LncRNA RUNX1-IT1对恶性多形性腺瘤miR-195/CyclinD1的调控作用探讨

目的 :探讨恶性多形性腺瘤(malignant pleomorphic adenoma, MPA)细胞中长链非编码RNA(long non-coding RNA, LncRNA)RUNX1-IT1对微小RNA-195(microRNA-195, miR-195)/细胞周期蛋白D1(CyclinD1)的调控作用。方法:收集手术切除的MPA组织及癌旁组织,检测LncRNA RUNX1-IT1、miR-195、CyclinD1 mRNA的表达水平,分析三者与MPA临床病理的关系。培养MPA细胞系SM-AP1,转染阴性对照(NC)siRNA、LncRNA RUNX1-IT1 siRNA、miRNC、miR-195抑制物,检测细胞增殖水平A490及miR-195、CyclinD1的表达水平,分析LncRNA RUNX1-IT1靶向miR-195、miR-195靶向CyclinD1的关系。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果 :MPA中LncRNA RUNX1-IT1、CyclinD1的表达水平显著高于癌旁组织,miR-195的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。LncRNA RUNX1-IT1与miR-195呈负相关、与CyclinD1呈正相关,miR-195与CyclinD1呈负相关。肿瘤直径≥3 cm、复发、远处转移的MPA癌组织中,LncRNA RUNX1-IT1、CyclinD1表达更高(P<0.05),miR-195表达更低(P<0.05)。敲低LncRNA RUNX1-IT1后,SM-AP1细胞的A490水平、CyclinD1表达水平降低,miR-195表达水平增加(P<0.05)。LncRNA RUNX1-IT1通过直接靶向作用于SM-AP1细胞中的miR-195,miR-195通过直接靶向作用于SM-AP1细胞中的CyclinD1。抑制miR-195后,敲低LncRNA RUNX1-IT1降低A490水平及CyclinD1表达水平的作用减弱(P<0.05)。结论:LncRNA RUNX1-IT1可能通过调控miR-195/CyclinD1表达,参与MPA的发生、发展。

多发性骨髓瘤患者中LncRNA DAPK1-IT1的表达与其临床意义研究

目的:检测多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓中LncRNA DAPK1-IT1基因表达水平,探讨其表达在MM患者中的临床意义。方法:收集2018年1月—2020年1月新诊断的MM患者40例(MM组),同期选取30例正常人作为对照组。通过实时定量PCR方法检测MM组及对照组标本中LncRNA DAPK1-IT1基因表达水平,分析其表达与MM患者临床特征及预后的关系。结果:MM组骨髓中LncRNA DAPK1-IT1表达水平较对照组显著下降[(3.02±0.12)vs(5.63±0.29),P<0.01]。LncRNA DAPK1-IT1的表达与MM患者DS分期、R-ISS分期及生存时间相关,LncRNA DAPK1-IT1低表达组生存时间较高表达组明显缩短(P<0.05)。Cox多因素分析提示,LncRNA DAPK1-IT1低表达是MM预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论:MM患者骨髓中LncRNA DAPK1-IT1表达降低,且与患者临床分期及生存时间有关,可作为MM患者潜在的预后标志物及可能的治疗靶点。

人参皂苷Rd通过调控lncRNA MAGI1-IT1表达影响结肠癌SW480细胞的增殖和凋亡

目的:探讨人参皂苷Rd对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测结肠癌组织及细胞中lncRNA MAGI1-IT1表达水平;结肠癌细胞SW480分为对照组、低、中、高剂量人参皂苷Rd组、si-MAGI1-IT1组、si-NC组、高剂量人参皂苷Rd+pcDNA-MAGI1-IT1组、高剂量人参皂苷Rd+pcDNA组。四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、流式细胞术评价细胞增殖和凋亡;蛋白质印迹法检测增殖(CyclinD1、p21)、凋亡(Caspase3、Bcl-2、cleaved-Caspase3、Bax)相关蛋白表达。结果:MAGI1-IT1在结肠癌组织中表达水平升高(P<0.05);中、高剂量人参皂苷Rd处理SW480细胞后,增加G_(0)/G_(1)期比例、凋亡率,降低S期比例,降低CyclinD1、Caspase3、Bcl-2蛋白表达水平,增加p21、cleaved-Caspase3、Bax表达水平,MAGI1-IT1表达水平降低,且呈剂量依赖性(P<0.05)。下调lncRNA MAGI1-IT1后,SW480的G_(0)/G_(1)期比例、凋亡率增加,S期比例下降,降低CyclinD1、Caspase3、Bcl-2蛋白表达水平,增加p21、cleaved-Caspase3、Bax表达水平(P<0.05)。上调lncRNA MAGI1-IT1逆转了人参皂苷Rd对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响。结论:人参皂苷Rd通过下调lncRNA MAGI1-IT1表达抑制结肠癌SW480细胞的增殖,促进其凋亡。

