LncRNA FENDRR通过调控ERK/MAPK影响肺鳞癌H226细胞增殖、迁移和凋亡

目的探讨lncRNA FENDRR对肺鳞癌细胞H226的增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及分子机制。方法qRT-PCR检测肺正常上皮细胞BEAS、肺腺癌细胞A549、H1299和肺鳞癌细胞H226中FENDRR的表达水平。将H226细胞分为FENDRR-siRNA组和FENDRR-siNC阴性对照组;CCK-8法检测细胞增殖活力,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白表达。结果与肺正常上皮细胞相比,肺鳞癌细胞H226中FENDRR水平明显下降。下调肺鳞癌细胞H226中FENDRR的表达后,p-MEK和p-ERK蛋白表达水平显著增多,H226细胞增殖活力、迁移及侵袭能力显著增加,细胞凋亡率明显降低。加入ERK抑制剂U0126能逆转FENDRR表达下调对H226细胞的作用。结论低表达FENDRR后,可以通过ERK/MAPK信号通路,促进H226细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制其凋亡。

镉暴露宫颈癌细胞恶性转化及lncRNA FENDRR-SNAIL通路的变化

目的探讨镉暴露宫颈癌细胞恶性转化及长链非编码RNA FENDRR(lncRNA FENDRR)-SnaiL同源物(SNAIL)通路的变化。方法将人宫颈癌SiHa细胞暴露于0(对照)、0.25、0.5、1.0 mol/L氯化镉溶液24 h。采用细胞计数试剂盒及甲基紫染色测定细胞增殖水平与单克隆形成数目,采用Transwell法测定细胞侵袭能力,采用划痕试验评估细胞迁移能力,采用膜联蛋白V/碘化丙啶双重染色检测凋亡情况,采用RT-qPCR及蛋白印迹法分别测定细胞lncRNA FENDRR、SNAIL的mRNA和蛋白水平,采用Elisa法测定细胞血管内皮钙黏蛋白(CDH)、E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)、波形蛋白水平。结果不同染毒剂量氯化镉处理宫颈癌SiHa细胞后,增殖率、单克隆形成数目、迁移距离、侵袭数目、SNAIL mRNA和蛋白表达水平、ZEB1和波形蛋白表达水平明显高于对照组,凋亡率、lncRNA FENDRR mRNA表达水平、CDH1蛋白表达水平明显低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.01);且随着氯化镉染毒浓度的增加,增殖率、单克隆形成数目、迁移距离、侵袭数目、SNAIL mRNA和蛋白表达水平、ZEB1和波形蛋白表达水平呈上升趋势,而凋亡率、lncRNA FENDRR m RNA表达水平、CDH1蛋白表达水平呈下降趋势。结论镉可促进宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭,并抑制其凋亡;其机制可能与Cd抑制lncRNA FENDRR表达促进SNAIL表达进而导致宫颈癌细胞发生上皮-间质转化有关。

PM_(2.5)暴露BEAS2B细胞lncRNA FENDRR的表达及其分子机制

目的探讨PM_(2.5)激活人正常支气管上皮细胞(BEAS2B)lncRNA FENDRR基因表达的分子机制。方法将BEAS2B细胞分为4组,PBS对照组(磷酸盐缓冲液),PM_(2.5)组(300μg/ml PM_(2.5)染毒48 h),PM_(2.5)+5-氮杂胞苷(5-Aza C,DNA甲基化转移酶抑制剂)组(300μg/ml PM_(2.5)+5.0μmol/L 5-Aza C),PM_(2.5)+曲古抑菌素A(TSA,组蛋白去乙酰化酶抑制剂)组(300μg/ml PM_(2.5)+0.2μmol/L TSA)。用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测lncRNA FENDRR基因的表达情况,蛋白印迹法(Western Blot)检测HDACs相关蛋白的表达。结果与对照组比较,PM_(2.5)染毒组的BEAS2B细胞lncRNA FENDRR表达上调5.36倍,差异有统计学意义(P<0.05),HDAC1和HDAC2的表达均下降。与PM_(2.5)组比较,PM_(2.5)+TSA组lncRNA FENDRR表达上调2.59倍,差异有统计学意义(P<0.05),HDAC1和HDAC2表达下降。结论 PM_(2.5)通过抑制HDAC1和HDAC2表达,从而激活lncRNA FENDRR基因的表达。

