LncRNA GAS5通过miR-21调控脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制研究

目的 明确长链非编码RNA生长阻滞特异性转录因子5(LncRNA GAS5)与微小RNA-21(miR-21)的关系,阐明LncRNA GAS5调控miR-21参与脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制。方法 建立脊髓损伤大鼠和氧糖剥夺复氧(OGD/R)处理的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC-12)模型;沉默和过表达GAS5,构建下调shGAS5表达的慢病毒,通过生物信息学分析预测LncRNA GAS5与miR-21存在结合位点等。通过双荧光素酶报告基因实验等探究GAS5与miR-21的结合位点;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-21、GAS5、同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)基因、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2相关X基因(Bax)、Bcl-2和蛋白激酶B(AKT)的RNA表达水平;Western blot检测Cleaved caspase 3、Bax、Bcl-2、AKT和磷酸化AKT(p-AKT)的蛋白表达水平;TUNEL技术检测神经细胞凋亡程度。结果 大鼠脊髓损伤后脊髓中miR-21、Bcl-2及pAKT表达水平降低(P<0.05),GAS5、PTEN、Bax及Cleaved caspase-3表达均升高(P<0.05)。PC-12体外培养与OGD/R损伤后出现与大鼠脊髓损伤模型类似结果,且于OGD/R处理后2 h最显著。GAS5可通过碱基互补配对方式结合miR-21,进而调控下游PTEN信号通路。下调GAS5或过表达miR-21可抑制PC-12细胞凋亡(P<0.05)。结论 GAS5通过结合miR-21,上调PTEN并抑制AKT磷酸化,进而促进脊髓损伤诱导的神经细胞凋亡。

原发性膜性肾病患者外周血lncRNA GAS5-AS1、白细胞介素-27表达及与Treg/Th17平衡的关系

目的检测原发性膜性肾病(primary membranous nephropathy,PMN)患者外周血长链非编码RNA-生长停滞特异性转录本5反义RNA1(long non-coding RNA growth arrest-specific transcript 5 antisense RNA1,lncRNA GAS5-AS1)、白细胞介素(interleukin,IL)-27表达,并分析其与患者调节性T细胞/辅助性T细胞17(regulatory T cell/T help 17cells,Treg/Th17)平衡的关系。方法选择2019年9月至2020年9月间河北以岭医院收治的PMN患者94例作为PMN组。另选取同期体检健康者96例作为对照组。收集所有研究对象外周血标本,实时荧光定量PCR(realtime quantitative PCR,qRT-PCR)法测定血清lncRNA GAS5-AS1水平、酶联免疫吸附法(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)法测定IL-27、IL-17、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-10、转化生长因子β1(transforming growth factor betal,TGF-β1)水平,流式细胞仪测定外周血Treg细胞、Th17细胞比例,并计算Treg/Th17比值。Pearson法分析PMN患者lncRNA GAS5-AS1、IL-27水平与IL-17、TNF-α、IL-10、TGF-β1、Treg/Th17的相关性。结果对照组血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)为(4.03±0.66)mmol/L,PMN组患者BUN为(6.52±1.05)mmol/L;对照组血尿酸(uric acid,UA)为(266.13±44.35)μmol/L,PMN组患者UA为(338.92±56.45)μmol/L;对照组胱抑素C(cystatin C,Cys C)为(0.72±0.12)mg/L,PMN组患者Cys C为(1.38±0.23)mg/L;对照组抗磷脂酶A2受体抗体(phospholipase A2 receptor antibody,PLA2R-Ab)为(9.37±1.92)RU/mL,PMN组患者PLA2R-Ab为(32.92±6.19)RU/mL;对照组24 h尿蛋白定量(0.11±0.02)g,PMN组患者24 h尿蛋白定量(7.96±0.94)g;对照组lncRNA GAS5-AS1为(1.02±0.17),PMN组患者lncRNA GAS5-AS1为(3.46±0.56);对照组IL-27为(62.71±10.44)ng/L,PMN组患者IL-27为(124.76±20.77)ng/L;对照组Th17为(0.75±0.12)%,PMN组患者Th17为(4.86±0.81)%;对照组Th17/Treg为(0.11±0.02),PMN组患者Th17/Treg为(1.43±0.23)。对照组肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)为(109.22±14.85)mL·min^(−1)·(1.73 m^(2))^(−1),PMN组患者GFR为(57.47±10.24)mL·min^(−1)·(1.73 m^(2))^(−1);对照组Treg水平为(6.42±1.07)%,PMN组患者Treg水平为(3.21±0.53)%。不同危险程度PMN患者Th17/Treg、IL-17、TNF-α、IL-10、TGF-β1、lncRNA GAS5-AS1、IL-27水平差异均有统计学意义(P<0.05);PMN患者外周血lncRNA GAS5-AS1与Th17/Treg、IL-17、TNF-α正相关(r=0.632、0.554、0.572,P<0.05),与IL-10负相关(r=−0.468,P<0.05);IL-27与Th17/Treg、IL-17正相关(r=0.581、0.602,P<0.05),与IL-10、TGF-β1负相关(r=−0.533、−0.436,P<0.05)。结论PMN患者血清lncRNA GAS5-AS1、IL-27均高表达,二者均调节Th17/Treg免疫平衡,在PMN中发挥重要作用,有望成为PMN的研究靶点。

