相对表达,分析血清LncRNA CBR3-AS1的表达水平与多发性骨髓瘤患者临床参数的关系;Kaplan-Meier(K-M)法生存曲线分析血清LncRNA CBR3-AS1表达水平与多发性骨髓瘤患者预后的关系;单因素、多因素Cox回归评估可能影响多发性骨髓瘤患者预后的因素。结果观察组血清中LncRNA CBR3-AS1的相对表达水平显著高于对照组(P<0.05);多发性骨髓瘤患者血清中LncRNA CBR3-AS1的相对表达水平与临床传统分期系统(D-S)分期、国际分期系统(ISS)分期有关(P<0.05);LncRNA CBR3-AS1低表达组患者的生存率(78.0%)明显高于LncRNACBR3-AS1高表达组的患者(58.0%)(χ2=5.370,P<0.05);单因素分析结果显示,临床D-S分期(HR=2.159;95%CI=1.323~3.524;P<0.05)和ISS分期(HR=1.746;95%CI=1.091~2.794;P<0.05)及血清LncRNA CBR3-AS1的表达(HR=1.975;95%CI=1.210~3.224;P<0.05)影响多发性骨髓瘤患者的预后,多因素COX回归分析结果表明临床D-S分期(HR=2.769;95%CI=1.315~5.832;P<0.05)、ISS分期(HR=2.495;95%CI=1.117~5.573;P<0.05)及血清LncRNA CBR3-AS1的表达(HR=3.214;95%CI=1.206~8.564;P<0.05)均可作为多发性骨髓瘤的独立影响因素。结论CBR3-AS1在多发性骨髓患者中高表达,并且可能与多发性骨髓瘤患者的预后有关。

LncRNA CBR3-AS1调节miR-409-3p/hnRNPA2B1轴对肝细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链RNA CBR3-AS1(LncRNA CBR3-AS1)靶向微小RNA-409-3p(miR-409-3p)/核不均一核糖核蛋白A2B1(hnRNPA2B1)轴对肝细胞癌(HCC)细胞恶性生物学行为的影响。方法qRT-PCR法分析肝癌组织中LncRNA CBR3-AS1和miR-409-3p表达水平。双荧光素酶检测LncRNA CBR3-AS1和miR-409-3p及hnRNPA2B1和miR-409-3p的靶向关系。将Hep G2细胞分为si-NC组、si-CBR3-AS1组、si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组、si-CBR3-AS1+anti-miR-409-3p组、miR-NC组、miR-409-3p mimics组、miR-409-3p mimics+pcDNA组、miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1组。平板克隆检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;Western blot分析法检测细胞核增殖抗原标记物(Ki67)、细胞周期负调控因子(P21)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9蛋白的表达变化。小鼠移植瘤实验检测LncRNA CBR3-AS1对肝癌肿瘤生长及miR-409-3p/hnRNPA2B1的影响。结果与癌旁组织比较,癌组织中LncRNA CBR3-AS1表达显著升高,miR-409-3p表达显著降低(P<0.05)。StarBase预测显示LncRNA CBR3-AS1与miR-409-3p有靶向结合位点。双荧光素酶实验显示,miR-409-3p mimics与LncRNA CBR3-AS1-WT共转染Hep G2细胞相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-CBR3-AS1组LncRNA CBR3-AS1表达明显下降,miR-409-3p表达明显上升(P<0.05);与si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-CBR3-AS1+anti-miR-409-3p组miR-409-3p表达明显下降(P<0.05)。与si-NC组比较,si-CBR3-AS1组Hep G2细胞集落形成数、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-CBR3-AS1+anti-miR-409-3p组Hep G2细胞集落形成数、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著升高,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。生物信息学分析显示miR-409-3p与hnRNPA2B1有靶向结合位点。双荧光素酶实验显示,miR-409-3p mimics与hnRNPA2B1-WT共转染Hep G2细胞相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-409-3p mimics组miR-409-3p表达明显上升,hnRNPA2B1表达明显下降(P<0.05);与miR-409-3p mimics+pcDNA组比较,miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1组hnRNPA2B1表达明显上升(P<0.05),与miR-NC组比较,miR-409-3p mimics组细胞集落形成、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与miR-409-3p mimics+pcDNA组比较,miR-409-3p mimics+hnRNPA2B1组细胞集落形成、划痕愈合率、侵袭数量及Ki67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达水平显著升高,细胞凋亡率及P21、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与si-NC组比较,小鼠注射转染si-CBR3-AS1的细胞后,移植瘤体积生长缓慢。与si-NC组比较,si-CBR3-AS1组移植瘤中LncRNA CBR3-AS1表达水平下降,miR-409-3p表达水平升高(P<0.005)。免疫组化检测结果显示,si-CBR3-AS1组移植瘤中,hnRNPA2B1蛋白表达水平显著降低(P<0.005)。结论LncRNA CBR3-AS1在肝癌中表达升高,下调LncRNA CBR3-AS1的表达,可上调miR-409-3p表达,从而下调hnRNPA2B1表达,抑制肝癌细胞增殖、迁移与侵袭,促进细胞凋亡。