基因干扰lncRNA SPRY4-IT1对GBC-SD细胞干样性及线粒体膜电位的影响

目的通过基因干扰长链非编码RNA(lncRNAs)SPRY4-IT1,探究其对胆囊癌(GBC)细胞GBC-SD肿瘤干细胞样特性及线粒体膜电位变化的影响。方法设计合成SPRY4-IT1 shRNA,将shRNA-SPRY4-IT1转染GBC-SD细胞,RT-PCR检测SPRY4-IT1的表达水平;BrdU染色检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡;肿瘤细胞成球实验检测肿瘤干细胞样特性;流式检测线粒体膜电位的变化;Western blot检测肿瘤干样特性标志物以及线粒体损伤标志物的蛋白表达。结果将shRNA-SPRY4-IT1转染GBC-SD细胞,SPRY4-IT1的表达水平降低。干扰SPRY4-IT1表达抑制GBC-SD细胞增殖;提高线粒体膜电位,促进GBC-SD细胞凋亡;降低GBC干细胞样特性;抑制SOX2,OCT4,CD44,c-Myc和Bcl-2的表达以及促进cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-9和Bax的表达。结论基因干扰lncRNAs SPRY4-IT1能降低GBC细胞GBC-SD肿瘤干细胞特性,提高线粒体膜电位,促进GBC细胞GBC-SD的凋亡。

血清lncRNA EWSAT1和SPRY4-IT1水平检测对卵巢癌的诊断及预后预测价值分析

目的探讨血清lncRNA EWSAT1和SPRY4-IT1水平检测对卵巢癌的诊断及预后预测。方法选择卵巢癌患者138例为病例组,健康体检者107例为对照组。获取2组患者血清组织,实时荧光逆转录法测定血清lncRNA EWSAT1和SPRY4-IT1表达水平,采用χ2检验分析lncRNA EWSAT1和SPRY4-IT1的表达情况与卵巢癌患者临床病理特征的关系,采用Log-rank检验分析不同lncRNA EWSAT1和SPRY4-IT1水平卵巢癌预后生存率。结果病例组血清lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1 mRNA水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1 mRNA阳性率与肿瘤大小、病理学分级、临床分期、有无淋巴结转移、是否复发相关性明显,且肿瘤越大、病理学分级越高、临床分期越高、有淋巴结转移、复发,lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1 mRNA阳性率越高,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA EWSAT1+SPRY4-IT1联合筛查方法灵敏度、特异度、准确度均高于lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1单独筛查方法,差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1单独筛查方法灵敏度、特异度、准确度相近,差异无统计学意义(P>0.05);lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1阴性组3年生存率及生存期均明显高于lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1阳性组(P<0.05)。结论卵巢癌患者血清lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1升高;ncRNA EWSAT1+SPRY4-IT1联合筛查方法诊断卵巢癌灵敏度、特异度、准确度高,适合在临床上推广应用;lncRNA EWSAT1、SPRY4-IT1低表达的卵巢癌患者具有较好的预后。

