LncRNA CYTOR对大鼠背脊髓神经元细胞损伤及炎性因子的影响

目的探讨LncRNA CYTOR对大鼠背脊髓神经元细胞损伤及炎性因子的影响及其可能作用机制。方法采用过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导大鼠背脊髓神经元细胞建立细胞损伤模型,随机分为:con组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+pcDNA组、H^(2)O_(2)+pcDNA-LncRNA CYTOR组、H_(2)O_(2)+pcDNA-LncRNA CYTOR+miR-NC组、H_(2)O_(2)+pcDNA-LncRNA CYTOR+miR-136-5p组。qRT-PCR检测LncRNA CYTOR、miR-136-5p的表达量;MTT法与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;ELISA法检测IL-6、IL-21的水平;双荧光素酶报告实验检测LncRNA CYTOR与miR-136-5p的靶向关系;Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果与con组比较,H_(2)O_(2)组LncRNA CYTOR的表达量降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05),miR-136-5p的表达量升高(P<0.05),细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平升高(P<0.05),IL-6、IL-21的水平升高(P<0.05);与H_(2)O_(2)+pcDNA组比较,H_(2)O_(2)+pcDNA-LncRNA CYTOR组细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达及IL-6、IL-21水平均降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05);LncRNA CYTOR可负向调控miR-136-5p表达;与H_(2)O_(2)+pcDNA-LncRNA CYTOR+miR-NC组比较,H 2O 2+pcDNA-LncRNA CYTOR+miR-136-5p组细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达及IL-6、IL-21水平均升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论LncRNA CYTOR过表达可通过抑制miR-136-5p表达而促进细胞增殖及抑制细胞凋亡、炎性反应从而减轻H_(2)O_(2)诱导的大鼠背脊髓神经元细胞损伤。

lncRNA CYTOR/miR-193b-3p/HMGB1轴调控T细胞急性淋巴细胞白血病细胞MOLT-4增殖与凋亡的作用研究

目的 探讨lncRNA CYTOR对T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法 体外培养人正常骨髓基质细胞系HS-5和T-ALL细胞系(CCRF-CEM、MOLT-4、CEM-C1),采用逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测细胞中lncRNA CYTOR、miR-193b-3p和HMGB1 mRNA表达;采用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞中HMGB1蛋白表达。分别转染si-CYTOR、miR-193b-3p mimics、si-HMGB1及共转染si-CYTOR与anti-miR-193b-3p至MOLT-4细胞,以CCK-8法检测细胞增殖,以流式细胞术检测细胞凋亡,以Western blot法检测细胞Bax和Bcl-2、cleaved-caspase3蛋白表达。通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA CYTOR与miR-193b-3p、miR-193b-3p与HMGB1的调控关系。结果 与HS-5细胞比较,T-ALL细胞系(CCRF-CEM、MOLT-4、CEM-C1)中lncRNA CYTOR、HMGB1 mRNA及其蛋白表达均升高,miR-193b-3p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。下调lncRNA CYTOR、上调miR-193b-3p或下调HMGB1后,MOLT-4细胞增殖受到抑制,Bcl-2蛋白表达降低,凋亡率和细胞中Bax、cleaved-caspase3蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA CYTOR竞争性吸附miR-193b-3p,HMGB1是miR-193b-3p的靶基因。上调HMGB1表达可逆转lncRNA CYTOR对T-ALL细胞MOLT-4增殖和凋亡的作用。敲低miR-193b-3p可逆转lncRNA CYTOR对MOLT-4细胞增殖和凋亡的作用。结论 lncRNA CYTOR在T-ALL细胞系中表达上调,其可能通过竞争性吸附miR-193b-3p进而上调HMGB1的表达来促进T-ALL细胞增殖,并阻碍细胞凋亡,其有可能成为T-ALL治疗的分子靶点。

LncRNA CYTOR靶向Wnt/β-catenin通路促进口腔鳞状细胞癌生长的机制研究

目的:研究lncRNA CYTOR对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在分子调控机制。方法:以对数期CAL27细胞作为研究对象,将细胞随机分为Control组(正常培养细胞)、si-NC组(转染空载质粒)、si-lncRNA CYTOR组(转染si-lncRNA CYTOR表达载体)。采用RT-qPCR法检测lncRNA CYTOR在正常口腔细胞(NHOK)和OSCC细胞(Tca8113、CAL27、SCC9和SCC25)中的表达。CKK-8法、克隆形成实验和EdU染色实验用于检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot实验检测细胞增殖相关蛋白(PNCA和Ki-67)和Wnt/β-catenin通路相关蛋白(c-myc、cyclin D1和β-catenin)的表达水平。结果:与NHOK细胞比较,lncRNA CYTOR在Tca8113、CAL27、SCC9和SCC25细胞中的表达显著降低,尤其是在CAL27细胞中的表达最低(P<0.01)。体外细胞功能评估实验表明与si-NC组比较,si-lncRNA CYTOR组细胞的增殖活性、克隆形成能力、EdU阳性细胞比例、迁移和侵袭能力均明显下降(P<0.01);此外,与si-NC组比较,si-lncRNA CYTOR组细胞中PCNA、Ki-67、c-myc、cyclin D1和β-catenin的表达水平明显下降(P<0.01)。结论:lncRNA CYTOR在OSCC中的表达升高,且沉默lncRNA CYTOR可抑制CAL27细胞增殖,迁移和侵袭,其机制可能与Wnt/β-catenin通路的抑制有关。

长链非编码RNA CYTOR在人类癌症中调控机制研究进展

癌症因其多具有异质性、耐药性以及易复发转移的特点,临床很难治愈。揭示癌症发生发展的分子机制、鉴定新的诊断标志物和分子治疗靶标,无疑是解决癌症早期诊断、治疗以及改善患者预后问题的有效策略。越来越多的研究表明,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在人类癌症中特异性表达,是癌症发生发展的关键调节因子。细胞骨架调节因子RNA(cytoskeleton regulator RNA,CYTOR)是近年发现的一种致癌性lncRNA。CYTOR在多种类型癌症中均高表达,通过多种途径调控癌症发生发展,可能是癌症早期诊断、分子靶向治疗以及评估预后有效生物标志物。该文综述了CYTOR在人类癌症中的分子调控机制及其相关生物学效应,以期为临床癌症的诊疗提供新的科学参考。