lncRNA CBR3-AS1靶向调控miR-5195-3p促进胃癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的探讨长链非编码RNA CBR3-AS1(lncRNA CBR3-AS1)是否通过靶向调控miR-5195-3p的表达从而促进胃癌细胞增殖、迁移及侵袭。方法体外培养正常胃上皮细胞GES-1与胃癌细胞系HGC-27、NCI-N87、AGS,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CBR3-AS1、miR-5195-3p的表达量;分别将si-NC、si-CBR3-AS1、si-CBR3-AS1与anti-miR-NC、si-CBR3-AS1与anti-miR-5195-3p转染至AGS细胞;甲基噻唑基四唑(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证CBR3-AS1、miR-5195-3p的靶向关系;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)的表达量。结果与GES-1比较,胃癌细胞系HGC-27、NCI-N87、AGS中CBR3-AS1的表达水平显著升高(P<0.05);与si-NC组比较,si-CBR3-AS1组细胞活力显著降低(P<0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数显著减少(P<0.05),E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05),N-cadherin蛋白水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实CBR3-AS1可靶向结合miR-5195-3p;与si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组比较,si-CBR3-AS1+anti-miR-5195-3p组细胞活力显著升高(P<0.05),迁移细胞数和侵袭细胞数显著增多(P<0.05),E-cadherin蛋白水平显著降低(P<0.05),N-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论CBR3-AS1可能通过抑制miR-5195-3p的表达从而促进胃癌细胞增殖、迁移及侵袭。

lncRNA CBR3-AS1调节miR-145-5p/FSCN1轴对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

该文旨在探究长链非编码RNA CBR3-AS1(lncRNA CBR3-AS1)靶向微小RNA-145-5p(miR-145-5p)/肌动蛋白束蛋白1(FSCN1)轴对鼻咽癌(NPC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。qRTPCR法检测鼻咽癌组织中lncRNACBR3-AS1和miR-145-5p的表达水平。将鼻咽癌细胞CNE-1分为si-NC组、si-CBR3-AS1组、si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组、si-CBR3-AS1+anti-miR-145-5p组、miR-NC组、miR-145-5pmimics组、miR-145-5pmimics+pcDNA组、miR-145-5pmimics+FSCN1组。双荧光素酶实验检测lncRNA CBR3-AS1和miR-145-5p及FSCN1和miR-145-5p的靶向关系;MTT法检测细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡情况;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测细胞周期负调控因子(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的蛋白表达变化。建立小鼠移植瘤模型,探究lncRNA CBR3-AS1对鼻咽癌移植瘤生长及miR-145-5p/FSCN1轴的影响。在鼻咽癌组织中,lncRNA CBR3-AS1表达上调,miR-145-5p表达下调(P<0.05)。干扰lncRNA CBR3-AS1或上调miR-145-5p表达可以抑制鼻咽癌细胞的增殖与侵袭,促进鼻咽癌细胞凋亡(P<0.05)。下调miR-145-5p表达或上调FSCN1表达可以逆转干扰lncRNA CBR3-AS1表达或上调miR-145-5p表达对鼻咽癌细胞的增殖与侵袭的抑制作用(P<0.05)。小鼠移植瘤实验显示,下调lncRNA CBR3-AS1表达可上调miR-145-5p表达,从而下调FSCN1表达,抑制鼻咽癌移植瘤的生长(P<0.05)。lncRNA CBR3-AS1在鼻咽癌组织中上调表达,下调lncRNA CBR3-AS1表达可通过调控miR-145-5p/FSCN1轴抑制鼻咽癌细胞的增殖与侵袭,促进细胞凋亡。

