LncRNA EIF3J-AS1通过靶向调控miR-597-5p对胃癌细胞增殖、周期分布和凋亡的实验研究

目的探讨LncRNA EIF3J-AS1靶向miR-597-5p对胃癌细胞增殖、周期分布和凋亡的影响。方法RT-qPCR分析LncRNA EIF3J-AS1和miR-597-5p在胃癌组织、癌旁组织、胃癌细胞(SNU-1、AGS、HS-746T)以及人胃黏膜细胞GES1中的表达。将si-LncRNA EIF3J-AS1、si-NC、miR-NC、miR-597-5p mimics、pcDNA、pcDNA-LncRNA EIF3J-AS1、si-LncRNA EIF3J-AS1与anti-miR-NC、si-LncRNA EIF3J-AS1与anti-miR-597-5p分别转染SNU-1细胞,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡率。CCK-8法检测细胞活力。LncRNA EIF3J-AS1和miR-597-5p的靶向关系通过双荧光素酶报告实验来证实。结果胃癌组织中LncRNA EIF3J-AS1表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),miR-597-5p表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。胃癌细胞中LncRNA EIF3J-AS1表达水平显著高于GES1细胞(P<0.05),miR-597-5p表达水平显著低于GES1细胞(P<0.05)。沉默LncRNA EIF3J-AS1表达显著降低细胞活力、S期细胞比例(P<0.05),增加凋亡率和G0/G1期细胞比例(P<0.05),上调miR-597-5p表达水平(P<0.05)。过表达miR-597-5p显著降低细胞活力、S期细胞比例(P<0.05),增加凋亡率和G0/G1期细胞比例(P<0.05)。过表达LncRNA EIF3J-AS1显著降低miR-597-5p表达水平(P<0.05)。LncRNA EIF3J-AS1与miR-597-5p直接特异性结合。抑制miR-597-5p表达显著削弱沉默LncRNA EIF3J-AS1对SNU-1细胞活力、周期分布和凋亡的影响(P<0.05)。结论沉默LncRNA EIF3J-AS1通过靶向上调miR-597-5p可抑制胃癌细胞增殖,阻碍周期进展,并诱导细胞凋亡。

长链非编码RNAEIF3J-AS1通过上调肌动蛋白结合蛋白表达促进肝癌细胞侵袭和迁移能力

目的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)的异常表达与肝癌的发生有密切关系。本研究的目的是探讨lncRNAEIF3J-AS1通过上调肌动蛋白结合蛋白(ANLN)表达促进肝细胞癌(HCC)细胞侵袭和转移中的作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测lncRNA EIF3J-AS1在肝癌组织中的表达情况,分析其与患者临床病理特征的相关性,利用多因素Cox比例风险模型分析影响患者总生存的独立预测因子,利用Kaplan-Meier生存分析方法估计lncRNA EIF3J-AS1高表达组和低表达组患者的总生存期,并使用Log-rank检验方法进行显著性检验。采用transwell实验检测lncRNA EIF3J-AS1对人Huh7和MHCC-97H肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响。采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测lncRNA EIF3J-AS1对ANLN蛋白表达的影响。结果RTFQ-PCR结果提示,lncRNA EIF3J-AS1在肝癌组织中显著上调表达。EIF3J-AS1高表达与肿瘤癌栓(P=0.022)、肿瘤大小(P=0.016)显著相关。多因素Cox比例风险模型分析显示lncRNA EIF3J-AS1表达量(P=0.038)是影响患者总生存的独立预测因子。Kaplan-Meier生存分析显示lncRNA EIF3J-AS1高表达组患者的总生存显著差于低表达组患者(P=0.007)。体外功能实验结果提示,敲减EIF3J-AS1或ANLN抑制人Huh7和MHCC-97H肝癌细胞迁移和侵袭能力。机制研究实验结果提示,在线数据库GEPIA提示EIF3J-AS1与ANLN在肝癌组织中表达正相关(r=0.31,P=1.2 e-0.9),抑制EIF3J-AS1降低了ANLN的mRNA和蛋白表达。结论Lnc EIF3J-AS1通过调控ANLN蛋白表达在肝癌进展中发挥肿瘤促进作用,Lnc EIF3J-AS1有望成为临床肝癌治疗的新靶点。

甲基转移酶样蛋白14介导长链非编码RNA EIF3J反义RNA1对胆管癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨甲基转移酶样蛋白14(METTL14)介导长链非编码RNA EIF3J反义RNA1(lnc EIF3J-AS1)异常表达对胆管癌细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法收集2017年9月至2018年12月间海军军医大学第一附属医院行手术切除并经病理学确诊的10例胆管癌组织及其相应癌旁正常组织,采用荧光定量PCR法检测胆管癌组织METTL14 mRNA和lnc EIF3J-AS1的表达,采用蛋白质免疫印迹法检测METTL14的蛋白表达。选取胆管癌细胞株HUCCT1和RBE,分为对照组和METTL14或lnc EIF3J-AS1敲低组,对照组分别转染相应的阴性对照的慢病毒,METTL14或lnc EIF3J-AS1敲低组分别转染干扰METTL14或lnc EIF3J-AS1表达的慢病毒。采用Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力,采用蛋白质免疫印迹法检测各组细胞表皮生长因子受体(EGFR)和AKT蛋白表达。结果胆管癌组织METTL14 mRNA和lnc EIF3J-AS1表达量均显著高于癌旁正常组织(0.075±0.012比0.031±0.006,0.140±0.032比0.064±0.012),且METTL14 mRNA与lnc EIF3J-AS1表达水平呈正相关(r=0.883,P=0.0007)。胆管癌组织METTL14蛋白表达量高于癌旁正常组织(0.354±0.131比0.187±0.183)。与对照组相比,胆管癌细胞株HUCCT1和RBE METTL14敲减组lnc EIF3J-AS1表达水平明显下降(0.217±0.020比1.000±0.052,0.149±0.066比1.000±0.045)。HUCCT1细胞和RBE细胞lnc EIF3J-AS1敲减组迁移和侵袭能力明显下降(5.00±0.58比23.33±0.33,20.33±0.67比70.67±0.33;12.00±0.58比25.00±2.52,22.33±0.89比43.67±0.33),且EGFR与p-AKT/AKT蛋白表达水平也明显下降(0.109±0.015比1.000±0.018,0.226±0.036比1.000±0.051;0.118±0.052比1.000±0.069,0.132±0.098比1.000±0.023)。以上差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论METTL14介导胆管癌中lnc EIF3J-AS1异常表达可促进肿瘤细胞迁移和侵袭。