生物信息学分析miR-221/26a、lncRNA GAS5和RECK mRNA在结直肠癌转移中的作用

目的基于生物信息学筛选结直肠癌转移相关的mRNA、miRNA及lncRNA,分析其在结直肠癌转移中的作用。方法通过生物信息学方法筛选出与结直肠癌转移相关的mRNA、miRNA及lncRNA,采用荧光定量PCR(qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测筛选出的miR-221/26a、lncRNA GAS5和回复引导半胱氨酸丰富蛋白Kazal基元(RECK)mRNA在结直肠癌组织中的表达;构建lncRNA GAS5过表达和沉默细胞株验证miRNA、lncRNA和RECK相互关系。结果软件预测结果显示miR-221/26a可以跟RECK mRNA结合,lncRNA GAS5可同时结合miR-221/26a;qPCR结果显示miR-221/26a在结直肠癌组织中的表达高于相应的癌旁组织(P<0.001、或0.05),而lncRNA GAS5在结直肠癌中表达水平降低(P<0.001);成功构建GAS5过表达和沉默细胞株后,结果显示过表达GAS5时miR-221/26a含量下降(P<0.011,或<0.05),RECK蛋白含量降低;而沉默GAS5会上调miR-221/26a含量(P<0.05),促进RECK蛋白表达。结论miR-221/26a与lncRNA GAS5在结肠癌肿瘤组织均存在异常表达,并可能影响RECK蛋白表达进而影响结直肠癌肿瘤的转移。

藤黄酸通过增加lncRNA GAS5水平抑制卵巢癌细胞的增殖、炎症反应和转移标志物表达

目的藤黄酸(Gambogic acid,GA)可在卵巢癌中扮演抗癌作用,但其抗癌的分子机制并不清楚。本研究旨在探讨卵巢癌细胞中藤黄酸抗癌的分子机制。方法RT-qPCR检测12例卵巢癌组织和癌旁正常组织中非编码RNA(lncRNA GAS5)的表达;将具有稳定沉默GAS5的siRNA-GAS5(si-GAS5)和藤黄酸试剂共处理卵巢癌细胞系SW626,RT-qPCR检测GAS5、miR-21、MMP-2和MMP-9 mRNA表达变化。细胞增殖使用CCK-8试剂盒进行测定。Western blot法检测转移标记物MMP-2、MMP-9、VEGF和靶基因侧支发芽因子同源物2(Sprouty homolog2,SPRY2)的表达,ELISA试剂盒法检测IL-6和IL-1β在细胞培养物上清中水平。结果卵巢癌细胞和组织中GAS5表达降低(P<0.05),藤黄酸处理SW626细胞24 h,上调GAS5表达(P<0.05),抑制SW626增殖能力(P<0.05),下调MMP2、MMP-9、VEGF的表达及IL-6和IL-1β的分泌(P<0.05)。藤黄酸减少细胞核磷酸化p65水平(P<0.05)。在藤黄酸处理细胞的基础上沉默GAS5,可部分逆转藤黄酸的上述功能(P<0.05)。另外,藤黄酸抑制miR-21的水平并上调SPRY2的表达(P<0.05)。结论藤黄酸通过上调GAS5抑制卵巢癌细胞的增殖、炎症反应、转移能力。