lncRNA PSMA3-AS1调节miR-142-3p/HMGA2轴对卵巢癌恶性进展的影响

目的:探讨lncRNA PSMA3-AS1通过调节miR-142-3p/HMGA2轴对卵巢癌恶性进展的影响及其机制。方法:选择2019年3月至2022年7月期间在本院确诊的53例卵巢癌患者作为研究对象,收集患者卵巢癌组织及癌旁组织。体外培养人正常卵巢细胞HOSEpiC和卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3、A2780、COV362,RT-qPCR检测卵巢癌细胞中lncRNA PSMA3-AS1表达,筛选最佳干预细胞系。双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA PSMA3-AS1、HMGA2与miR-142-3p的靶向关系;将SKOV3细胞分为si-NC组、si-PSMA3-AS1组、si-PSMA3-AS1+anti-miR-NC组、si-PSMA3-AS1+anti-miR-142-3p组、miR-NC组、miR-142-3p mimics组、miR-142-3p mimics+pcDNA组、miR-142-3p mimics+HMGA2组,检测细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭;Western blot检测Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、cleaved caspase 3、HMGA2蛋白表达;小鼠移植瘤实验验证lncRNA PSMA3-AS1对卵巢癌肿瘤生长的影响。结果:与癌旁组织比较,卵巢癌组织中lncRNA PSMA3-AS1和HMGA2表达升高,miR-142-3p表达降低(P<0.05);lncRNA PSMA3-AS1和HMGA2在SKOV3细胞中表达水平最高,miR-142-3p在SKOV3细胞中表达水平最低;下拉实验和双荧光素酶报告显示,lncRNA PSMA3-AS1、HMGA2与miR-142-3p存在靶向关系;敲低lncRNA PSMA3-AS1或过表达miR-142-3p后,细胞OD值、细胞克隆数、划痕愈合率、细胞侵袭数及Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、HMGA2表达显著降低,细胞凋亡率、cleaved caspase 3表达显著增加(P<0.05);抑制miR-142-3p表达或过表达HMGA2可逆转敲低lncRNA PSMA3-AS1或过表达miR-142-3p对卵巢癌细胞恶性行为的抑制作用;体内实验表明,敲低lncRNA PSMA3-AS1表达可抑制小鼠肿瘤生长。结论:lncRNA PSMA3-AS1在卵巢癌中高表达,敲低lncRNA PSMA3-AS1可调节miR-142-3p/HMGA2轴抑制卵巢癌恶性发展。

lncRNA ITGA9-AS1、miR-670-3p在肝细胞癌组织中表达及与患者预后的关系

目的探究长链非编码RNA(lncRNA ITGA9-AS1)和miR-670-3p在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及预后评估价值。方法以2016年6月至2018年6月邯郸市中心医院收治的76例肝细胞癌患者为研究对象,取其癌组织和相应癌旁组织,分别为HCC组和癌旁组。lncRNA ITGA9-AS1和miR-670-3p水平检测采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR);Pearson相关性分析lncRNA ITGA9-AS1和miR-670-3p的关系;Kaplan-Meier法分析生存曲线;COX回归分析影响因素。结果HCC组lncRNA ITGA9-AS1水平低表达,miR-670-3p水平高表达(P<0.05)。lncRAN ITGA9-AS1与miR-670-3p呈负相关关系(r=-0.310,P=0.006)。lncRNA ITGA9-AS1、miR-670-3p表达水平与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤分化、肿瘤大小、肿瘤数目有关(P<0.05)。随访3年发现lncRNA ITGA9-AS1高表达组患者累积生存率高于低表达组;miR-670-3p高表达组患者累积生存率低于低表达组(P<0.05)。多因素COX回归分析表明肿瘤分化(HR=1.842)、淋巴结转移(HR=3.882)、miR-670-3p(HR=3.786)、lncRNA ITGA9-AS1(HR=3.366)是影响HCC患者预后的因素(P<0.05)。结论HCC组织中lncRNA ITGA9-AS1呈低表达,miR-670-3p呈高表达,二者表达水平与临床病理特征存在密切关系,且对HCC患者预后有一定的评估价值。

lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌中的临床意义及生物学功能分析

目的探讨lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌(HCC)中的表达意义和其参与HCC发生发展的潜在作用机制。方法收集37例HCC组织及其配对癌旁组织,以及HCC细胞RNA,利用qRT-PCR检测lncRNA SLC9A3-AS1在组织和细胞中的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。绘制lncRNA SLC9A3-AS1的受试者工作特征(ROC)曲线,分析其对HCC的诊断效能。通过生物信息学方法筛选与lncRNA SLC9A3-AS1结合的RNA结合蛋白,并绘制韦恩图,分析lncRNA SLC9A3-AS1与结合蛋白表达的相关性,以及蛋白表达与HCC病理分期和患者生存预后的关系。结果lncRNA SLC9A3-AS1在HCC组织和细胞中表达下调,其表达水平与患者血清甲胎蛋白(AFP)水平明显相关(P<0.05)。lncRNA SLC9A3-AS1的ROC曲线下面积(AUC)为0.849(95%CI:0.796~0.886)。韦恩图显示5个与lncRNA SLC9A3-AS1潜在结合的蛋白:hnRNPA1、YTHDC1、RBM4、NONO和RBMx,其表达与lncRNA SLC9A3-AS1表达呈明显正相关(P<0.05)。随着HCC分期的进展,不同分期的RNA结合蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05);RBM4、NONO和RBMx低表达患者总体生存期明显长于高表达患者(P<0.05)。结论lncRNA SLC9A3-AS1在HCC中下调,有望作为HCC诊断的生物标志物,并且可能通过与RNA结合蛋白互作调控HCC进展。

