Chidamide诱导的LncRNA ENST00000448869.1靶向作用Nestin抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长

目的研究在Chidamide抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞生长中,LncRNA ENST00000448869.1靶向调控Nestin对细胞生长的影响。方法以人乳腺癌MDA-MB-231细胞为研究对象,通过高通量测序进行RNA文库筛查及测序比对分析,筛选经Chidamide处理后存在差异表达的LncRNA;利用蛋白互作生物学软件推测与该LncRNA互作的蛋白质;Muse细胞分析仪检测Chidamide对细胞活力的影响;Real-time PCR和Western blot检测Chidamide作用细胞后LncRNA及其互作蛋白的mRNA和蛋白表达的变化;特异siRNA敲除LncRNA后,Muse细胞分析仪检测细胞活力;Real-time PCR和Western blot检测LncRNA及其互作蛋白的mRNA和蛋白表达变化。结果从LncRNA大数据库筛查出ENST00000448869.1分子经Chidamide处理存在差异表达。蛋白互作生物学软件推测ENST00000448869.1分子与Nestin存在蛋白互作关系。Chidamide作用乳腺癌MDA-MB-231细胞后,抑制其生长,同时LncRNA ENST00000448869.1与Nestin的表达都增高;LncRNA-siRNA转染细胞后,细胞活力明显降低,LncRNA ENST00000448869.1和Nestin的表达都降低。结论在Chidamide处理MDA-MB-231细胞中,LncRNA ENST00000448869.1靶向调控Nestin抑制乳腺癌细胞生长。

LncRNA ENST00000448869.1与Nestin互作拮抗西达苯胺对乳腺癌MCF-7细胞的作用

近年来,组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACi)作为低毒、有效的抗肿瘤药物越来越受到人们的关注,西达苯胺(chidamide)是第三代口服型、针对组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)1、2、3和10亚型的苯胺类的HDACi[1]。西达苯胺通过表观遗传修饰影响乳腺癌细胞的生长[2]。长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)属于一类含有200多个核苷酸的非编码转录物,可以通过与DNA、RNA或蛋白质相互作用,在表观遗传学、转录及转录后水平调控基因的表达,参与多种病理生理过程[3-4]。

lncRNA ENST00000655811.1在胸腺瘤中的表达及对细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响

目的检测lncRNA ENST00000655811.1在胸腺瘤组织中的表达水平,探讨其对细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其作用机制。方法收集2例胸腺瘤组织和癌旁组织,高通量测序技术检测差异表达lncRNA,以实时定量荧光聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qPCR)对上调表达最显著的10个lncRNA进行验证;收集15例胸腺瘤组织、癌旁组织和外周血样本,qPCR检测lncRNA ENST00000655811.1的相对表达量,分析其与临床指标相关性;构建lncRNA ENST00000655811.1过表达质粒以及特异性敲降siRNA转染HEK293、MTEC1细胞,分别使用CCK8、EdU、划痕、transwell、蛋白印迹法和细胞流式实验分析lncRNA ENST00000655811.1对细胞增殖、迁移和凋亡的作用;最后运用生物信息学软件预测lncRNA ENST00000655811.1的靶标miRNA,并以双荧光素酶报告基因实验验证其具体结合位点。结果高通量测序筛选出6436个差异表达lncRNA(上调2404个,下调4032个)。其中上调最为显著的lncRNA ENST00000655811.1在胸腺瘤组织的表达水平明显高于癌旁组织[0.024(0.009,0.058)vs.0.005(0.002,0.030),P=0.0266]。与正常人外周血相比,lncRNA ENST00000655811.1在胸腺瘤患者外周血中表达显著增加[0.025(0.012,0.133)vs.0.002(0.001,0.006),P<0.0001]。胸腺瘤组织中lncRNA ENST00000655811.1表达水平与胸腺瘤分期、病理学分型及是否伴有重症肌无力无明显相关性。在HEK293、MTEC1细胞中,lncRNA ENST00000655811.1显著促进细胞增殖和迁移,并抑制其凋亡。lncRNA ENST00000655811.1通过其951-972碱基位点与miR-619-5p特异性结合。结论lncRNA ENST00000655811.1在胸腺瘤患者癌组织和外周血中表达水平显著上升,lncRNA ENST00000655811.1可能通过miR-619-5p在胸腺瘤细胞中发挥促进细胞增殖、迁移以及抑制凋亡的作用。