lncRNA H19和lncRNA GAS5在急性缺血性脑卒中的表达及临床意义

目的本研究旨在检测长链非编码RNA H19和生长阻滞特异转录物5(GAS5)在急性缺血性脑卒中(IS)患者单个核细胞(PBMC)、大脑中动脉闭塞模型(MCAO)大鼠脑皮质组织和氧糖剥夺再灌注(OGD/R)模型PC12细胞的表达水平,探讨其作为IS分子诊断指标的可行性。方法收集23例IS组患者和33例健康对照外周血,提取PBMC,采用实时定量PCR(qPCR)检测PBMC中lncRNA H19和GAS5的表达水平。进一步构建大鼠MCAO模型和PC12细胞OGD/R模型,qPCR分别检测lncRNA H19和GAS5在大鼠脑皮质和PC12细胞中的表达。结果 qPCR结果显示,IS组患者PBMC的lncRNA H19表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。IS组患者PBMC中的lncRNA GAS5表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。和假手术组相比,MCAO模型大鼠缺血脑皮质lncRNA H19和lncRNA GAS5表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞实验结果表明,PC12细胞在OGD/R后,lncRNA H19和lncRNA GAS5表达水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论lncRNA H19和lncRNA GAS5在IS表达升高,有望成为诊断IS的生物标志物。

白杨素调控lncRNA GAS5表达对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞损伤的影响

目的研究白杨素对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)损伤的影响,并探讨其机制是否与调控长链非编码RNA(lncRNA)生长抑制特异性转录本5(GAS5)表达有关。方法采用30 mmol/L葡萄糖诱导HRMECs建立细胞损伤模型。将细胞分为9组:正常组(NC)、高糖组(HG)、白杨素低剂量组(LCG)、白杨素中剂量组(MCG)、白杨素高剂量组(HCG)、pcDNA组、pcDNA-GAS5组、HCG+GAS5小干扰RNA(si-GAS5)组、HCG+si-NC组。采用CCK-8法和流式细胞术分析细胞活力和凋亡,检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量,实时定量PCR检测GAS5表达量。结果(1)GAS5表达:HG组与NC组比较降低(t=45.322,P=0.000),与MCG组比较降低(t=17.391,P=0.000),与HCG组比较降低(t=36.363,P=0.000),差异均有统计学意义;(2)MDA含量:HG组与NC组比较升高(t=36.123,P=0.000),与MCG组比较升高(t=7.510,P=0.002),与HCG组比较升高(t=27.228,P=0.000);pcDNA组与pcDNA-GAS5组比较升高(t=24.231,P=0.000);HCG+si-GAS5组与HCG+si-NC组比较升高(t=21.766,P=0.000),差异均有统计学意义;(3)SOD活性:HG组与NC组比较降低(t=26.923,P=0.000),与MCG组比较降低(t=12.231,P=0.000),与HCG组比较降低(t=22.654,P=0.000);pcDNA组与pcDNA-GAS5组比较降低(t=29.259,P=0.000);HCG+si-GAS5组与HCG+si-NC组比较降低(t=19.410,P=0.000),差异均有统计学意义;(4)凋亡率:HG组与NC组比较升高(t=36.811,P=0.000),与MCG组比较升高(t=8.896,P=0.001),与HCG组比较升高(t=24.091,P=0.000);pcDNA组与pcDNA-GAS5组升高(t=26.321,P=0.000);HCG+si-GAS5组与HCG+si-NC组比较升高(t=14.135,P=0.000),差异均有统计学意义;(5)细胞活力(48 h、72 h):HG组与NC组比较降低(t_(48h)=9.507,P=0.001;t_(72h)=16.089,P=0.000),与MCG组比较降低(t_(48h)=4.406,P=0.012;t_(72h)=6.689,P=0.003),与HCG组比较降低(t_(48h)=7.884,P=0.001;t_(72h)=12.835,P=0.000);pcDNA组与pcDNA-GAS5组比较降低(t_(48h)=7.323,P=0.002;t_(72h)=13.244,P=0.000);HCG+si-GAS5组与HCG+si-NC组比较降低(t_(48h)=4.909,P=0.008;t_(72h)=9.581,P=0.001),差异均有统计学意义。结论白杨素能够减弱高糖诱导的HRMECs凋亡和氧化应激损伤,其机制可能是通过上调lncRNA GAS5表达实现的。