lncRNA SNAI3-AS1调节miR-367-3p/SOX4轴对前列腺癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)SNAI3-AS1调节微RNA(miR)-367-3p/高迁移率族盒蛋白4(SOX4)轴对前列腺癌(PC)细胞恶性生物学行为的影响。方法实时PCR检测人PCa细胞系DU145、LNCap、PC-3、正常前列腺上皮细胞系RWPE-1以及PC组织、癌旁组织中SNAI3-AS1、miR-367-3p、SOX4 mRNA表达。选取对数生长期的LNCap,设置空白组、阴性对照(vector)组、SNAI3-AS1过表达(vector SNAI3-AS1)组、小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)组、si-SNAI3-AS1组、si-SNAI3-AS1+抑制剂阴性对照(NC inhibitor)组和si-SNAI3-AS1+miR-367-3p inhibitor组。用克隆形成实验、Transwell实验、Hoechst33258染色分别检测细胞克隆形成能力、迁移、侵袭及凋亡;实时PCR检测LNCap中SNAI3-AS1、miR-367-3p、SOX4 mRNA表达;Western blotting检测LNCap中SOX4蛋白表达;报告基因实验验证miR-367-3p与SNAI3-AS1、SOX4的靶向关系。结果SNAI3-AS1、SOX4 mRNA表达在DU145、LNCap、PC-3及PC组织中显著增加,miR-367-3p表达显著降低(P<0.05)。与空白组、vector组相比,vector SNAI3-AS1组SNAI3-AS1、SOX4 mRNA及蛋白表达、克隆数、侵袭与迁移显著增加,miR-367-3p表达、凋亡显著降低(P<0.05);与空白组、si-NC组相比,si-SNAI3-AS1组SNAI3-AS1、SOX4 mRNA及蛋白表达、克隆数、侵袭与迁移显著降低,miR-367-3p表达、凋亡显著增加(P<0.05);与si-SNAI3-AS1+NC inhibitor组相比,si-SNAI3-AS1+miR-367-3p inhibitor组SOX4 mRNA及蛋白表达、克隆数、侵袭与迁移显著增加,miR-367-3p表达、凋亡显著降低(P<0.05),SNAI3-AS1表达无统计学差异(P>0.05)。miR-367-3p与SNAI3-AS1、SOX4存在靶向关系。结论lncRNA SNAI3-AS1通过上调miR-367-3p/SOX4轴抑制PC细胞恶性生物学行为的发展。

肝细胞肝癌中LncRNA OSER1-AS1靶向调控miR-433-3p的作用

目的研究肝细胞肝癌(HCC)中长链非编码RNA(LncRNA)氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA1(OSER1-AS1)靶向调控微小RNA(miR)-433-3p的作用及生物学意义。方法选择唐山市第九医院手术切除的HCC组织和癌旁组织,培养HCC细胞株SMMC-7721、HepG2、MHCC97H及正常肝细胞株HL-7702。检测LncRNA OSER1-AS1、miR-433-3p的表达水平,比较HCC组织与癌旁组织、HCC细胞株与正常肝细胞株中LncRNA OSER1-AS1、miR-433-3p表达水平的差异。对转染MHCC97H细胞进行分组,转染阴性对照(NC)-siRNA为si-NC组,转染LncRNA OSER1-AS1-siRNA为si-OSER1-AS1组,转染LncRNA OSER1-AS1-siRNA及NC miR为si-OSER1-AS1+miR-NC组,转染LncRNA OSER1-AS1-siRNA及miR-433-3p抑制物为si-OSER1-AS1+miR-433-3p抑制物组。检测细胞增殖活力、凋亡率、增殖细胞核抗原(PCNA)及裂解型caspase-3(cleaved caspase-3)的表达水平,采用双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA OSER1-AS1靶向miR-433-3p。结果HCC组织中LncRNA OSER1-AS1的表达水平高于癌旁组织(1.77±0.34 vs1.00±0.21)、miR-433-3p的表达水平低于癌旁组织(0.65±0.09 vs 1.00±0.28)(P<0.05)且LncRNA OSER1-AS1与miR-433-3p呈负相关(r=-0.351,P<0.05);HCC细胞株中LncRNA OSER1-AS1的表达水平高于HL-7702细胞、miR-433-3p的表达水平低于HL-7702细胞(P<0.05)且MHCC97H细胞中上述变化最显著。si-OSER1-AS1组MHCC97H细胞中LncRNA OSER1-AS1、PCNA的表达水平及增殖活力低于si-NC组(0.37±0.05 vs 1.00±0.11,0.33±0.05 vs 0.92±0.12,0.51±0.09 vs 1.03±0.12),miR-433-3p、cleaved caspase-3的表达水平及凋亡率高于si-NC组(1.88±0.25 vs 1.00±0.09,0.96±0.11 vs 0.44±0.06,9.39%±1.15%vs 3.82%±0.55%)(P<0.05);si-OSER1-AS1+miR-433-3p抑制物组MHCC97H细胞中cleaved caspase-3表达水平及凋亡率低于si-OSER1-AS1+miR-NC组(0.27±0.05 vs 0.91±0.10,6.04%±0.77%vs 11.32%±1.32%),PCNA的表达水平及增殖活力高于si-OSER1-AS1+miR-NC组(0.94±0.12 vs 0.48±0.06,0.95±0.11 vs 0.34±0.05)(P<0.05)。结论LncRNA OSER1-AS1靶向miR-433-3p调控HCC细胞的增殖和凋亡。