长链非编码RNAFENDRR对宣威肺癌XWLC-05细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:检测非编码RNA FENDRR长链在宣威肺腺癌XWLC-05株细胞与非小细胞肺癌(NSCLC)A549株细胞中的表达,及其对细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:实时荧光定量PCR检测FENDRR基因在XWLC-05与A549细胞中的表达;构建过表达p EX-3-FENDRR质粒并转染XWLC-05细胞,慢病毒干扰LV3-FENDRR载体转染A549细胞,实时荧光定量PCR检测转染后XWLC-05和A549细胞内FENDRR的表达;MTS法检测细胞增殖;Transwell小室法检测细胞迁移及侵袭能力的变化。结果:XWLC-05细胞中FENDRR基因表达明显较A549细胞低,成功提高转染p EX-3-FENDRR的XWLC-05细胞和降低转染LV3-FENDRR质粒的A549细胞中FENDRR m RNA水平。与对照组相比,过表达FENDRR可明显抑制XWLC-05细胞增殖[(1.23±0.13)vs(1.46±0.25),P<0.05]并降低其迁移、侵袭能力(P<0.05);干扰FENDRR表达,能够促进A549细胞增殖[(0.85±0.02)vs(0.77±0.08),P<0.05]、迁移与侵袭能力(P<0.05)。结论:lnc RNA FENDRR表达下调与宣威肺腺癌的发生发展相关,其在肿瘤恶性化过程中抑制肿瘤细胞的增殖与转移。

长链非编码RNA FENDRR在急性胰腺炎患者血清中的表达及意义

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)叉头蛋白F1相邻非编码发育调控RNA(FENDRR)在急性胰腺炎(AP)患者血清中的表达水平及临床意义。方法选择2016年3月至2018年5月在北京大学深圳医院就诊的123例AP患者作为研究对象(设为AP组),另择同期在本院体检的52位健康志愿者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(real-time qPCR)法检测患者血清中lncRNA FENDRR的相对表达量。比较轻症AP(MAP)组与重症AP(SAP)组、生存组与死亡组患者血清中lncRNA FENDRR的相对表达量。分析lncRNA FENDRR与AP病情严重程度及患者预后的关系。结果AP组患者血清lncRNA FENDRR的相对表达量为4.47±1.87,低于对照组(6.66±1.26),差异有统计学意义(P<0.05)。SAP组患者血清lncRNA FENDRR的相对表达量为3.14±1.22,低于MAP组(5.45±1.64),差异有统计学意义(P<0.05)。血清lncRNA FENDRR诊断AP患者病情严重程度的ROC曲线下面积(AUC)为0.869(95%CI0.796~0.923),敏感度为71.15%,特异度为90.14%。单因素及多因素logistic回归分析结果显示,血小板(PLT)、国际标准化比值(INR)、血清钙、乳酸和lncRNA FENDRR与AP患者的预后关系密切。单指标评估AP患者预后结果指出,PLT的评估效能最大AUC=0.813(95%CI0.733~0.878),其次为lncRNA FENDRRAUC=0.784(95%CI0.701~0.853),乳酸的评估效能最小AUC=0.673(95%CI0.583~0.755)。PLT、INR、血清钙、乳酸和lncRNA FENDRR联合检测评估AP患者预后的效能高于各项单独检测的效能。结论血清lncRNA FENDRR的表达水平越低,提示AP患者病情越严重,预后不良风险越高。lncRNA FENDRR可能是AP疾病严重程度和预后评估的潜在生物标志物。