过表达LncRNA GAS5对SD大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响

目的应用长链非编码RNA GAS5(LncRNA GAS5)过表达质粒(pEGFP-C1-GAS5)转染SD大鼠心肌成纤维细胞,观察其对心肌成纤维细胞活化增殖的影响。方法提取SD大鼠心肌成纤维细胞,转化生长因子β1(TGF-β1)刺激其增殖,分为pEGFP-C1-GAS5组、阴性对照组和空白对照组,应用LncRNA GAS5基因的过表达质粒(pEGFP-C1-GAS5)通过脂质体瞬时转染细胞,48 h后收获细胞。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测GAS5、Ⅰ型胶原前胶原(Col1A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达,Western blot分析Col1A1和α-SMA蛋白表达变化,MTT法检测细胞增殖活力。结果 TGF-β1刺激心肌成纤维细胞后,qRT-PCR结果显示LncRNA GAS5的表达量较正常组下降(P<0.05);与阴性对照组和空白对照组比较,转染了pEG-FP-C1-GAS5的实验组,qRT-PCR结果显示实验组的GAS5表达均明显升高(P<0.05),同时α-SMA和Col1A1 mRNA表达显著降低(P<0.05);Western blot结果显示转染pEG-FP-C1-GAS5的实验组α-SMA和Col1A1蛋白表达量均明显降低(P<0.05);MTT法检测结果表明在实验组心肌成纤维细胞的增殖活力低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论过表达LncRNA GAS5可显著降低心肌成纤维细胞的增殖活力,提示GAS5有抑制心肌成纤维细胞的活化增殖的作用,为以后进一步研究提供依据。

敲减lncRNA Gas5减轻小鼠脑外伤继发性脑水肿及神经元损伤

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(long non-coding RNA growth arrest speci fic transcript 5,lncRNA Gas5)在创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)小鼠模型中继发的脑水肿及神经元损伤中的作用。方法应用自由落体打击法制作小鼠TBI模型,脑内注射shRNA靶向lncRNA Gas5的腺病毒(AAV-sh-GAS5)用来敲减lncRNA Gas5,RT-qPCR检测脑组织中lncRNA Gas5的表达水平,功能性MRI成像评估脑区域的表观弥散系数(apparent dispersion coefficient,ADC)和脑血流量(cerebral blood flow,CBF),TUNEL法测定脑组织TUNEL阳性细胞数,免疫组织化学法检测脑组织中Cleaved caspase-3阳性细胞数,Western blot法检测脑组织中Bax和Cyt c水平。结果TBI后,小鼠脑组织中lncRNA Gas5表达水平随着时间递增。在TBI后24h,敲减脑lncRNA Gas5能抑制TBI诱导的脑组织中TUNEL阳性细胞数和Cleaved caspase-3阳性细胞数增加,缓解ADC值和CBF值增高,抑制TBI导致的Bax转位和Cyt c释放。结论敲减脑lncRNA Gas5对TBI小鼠有明显的神经保护作用,lncRNA Gas5可以作为治疗TBI后脑水肿及神经元损伤的一个潜在治疗靶点。

肉苁蓉总苷通过调控lncRNA GAS5保护神经细胞缺血再灌注损伤

目的 探讨肉苁蓉总苷对神经细胞缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用。方法 体外培养PC12细胞,以氧糖剥离再复氧复糖培养模拟脑缺血再灌注损伤过程。设置对照组,I/R组,肉苁蓉总苷低、中、高剂量组,si-NC组,si-生长停滞特异性转录本5(GAS5)组,肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA组,肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA-GAS5组。细胞计数试剂盒(CCK-8)、流式细胞术、蛋白质印记(Western blot)检测细胞活力、凋亡以及pro-caspase3、cleaved-caspase3蛋白表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测lncRNA GAS5表达,试剂盒检测细胞上清液中TNF-α、IL-6水平。结果 与对照组比较,I/R组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达降低,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白、lncRNA GAS5表达及上清液中TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05);与I/R组比较,肉苁蓉总苷中、高剂量组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达升高,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白、lncRNA GAS5表达及上清液中TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05);与si-NC组比较,si-GAS5组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达升高,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白表达及上清液中TNF-α、IL-6水平降低(P<0.05);与肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA组比较,肉苁蓉总苷高剂量+pcDNA-GAS5组细胞活力、pro-caspase3蛋白表达降低,凋亡率、cleaved-caspase3蛋白表达及上清液中TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05)。结论 肉苁蓉总苷通过下调lncRNA GAS5表达对神经细胞缺血再灌注损伤具有保护作用。