LncRNA PSMA3-AS1调节miR-140-3p/DDX5轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的探讨长链非编码RNA人蛋白酶体α亚基3型的反义RNA1(PSMA3-AS1)调节miR-140-3p/DEAD box p68 RNA解旋酶(DDX5)轴对肺癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法qRT-PCR、Western blot、免疫组化法分别检测40例肺癌组织和细胞系中PSMA3-AS1、miR-140-3p、DDX5表达。将A549细胞分为:control组、si-NC组、si-PSMA3-AS1组、si-PSMA3-AS1+inhibitor-NC组、si-PSMA3-AS1+miR-140-3p inhibitor组,qRT-PCR检测转染效率;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室分别检测细胞增殖、凋亡、迁移与侵袭;Western blot方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及DDX5蛋白的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与PSMA3-AS1和DDX5的关系;构建肺癌裸鼠模型,分为si-NC、si-PSMA3-AS1组,测量肿瘤质量与体积,qRT-PCR检测移植瘤组织中miR-140-3p表达,免疫组化法检测移植瘤组织Ki-67、DDX5蛋白表达。结果在肺癌组织/细胞系中,PSMA3-AS1 mRNA、DDX5蛋白表达升高,miR-140-3p mRNA表达水平降低(P<0.05);敲低PSMA3-AS1表达可显著抑制A549细胞增殖、迁移与侵袭,降低PCNA、MMP-2、vimentin、DDX蛋白表达,促进miR-140-3p、Bax、E-cadherin表达及细胞凋亡(P<0.05);下调miR-140-3p,可减弱敲低PSMA3-AS1对A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-140-3p与PSMA3-AS1、miR-140-3p与DDX5存在靶向调控关系(P<0.05);体内实验显示,抑制PSMA3-AS1表达可显著降低移植瘤质量和体积,降低Ki-67、DDX5表达水平,升高miR-140-3p表达(P<0.05)。结论敲低PSMA3-AS可能通过调节miR-140-3p/DDX5轴,抑制肺癌细胞的增殖和EMT,促进细胞凋亡。

lncRNA CERS6-AS1通过调控miR-138-2-3p抑制人胶质瘤细胞系增殖

目的探讨lncRNA CERS6-AS1对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其可能作用机制.方法qRT-PCR法检测胶质瘤组织、癌旁组织中CERS6-AS1和miR-138-2-3p的表达量;Pearson法分析胶质瘤组织中CERS6-AS1与miR-138-2-3p表达量的相关性;体外培养人胶质瘤细胞T98G,将si-NC、si-CERS6-AS1、miR-NC、miR-138-2-3p mimics、si-CERS6-AS1与anti-miR-NC、si-CERS6-AS1与anti-miR-138-2-3p分别转染至T98G细胞;CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验检测CERS6-AS1和miR-138-2-3p的靶向关系.结果与癌旁组织比较,胶质瘤组织中CERS6-AS1的表达量升高(P<0.05),miR-138-2-3p的表达量降低(P<0.05);CERS6-AS1与miR-138-2-3p呈负相关(r=-0.8899,P<0.001);si-CERS6-AS1组细胞活力、克隆形成细胞数、迁移及侵袭细胞数均低于si-NC组(P<0.05);CERS6-AS1可靶向调节miR-138-2-3p的表达;miR-138-2-3p组细胞活力、克隆形成细胞数、迁移及侵袭细胞数均少于miR-NC组(P<0.05);si-CERS6-AS1+anti-miR-138-2-3p组细胞活力、克隆形成细胞数、迁移及侵袭细胞数均比si-CERS6-AS1+anti-miR-NC组增多(P<0.05).结论干扰CERS6-AS1表达可通过调控miR-138-2-3p而抑制胶质瘤细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭.