毛萼乙素调控lncRNA CPS1-IT1表达抑制膀胱癌T24细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的考察毛萼乙素(Eriocalyxin)是否通过调控长链非编码RNA(lncRNA)CPS1 intronic transcript 1(CPS1-IT1)的表达影响膀胱癌T24细胞的增殖、迁移、侵袭。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定法检测(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)毛萼乙素作用于T24细胞的增殖,免疫印迹法(Western blot)测定Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达,Transwell法评估T24细胞的迁移、侵袭;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析lncRNA CPS1-IT1表达。T24细胞转染pcDNA-CPS1-IT1、或转染si-CPS1-IT1并给予10μmol/L毛萼乙素,考察T24细胞的增殖、迁移、侵袭变化。结果(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)毛萼乙素增加T24细胞的增殖抑制率和lncRNA CPS1-IT1表达量,减少迁移、侵袭细胞数、Ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白的表达量,呈一定的浓度依赖性,差异均有统计学意义(P<0.05)。lncRNA CPS1-IT1过表达提高T24细胞的抑制率,降低迁移、侵袭细胞数、Ki-67、MMP-2和MMP-9蛋白表达量,差异均有统计学意义(P<0.05)。抑制lncRNA CPS1-IT1表达逆转了毛萼乙素(10μmol/L)对T24细胞增殖、迁移、侵袭的影响。结论毛萼乙素通过上调lncRNA CPS1-IT1表达,抑制膀胱癌T24细胞的增殖、迁移、侵袭。

长链非编码RNA SPRY4-IT1对髓母细胞瘤增殖及侵袭转移的影响

目的:探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1(Lnc RNA)对髓母细胞瘤增殖及侵袭转移的影响。方法:髓母细胞瘤Daoy细胞分为对照组和si-SPRY4-IT1组,分别利用脂质体Lipofectamine 2000将阴性对照荧光序列和SPRY4-IT1-si RNA转入细胞中,采用Real-time PCR检测转染后各组细胞中SPRY4-IT1的表达情况,CCK-8实验及平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化,以细胞体外侵袭、迁移实验分别检测细胞侵袭、迁移能力的变化,Western blot检测SPRY4-IT1对基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白的影响。结果:si-SPRY4-IT1组SPRY4-IT1 m RNA表达水平、细胞体外增殖能力、细胞侵袭、迁移能力、细胞MMP-2蛋白表达均较对照组明显降低(P<0.05),而MMP-9蛋白表达未见明显变化。结论:干扰长链非编码RNA SPRY4-IT1在髓母细胞瘤Daoy细胞中的表达能显著抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力。

lncRNA RUNX1-IT1和miR-195在NSCLC组织中的表达及临床意义

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)RUNX1-IT1和miR-195在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其意义。方法收集2017年5月至2019年5月于武汉某三级甲等医院接受手术治疗的106例NSCLC患者的NSCLC组织及癌旁组织,经实时荧光定量PCR(qPCR)检测lncRNA RUNX1-IT1和miR-195表达水平,分析其与临床病理特征及预后的关系。结果与癌旁组织比较,NSCLC组织lncRNA RUNX1-IT1表达水平明显升高(3.65±0.33 vs.1.04±0.09),miR-195表达水平明显降低(0.46±0.05 vs.1.06±0.11),差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA RUNX1-IT1高表达患者中有淋巴结转移(69.49%vs.29.79%)、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期(72.88%vs.51.06%)、低-中分化(50.85%vs.27.66%)的比例明显高于低表达患者(P<0.05);miR-195低表达患者中有淋巴结转移(74.14%vs.25.00%)、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期(86.21%vs.35.42%)、低-中分化(56.90%vs.20.83%)的比例明显高于高表达患者(P<0.05)。lncRNA RUNX1-IT1高表达患者2年总生存率为35.60%(21/59),低表达患者3年总生存率为64.40%(38/47);miR-195高表达患者3年总生存率为68.75%(33/48),低表达患者3年总生存率为31.25%(15/58)。多因素Cox回归分析结果显示,有淋巴结转移(HR=2.216,95%CI:1.614~4.037)、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期(HR=1.627,95%CI:1.369~3.162)、低-中分化(HR=1.948,95%CI:1.572~4.712)、lncRNA RUNX1-IT1高表达(HR=3.087,95%CI:1.228~4.086)、miR-195低表达(HR=3.227,95%CI:1.936~6.641)是NSCLC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论lncRNA RUNX1-IT1高表达、miR-195低表达预示NSCLC患者预后较差。