LncRNA GAS5与肾脏病发生关系

最新研究发现,生长抑制特异性转录本5(growth arrest-specific transcript 5,GAS5)在多种急、慢性疾病的发生和发展过程中具有重要调控作用。研究显示,GAS5能够调控细胞增殖、凋亡、细胞周期等生命过程,与急性心肌梗死、缺血性脑卒中、高血压等多种疾病发生、发展及治疗密切相关,推测其有望成为疾病精准靶向治疗的新靶标。本文就GAS5在肾脏病中的相关研究进展进行综述。

LncRNA GAS5在足细胞损伤中的作用研究

足细胞损伤是导致肾小球疾病蛋白尿持续发生和慢性肾脏疾病进展的关键危险因素。近年来,LncRNA GAS5在影响细胞存活或死亡中的功能已引起越来越多的关注,LncRNA GAS5参与了足细胞的损伤,学者们一直在不断探讨其参与足细胞损伤的作用机制。在此,本文概述LncRNA GAS5的结构和生物学功能及其参与足细胞损伤的作用机制,以更加全面有效地认识足细胞损伤发生发展的分子机制,从而为足细胞损伤与修复提供不可或缺的理论依据。

lncRNA GAS5与JAK1/STAT3信号通路对大鼠心肌细胞缺氧损伤影响

目的探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(growth arrest specific transcript 5 long non-coding RNA growth arrest specific transcript 5,lncRNA GAS5)与JAK1/STAT3信号通路在大鼠心肌H9C2细胞缺氧损伤中的调控作用,为心血管疾病的治疗提供实验基础。方法通过缺氧培养建立体外缺氧模型,以正常培养的H9C2细胞为对照,用RT-qPCR方法检测GAS5的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,ELISA法检测炎症细胞因子,CCK-8法用于测定细胞活力。通过细胞活力、凋亡和炎症反应的变化来评估下调GAS5对缺氧心肌细胞的影响。采用RT-qPCR检测JAK1/STAT3信号通路中mRNA的表达,用酪氨酸激酶抑制剂(AG490)抑制JAK1/STAT3信号通路,探讨JAK1/STAT3信号通路对GAS5的表达水平缺氧细胞活力、凋亡和炎症的影响。结果(1)缺氧能够减低H9C2细胞活力,增加细胞凋亡和炎症的发生;(2)GAS5在缺氧诱导的细胞中表达较高,在缺氧H9C2细胞中下调GAS5可抑制细胞凋亡和炎症细胞因子,促进细胞活力;(3)JAK1/STAT3信号通路在缺氧细胞中被激活,并受到GAS5的调控。当JAK1/STAT3信号通路受到抑制时细胞活力会明显增加,细胞凋亡和炎症的发生会明显降低。结论GAS5可通过JAK1/STAT3信号通路调控H9C2细胞的缺氧损伤,GAS5的抑制剂可能与酪氨酸激酶抑制剂协同作用,保护心肌细胞免受缺氧损伤。