LncRNA FEZF1-AS1调控特发性肺间质纤维化的机制研究

目的 探讨FEZ家族锌指1-反义RNA 1(LncRNA FEZF1-AS1)对肺间质纤维化细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮-间充质相互作用(EMT)的影响及其作用机制。方法 将转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))作用于A549细胞,诱导肺间质纤维化细胞模型,将其分为空白对照组(A549细胞组)和模型组。Western blotting检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达,观察模型复制是否成功;实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测细胞LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p基因表达。根据实验目的和转染质粒不同,将A549细胞分为空白对照组(Blank组)、TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组、TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1组。CCK-8法检测细胞增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell检测细胞侵袭能力。Western blotting检测细胞E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白表达;qRT-PCR检测细胞LncRNA FEZF1-AS1和miR-200c-3p基因表达。结果 模型组E-cadherin蛋白相对表达量较空白对照组降低(P <0.05),N-cadherin及Vimentin蛋白相对表达量较空白对照组升高(P <0.05);模型组LncRNA FEZF1-AS1基因相对表达量较空白对照组升高(P <0.05),miR-200c-3p基因相对表达量较空白对照组降低(P <0.05)。与Blank组比较,TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组细胞增殖、迁移、侵袭能力升高(P <0.05);与TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低(P<0.05)。与TGF-β_(1)+SiLncRNAFEZF1-AS1NC组比较,TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1组LncRNA FEZF1-AS1基因相对表达量及N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量降低(P <0.05),E-cadherin蛋白相对表达量升高(P <0.05);与TGF-β_(1)+Si LncRNA FEZF1-AS1 NC组比较,TGF-β_(1)+SiLncRNAFEZF1-AS1组和Blank组miR-200c-3p基因相对表达量升高(P<0.05)。结论LncRNA FEZF1-AS1通过抑制miR-200c-3p促进肺间质纤维化细胞增殖、迁移、侵袭及EMT过程。

lncRNA CBR3-AS1通过调控miR-145-5p影响胃癌HGC-27细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡

为探讨lncRNA CBR3-AS1靶向miR-145-5p对胃癌细胞HGC-27恶性生物学行为的影响,该研究先用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测30例胃癌患者的癌组织及癌旁组织中CBR3-AS1和miR-145-5p的表达水平。然后,将CBR3-AS1干扰表达载体质粒、miR-145-5p模拟物、miR-145-5p抑制剂与CBR3-AS1干扰表达载体质粒转染至胃癌细胞HGC-27;用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡流程;Transwell法检测迁移和侵袭的细胞数;双荧光素酶报告实验检测CBR3-AS1和miR-145-5p的靶向关系。实验结果显示,胃癌组织中CBR3-AS1表达水平高于癌旁组织,而miR-145-5p表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。过表达miR-145-5p或抑制lncRNA CBR3-AS1表达可降低HGC-27细胞活性,减少迁移侵袭细胞数,而提高细胞凋亡率(P<0.05)。lncRNA CBR3-AS1靶向调控miR-145-5p;下调miR-145-5p逆转了抑制lncRNA CBR3-AS1表达对HGC-27细胞的作用。因此,抑制lncRNA CBR3-AS1表达可能通过上调miR-145-5p抑制HGC-27细胞的迁移侵袭、增殖,促进细胞凋亡。

LncRNA PSMA3-AS1调控miR-27b-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)人蛋白酶体α亚基3型反义RNA1(PSMA3-AS1)通过调控微小RNA-27b-3p(miR-27b-3p)对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响。方法选取20例非小细胞肺癌标本和20例健康志愿者肺部上皮样本。购买人体正常的肺部上皮细胞H1299、H358、A549及NC-LH2073.采用实时荧光RT-PCR检测LncRNA PSMA3-AS1、miR-27b-3p表达,构建抑制LncRNA PSMA3-AS1表达的A549细胞,采用MTT法、流式细胞仪、Transwell检测细胞增殖、凋亡、迁移情况,Western Blot法检测细胞周期蛋白-D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达变化。结果与人体正常肺上皮组织相比,非小细胞肺癌组织中LncRNA PSMA3-AS1表达升高,miR-27b-3p表达下降(P<0.05)。与BEAS-2B组相比,H1299组、H358组、NC-LH2073组、A549组中LncRNA PSMA3-AS1水平上升,miR-27b-3p水平降低(P<0.05)。与si-NC组相比,si-PSMA3-AS1组lncRNA PSMA3-AS1水平表达降低(P<0.05),与si-NC组相比,si-HIF-1a组OD值、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、迁移细胞数下降,凋亡率升高(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-27b-3p组miR-27b-3p表达水平降低(P<0.05),与miR-NC组相比,miR-27b-3p组OD值、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、迁移细胞数降低,凋亡率上升(P<0.05)。双荧光素酶报告试验显示,LncRNA PSMA3-AS1靶向miR-27b-3p表达,且经转染后,通过RT-qPCR检测显示miR-NC组及miR-27b-3p组中的miR-27b-3p表达差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告发现同时转染miR-27b-3p、WT-PSMA3-AS1后,荧光素酶活性下降(P<0.05)。与si-NC组相比,抑制lncRNA-PSMA3-AS1表达可使PC3细胞中miR-27b-3p表达降低(P<0.05),与si-PSMA3-AS1+anti-miR-NC组相比,si-PSMA3-AS1+anti-miRNA-27b-3p组OD值、CyclinD1、MMP2、MMP9、迁移细胞数上升,凋亡率降低(P<0.05)。结论干扰LncRNA PSMA3-AS1水平表达,可对miR-27b-3p进行有效调控,从而抑制非小细胞肺癌细胞的增殖与迁移,加速其凋亡,阻碍非小细胞肺癌的恶性发展。