长链非编码RNA DEANR1等在肺癌中的表达

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)DEANR1、INXS、ANCR、FENDRR等在肺癌中的表达。方法选取2018年1~6月昆明医科大学第三附属医院收治的54例肺癌患者,其中鳞癌、腺癌、肺小细胞癌分别为28、22、4例。经手术获取癌组织、癌旁正常组织、肺癌淋巴结转移组织,提取总RNA,并采用SYBR Green实时荧光定量PCR检测基因的RNA表达量。结果 DEANR1、INXS、ANCR在癌组织中的相对表达量均高于癌旁正常组织(P <0.05)。淋巴结组织中ANCR、INXS的相对表达量与ki-67呈正相关(r=0.757,P=0.049;r=0.802,P=0.030)。结论 DEANR1、INXS、ANCR在癌组织中的相对表达量均升高,可能在肺癌的发生发展中起到促进作用,ANCR、INXS在淋巴结中的表达与ki-67呈正相关,可能与肺癌淋巴结转移及不良预后有关。

荞麦花叶芦丁对高糖诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响

目的探讨荞麦花叶芦丁对高糖诱导的人晶状体上皮细胞损伤的影响及其对LncRNA FENDRR/miR-146b-3p分子轴的调控作用。方法采用高糖诱导人晶状体上皮细胞建立细胞损伤模型(Model组),分别加入不同剂量的荞麦花叶芦丁处理细胞;实验分组:Con组、Model+si-NC组、Model+si-FENDRR组、Model+miR-NC组、Model+miR-146b-3p组、Model+荞麦花叶芦丁+anti-miR-NC组、Model+荞麦花叶芦丁+anti-miR-146b-3p组;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;根据试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的水平;采用qRT-PCR法检测FENDRR与miR-146b-3p的表达量;双荧光素酶报告基因实验检测FENDRR与miR-146b-3p的靶向关系;采用Western印迹检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达量。结果与Con组比较,Model组细胞凋亡率、Bax、MDA、FENDRR表达水平升高(P<0.05),miR-146b-3p、Bcl-2水平与SOD的活性降低(P<0.05);与Model组比较,荞麦花叶芦丁不同剂量组细胞凋亡率、Bax、MDA、FENDRR水平降低(P<0.05),miR-146b-3p、Bcl-2、SOD水平升高(P<0.05);与Model组、Model+si-NC组比较,Model+si-FENDRR组细胞凋亡率与Bax、MDA的水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平与SOD的活性及miR-146b-3p表达水平升高(P<0.05);FENDRR可靶向调控miR-146b-3p;与Model组、Model+miR-NC组比较,Model+miR-146b-3p组细胞凋亡率、Bax、MDA水平降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平与SOD的活性升高(P<0.05),而抑制miR-146b-3p可逆转荞麦花叶芦丁对高糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡及氧化应激的作用。结论荞麦花叶芦丁可通过下调FENDRR的表达而上调miR-146b-3p的表达从而抑制细胞凋亡及氧化应激进而减轻高糖诱导的人晶状体上皮细胞损伤。

长链非编码RNA FENDRR对前列腺癌DU-145细胞生物学行为的影响

目的探讨长链非编码RNA FENDRR对前列腺癌DU-145细胞生物学行为的影响。方法 realtime PCR方法检测前列腺癌细胞株DU-145和正常前列腺上皮细胞RWPE-1中FENDRR的表达水平。构建FENDRR基因表达载体pcDNA-FENDRR并转染DU-145细胞,real-time PCR方法验证转染效率。FENDRR基因过表达后,平板克隆实验实验检测DU-145细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测DU-145细胞的凋亡率;划痕实验与Transwell实验检测DU-145细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 FENDRR在前列腺癌细胞株DU-145中的表达明显低于正常前列腺上皮细胞RWPE-1(P<0.01)。pcDNA-FENDRR转染显著上调DU-145细胞中FENDRR mRNA的表达。FENDRR基因过表达后,DU-145细胞的增殖、迁移与侵袭能力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。结论过表达lncRNA FENDRR能够抑制前列腺癌DU-145细胞增殖、迁移与侵袭,并促进凋亡,在前列腺癌中发挥肿瘤抑制基因的作用。