儿童淋巴瘤患者化疗前后血液中lncRNA GAS5水平变化的临床意义

目的:探究儿童淋巴瘤患者化疗前后血液中长链非编码RNA GAS5(lncRNA GAS5)水平变化的临床意义。方法:收集淋巴瘤患儿(81例)及健康儿童(52例)的血液样本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组样本血液中的lncRNA GAS5含量。分析不同临床分期儿童淋巴瘤化疗有效和无效患儿血液中lncRNA GAS5表达及凝血功能在化疗前后的变化差异。淋巴瘤患儿血液中lncRNA GAS5水平与凝血指标的相关性利用皮尔森(Pearson)相关性分析。结果:患儿组lncRNA GAS5水平与凝血指标均显著高于对照组(P<0.01);淋巴瘤Ⅰ-Ⅱ期(n=45)与Ⅲ-Ⅳ期(n=36)患儿的lncRNA GAS5水平以及凝血功能间无统计学差异(P>0.05);化疗有效患儿(n=60)化疗后凝血指标及lncRNA GAS5水平与化疗前相比均显著降低(P<0.01);而化疗无效患儿组凝血指标lncRNA GAS5水平化疗前后差异无统计学意义(P>0.05)。lncRNA GAS5水平分别与PT(r^(2)=0.792)、APTT(r^(2)=0.776)和FIB含量(r^(2)=0.750)呈正相关(P<0.001)。结论:血液中lncRNA GAS5水平可能是反映淋巴瘤患儿化疗疗效和血栓发生风险的潜在标志物。

LncRNA GAS5基因启动子区5 bp插入/缺失多态性在广西地区人群中的分布

目的 探讨广西地区人群中LncRNA GAS5 基因启动子区1个功能性插入/缺失位点(rs145204276I/D)多态性的分布特点,并分析广西地区人群与其他地区人群rs145204276I/D位点多态性的分布差异。方法 采用SNPscan技术对289例广西地区人群 GAS5 基因rs145204276I/D位点进行基因分型检测,统计其基因型和等位基因在广西地区人群不同性别间的分布,并分析其多态性与国际千人基因组计划(1000 genome project)数据库公布的欧洲人群(European,EUR)、日本人群(Japanese in Tokyo;JPT,)、西亚人群(South Asian,SAS)、美国人群(Ad Mixed American,AMR)、非洲人群(African,AFR)、北京人群(Han Chinese in Beijing,CHB)以及文献报道的南京、吉林、重庆和昆明人群的分布差异。结果 广西地区人群 GAS5 基因rs145204276I/D位点I/I、I/D和D/D基因型频率分别为48.4%、43.6%和8.0%,I和D等位基因频率分别为70.2%和 29.8%。rs145204276I/D基因型和等位基因频率在广西地区人群不同性别间比较差异无统计学意义( P >0.05)。广西地区人群 GAS5 基因rs145204276I/D位点的基因型和等位基因频率与EUR、AFR、AMR和JPT人群比较差异均有统计学意义( P 均<0.05 ),而与CHB、南京、吉林、重庆和昆明人群比较差异均无统计学意义( P > 0.05 )。结论 广西地区人群LncRNA GAS5 基因rs145204276I/D位点基因多态性在男性和女性人群中分布无差异,而其多态性与其他地区人群间比较存在不同程度的差异。

lncRNA GAS5调控Notch通路对骨髓间充质干细胞软骨分化的影响

目的观察长链非编码RNA(lncRNA)生长停滞特异性转录本5(GAS5)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)软骨分化的影响,并探讨其机制是否与Notch通路有关。方法分离、培养大鼠BMSCs,并经倒相差显微镜观察细胞形态及流式细胞仪检测表面标志物表达鉴定证实。将第3代BMSCs分为对照组、p-EGFP-C1组(转染p-EGFP-C1空载体质粒)、p-EGFP-C1-lncRNAGAS5组(转染p-EGFP-C1-lncRNAGAS5过表达质粒)、p-EGFP-C1-lncRNAGAS5+DAPT组[转染p-EGFP-C1-lncRNAGAS5过表达质粒+100 ng/mLNotch信号通路特异性阻断剂2,4-二氨基-5-苯噻唑(DAPT)],采用qRT-PCR法检测各组细胞lncRNAGAS5表达。各组细胞进行软骨分化诱导,HE染色观察细胞形态及数量,免疫细胞化学法检测Ⅱ型胶原纤维α1(COL2a1)、蛋白聚糖(Aggrecan)阳性表达率,Westernblotting法检测Notch1和兔抗Split多毛增强子1(Hes-1)蛋白表达。结果p-EGFP-C1-lncRNAGAS5组、p-EGFP-C1-lncRNAGAS5+DAPT组细胞lncRNAGAS5相对表达量均明显高于对照组、p-EGFP-C1组(P均<0.05)。各组细胞均呈软骨细胞形态改变,即呈三角或多角形,细胞核为蓝紫色,细胞质和细胞外基质为红色,成团生长;p-EGFP-C1-lncRNAGAS5组与p-EGFP-C1-lncRNAGAS5+DAPT组软骨细胞数量明显多于对照组和p-EGFP-C1组,以p-EGFP-C1-lncRNAGAS5+DAPT组软骨细胞数量最多。与对照组及p-EGFP-C1组比较,p-EGFP-C1-lncRNAGAS5组及p-EGFP-C1-lncRNA GAS5+DAPT组细胞COL2a1、Aggrecan阳性表达率均升高,Notch1、Hes-1蛋白相对表达量均降低,且p-EGFP-C1-lncRNAGAS5+DAPT组变化更明显(P均<0.05)。结论lncRNAGAS5可通过抑制Notch通路激活来促进BMSCs的软骨分化。