长链非编码RNA B3GALT5-AS1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭及体内致瘤性

目的探究过表达长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)B3GALT5-AS1对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancers,NSCLC)生长和侵袭能力的影响。方法qRT-PCR检测临床样本中B3GALT5-AS1的表达。A549细胞分对照组、pcDNA-scramble组、pcDNA-B3GALT5-AS1组,按分组分别转染pcDNA-scramble和pcDNA-B3GALT5 AS1载体。菌落形成实验评估A549细胞集落形成能力,qRT-PCR检测Ki67和Survivin的mRNA表达;流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹检测P27、P53、VEGF和Vimentin蛋白表达。转染pcDNA-scramble和pcDNA-B3GALT5-AS1的A549细胞分别皮下注射裸鼠,检测瘤组织体积和重量;qRT-PCR检测B3GALT5-AS1的表达水平;免疫组化检测Ki67和VEGF的表达。结果肺癌组织中B3GALT5-AS1 mRNA相对表达量明显低于邻近正常组织(P<0.05)。与对照组比较,过表达B3GALT5-AS1 A549细胞集落形成能力降低(P<0.05),Survivin和Ki67表达量明显下调(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05),侵袭细胞数目明显减少(P<0.05),P27和P53蛋白表达显著上调(P<0.05),VEGF和Vimentin蛋白表达显著下调(P<0.05)。体内异种移植实验结果显示,与pcDNA-scramble组比较,过表达B3GALT5-AS1明显减小肿瘤体积和重量(P<0.05),瘤组织中Ki67和VEGF阳性细胞数目明显减少(P<0.05)。结论过表达B3GALT5-AS1明显抑制NSCLC细胞的增殖和侵袭并促进凋亡,而且体内阻滞瘤组织的生长,在NSCLC起到抗癌作用。

不同浓度的依托咪酯通过调控FEZF1-AS1的表达对结直肠癌细胞生物学功能的影响

目的探讨不同浓度依托咪酯对结直肠癌细胞生物学功能的影响,并分析其潜在机制。方法使用0、4、16、64μmol/L依托咪酯分别处理结直肠癌细胞(LS513细胞)48 h,测定细胞存活率、凋亡率、迁移侵袭能力,并检测Bcl-2、BAX、Cleaved caspase-3及LncRNA FEZF1-AS1和miR-363-3p的表达水平。培养LS513细胞,分为三组:空白组、依托咪酯64μmol/L组、pcDNA-FEZF1-AS1组。比较三组细胞生物学功能。结果4、16、64μmol/L依托咪酯处理LS513细胞后,细胞存活率、迁移细胞数、侵袭细胞数均降低,凋亡率增加,且凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax表达升高,Bcl-2表达降低(P<0.05);过表达LncRNA FEZF1-AS1后,LS513细胞LncRNA FEZF1-AS1表达升高,miR-363-3p表达降低,且过表达LncRNA FEZF1-AS1后LS513细胞存活率、迁移细胞数及侵袭细胞数升高,凋亡率降低(P<0.05)。结论依托咪酯可抑制结直肠癌细胞迁移、侵袭,并促进其凋亡,且可能通过调控LncRNA FEZF1-AS1/miR-363-3p信号轴发挥作用。

lncRNA PSMA3-AS1靶向miR-3619-5p调控宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制研究

目的探讨lncRNA PSMA3-AS1调控宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制.方法收集2020年3月至2021年6月西安医学院第二附属医院收治的42例宫颈癌患者的癌组织及其癌旁组织标本,采用qRT-PCR法检测宫颈癌组织、癌旁组织、人宫颈上皮永生化细胞H8、与人宫颈癌细胞系SiHa、HeLa、Cas-ki中lncRNA PSMA3-AS1、miR-3619-5p的表达量;以SiHa细胞为研究对象,分组为:si-NC组、si-lncRNA PSMA3-AS1组、miR-NC组、miR-3619-5p组、anti-miR-NC+si-lncRNA PSMA3-AS1组、anti-miR-3619-5p+si-lncRNA PSMA3-AS1组;MTT法与Transwells实验分别检测每组SiHa细胞的增殖活力、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测miR-3619-5p过表达对野生型载体lncRNA PSMA3-AS1-WT、突变型载体lncRNA PS-MA3-AS1-MUT荧光素酶活性的影响;Western印迹检测MMP2、MMP9蛋白表达量.结果宫颈癌组织中lncRNA PSMA3-AS1的表达量比癌旁组织增加(P<0.01),miR-3619-5p的表达量比癌旁组织减少(P<0.01);与H8细胞比较,SiHa、HeLa、Caski细胞中lncRNA PSMA3-AS1的表达量升高(P<0.01),miR-3619-5p的表达量降低(P<0.01);与si-NC组比较,si-lncRNA PSMA3-AS1组细胞活力和MMP2、MMP9蛋白水平降低(P<0.05),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-3619-5p组细胞活力和MMP2、MMP9蛋白水平降低(P<0.01),迁移及侵袭细胞数减少(P<0.05);miR-3619-5p过表达可抑制lncRNA PSMA3-AS1-WT的荧光素酶活性(P<0.01),而未能影响lncRNA PSMA3-AS1-MUT的荧光素酶活性;与anti-miR-NC+si-lncRNA PSMA3-AS1组比较,anti-miR-3619-5p+si-lncRNA PSMA3-AS1组细胞活力和MMP2、MMP9蛋白水平升高(P<0.01),迁移及侵袭细胞数增多(P<0.01).结论干扰lncRNA PSMA3-AS1表达可通过促进miR-3619-5p而降低宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力.