胃癌相关LncRNA Gas5/miRNA信号通路的研究进展

胃癌是消化系统中好发的恶性肿瘤之一。近年来,随着临床诊疗技术的提高,胃癌的5年生存率有了显著上升趋势,而进展期胃癌预后仍不理想。明确胃癌发病的分子机制与寻找新的分子靶点成为胃癌治疗中的关键。本文归纳了近年来国内外学者对长链非编码RNA Gas5在胃癌患者中通过调控相关miRNA表达影响胃癌发生发展的研究,指出LncRNA Gas5在胃癌中的表达机制,及其对相关miRNA影响的主要研究进展,并就该分子机制在胃癌生长、增殖、转移、预后等过程中起到的临床诊疗意义进行探讨。

血清lncRNA GAS5水平与2型糖尿病患者心血管疾病风险的相关性

目的 探讨2型糖尿病患者血清长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(lncRNA GAS5)与心血管疾病(CVD)风险的相关性。方法 选取2017年8月至2019年6月河北中石油中心医院收治的2型糖尿病患者248例,根据随访2年期间是否发生CVD将患者分为CVD组106例和非CVD组142例。血清lncRNA GAS5与一般资料及实验室指标相关性采用Pearson法及Spearman法分析;血清lncRNA GAS5水平对2型糖尿病患者CVD的预测价值采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析;影响2型糖尿病患者发生CVD的因素采用单因素及多因素Logistic回归分析。结果 CVD组体质量指数(BMI)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)高于非CVD组,血清lncRNA GAS5低于非CVD组,差异有统计学意义(t=4.727、8.133、12.360,P<0.05)。2型糖尿病并发CVD患者血清lncRNA GAS5与BMI、舒张压、LDL-C、甘油三酯(TG)呈负相关(r=-0.524、-0.508、-0.496、-0.486,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清lncRNA GAS5预测2型糖尿病患者CVD的曲线下面积(AUC)为0.844(95%CI:0.795~0.892),特异性为0.82%,敏感度为0.75%。多因素Logistic回归分析结果显示,BMI是2型糖尿病患者发生CVD的独立危险因素(P<0.05),lncRNA GAS5是2型糖尿病患者发生CVD的保护因素(P<0.05)。结论 血清lncRNA GAS5与2型糖尿病患者CVD的发生有关,可能作为2型糖尿病CVD风险的预测指标。

IgA肾病血清lncRNA lnc-TSI、lncRNA GAS5表达及与病情程度的相关性分析

目的:探究IgA肾病(IgAN)血清长链非编码核糖核酸-lnc-TSI(lncRNA lnc-TSI)、长链非编码核糖核酸-生长停滞特异基因5(lncRNA GAS5)表达及与病情程度的相关性。方法:收集2019年1月-2021年1月四川绵阳四○四医院收治的125例IgAN患者的临床资料及血液样本,按照肾间质纤维化(RIF)程度不同分为轻度组(光镜下RIF面积<25%)、中度组(光镜下RIF面积25%~50%)、重度组(光镜下RIF面积>50%),另选35例体检健康人员血液样本作为对照组。比较各组血清lncRNA lnc-TSI、lncRNA GAS5水平,并分析其与IgAN患者肾功能及RIF程度关系。结果:IgAN患者各组24h尿蛋白、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)均高于对照组,肾小球滤过率(eGFP)低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);且随RIF程度增加,24 h尿蛋白、Scr、BUN逐渐升高,eGFR逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05);随着RIF程度增加,血清lncRNA lnc-TSI、lncRNA GAS5表达水平逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,IgAN患者血清lncRNA lnc-TSI、lncRNA GAS5水平与RIF程度呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:血清lncRNA lnc-TSI、lncRNA GAS5表达水平在IgAN患者中较低,且与患者RIF程度具有一定相关性,能有效监测和评估患者病情进展。