上调LncRNA FEZF1-AS1通过miR-363-3p/Sphk2信号轴促进宫颈癌细胞的机制

目的探讨LncRNA FEZF1-AS1对宫颈癌细胞增殖、侵袭及上皮间充质转化(EMT)的影响及作用机制。方法实时荧光定量PCR分析宫颈癌组织、癌旁正常组织、Hela、H8细胞中LncRNA FEZF1-AS1、miR-363-3p和Sphk2的表达;siRNA FEZF1-AS1转染Hela细胞,MTT、细胞侵袭实验及Western blot检测下调FEZF1-AS1对Hela细胞增殖、侵袭和EMT的影响。miRanda软件分析LncRNA FEZF1-AS1和miR-363-3p之间的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验检测二者的相关性。下调miR-363-3p表达,分析Hela细胞增殖、侵袭和EMT。同时上调LncRNA FEZF1-AS1和miR-363-3p表达,检测LncRNA FEZF1-AS1通过miR-363-3p对Hela细胞增殖、侵袭和EMT的影响。TargetScan分析miR-363-3p和Sphk2之间的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验检测miR-363-3p和Sphk2相关性。siRNA Sphk2转染Hela细胞,检测Hela细胞增殖、侵袭和EMT能力。结果与H8细胞相比,Hela细胞中LncRNA FEZF1-AS1、Sphk2表达上调(P<0.01),miR-363-3p表达下调(P<0.01)。下调LncRNA FEZF1-AS1表达明显抑制了Hela细胞增殖、侵袭与EMT;LncRNA FEZF1-AS1靶向miR-363-3p;下调miR-363-3p促进Hela细胞增殖、侵袭与EMT;上调LncRNA FEZF1-AS1通过miR-363-3p促进Hela细胞增殖、侵袭与EMT。miR-363-3p与Sphk2具有靶向关系。下调Sphk2表达抑制了Hela细胞增殖、侵袭与EMT。结论上调LncRNA FEZF1-AS1通过miR-363-3p/Sphk2轴促进Hela细胞增殖、侵袭及其EMT。

lncRNA GATA3-AS1通过靶向miR-361-3p调控T细胞淋巴瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨lncRNA GATA结合蛋白3反义RNA(GATA3-AS)1对T细胞淋巴瘤Jurkat细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法选取30例胶质瘤组织及相应癌旁组织,体外培养人T淋巴细胞H9和T细胞淋巴瘤细胞Jurkat、CCRF-CEM和SUP-T1,将Jurkat分为si-NC组和si-GATA3-AS1组、miR-NC组和miR-361-3p组、si-GATA3-AS1+anti-miR-NC组和si-GATA3-AS1+anti-miR-361-3p组。RT-聚合酶链反应(qPCR)检测T细胞淋巴瘤组织和细胞中lncRNA GATA3-AS1和miR-361-3p的表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞活性;Transwell检测细胞的迁移和侵袭;Western印迹检测相关蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测lncRNA GATA3-AS1和miR-361-3p的靶向关系。结果T细胞淋巴瘤组织和细胞中lncRNA GATA3-AS1表达水平显著升高,miR-361-3p表达水平显著降低(P<0.05)。与H9组比较,Jurkat、CCRF-CEM和SUP-T1细胞组lncRNA GATA3-AS1表达水平显著升高,miR-361-3p表达水平显著降低(P<0.05)。干扰lncRNA GATA3-AS1表达或过表达miR-361-3p显著降低Jurkat细胞的活性、迁移、侵袭数及细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达水平,显著升高p21表达水平(P<0.05)。lncRNA GATA3-AS1靶向调控miR-361-3p表达(P<0.05)。且下调miR-361-3p逆转了干扰lncRNA GATA3-AS1表达对T细胞淋巴瘤Jurkat细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论干扰lncRNA GATA3-AS1表达通过靶向上调miR-361-3p抑制T细胞淋巴瘤Jurkat细胞的增殖、迁移和侵袭。