枢经推拿对神经病理性疼痛大鼠TLR8/ERK信号通路及LncRNA-GAS5的影响及作用机制研究

背景近年来,枢经推拿在治疗神经病理性疼痛方面展现出较好的疗效,但其具体作用机制尚未充分阐明。目的以L5脊神经结扎而成的神经病理性疼痛大鼠模型为观察对象,根据各项研究指标观察枢经推拿对大鼠的镇痛作用,探讨其是否通过影响长链非编码RNA-生长阻滞特异性转录因子5(LncRNA-GAS5)进而调控脊髓背角神经元凋亡达到镇痛效果。方法实验于2021年1—6月在广西中医药大学、广西大学动物医学实验中心完成。选取健康雌性SD大鼠120只,按随机数字表法分为正常组、模型组、假手术组、假推拿组和枢经推拿组,每组24只;模型组、假手术组、假推拿组和枢经推拿组通过结扎L5脊神经来制备神经病理性疼痛大鼠模型。造模24 h后,假手术组暴露L5脊神经几分钟,不予结扎,逐层缝合关闭伤口;假推拿组轻抚大鼠双后肢18 min;枢经推拿组用自备按摩仪循序刺激两侧足少阳胆经上的环跳、阳陵泉、悬钟三穴,刺激力量为5 N,频率2 Hz,每穴、每法干预1 min,双侧6个穴位,3种手法,共计18 min;正常组、模型组正常喂养及观察,不施加任何干预。于造模前及造模后1、3、7、14 d分别进行行为学检测(机械缩足反射阈值、热缩足反射潜伏期);分别于干预7、14 d,随机抽取12只进行取材检测脊髓组织中介导TLR8/ERK信号通路相关蛋白表达情况[脊髓组织B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Caspase-3、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、Toll样受体8(TLR8)蛋白表达水平,LncRNA-GAS5、miR-21基因表达水平)]。结果(1)行为学方面,模型组、假推拿组、枢经推拿组大鼠造模后1、3、7、14 d机械缩足反射阈值均低于正常组(P<0.05);假手术组、假推拿组、枢经推拿组的机械缩足反射阈值在造模后14 d均高于模型组(P<0.05);假手术组、枢经推拿组造模后7、14 d机械缩足反射阈值高于假推拿组(P<0.05)。假手术组、枢经推拿组在造模后1、3、7 d热缩足反射潜伏期均低于正常组(P<0.05);假手术组、假推拿组、枢经推拿组在造模后7、14 d热缩足反射潜伏期均长于模型组(P<0.05);假手术组、枢经推拿组在造模后14 d热缩足反射潜伏期长于假推拿组(P<0.05)。(2)信号通路相关蛋白以及基因表达水平方面,造模后7 d,正常组Bcl-2蛋白表达水平低于其余各组(P<0.05);枢经推拿组的Bcl-2蛋白表达水平高于模型组,Caspase-3、ERK、TLR8蛋白表达水平均低于模型组(P<0.05);枢经推拿组的Bcl-2、Caspase-3、ERK、TLR8蛋白表达水平低于假手术组、假推拿组(P<0.05);造模后14 d,枢经推拿组的Bcl-2蛋白表达水平仍高于模型组,Caspase-3、TLR8蛋白表达水平仍低于模型组,而ERK蛋白表达水平高于模型组(P<0.05)。造模后7d,假推拿组和枢经推拿组LncRNA-GAS5基因表达水平均高于模型组,miR-21基因表达水平均低于模型组(P<0.05);枢经推拿组LncRNA-GAS5基因表达水平高于假推拿组,miR-21基因表达水平低于假推拿组(P<0.05);造模后14 d,模型组LncRNA-GAS5基因表达水平低于正常组,枢经推拿组与假推拿组lncRNA-GAS5基因表达水平高于模型组(P<0.05);枢经推拿组与假推拿组miR-21基因表达水平高于模型组(P<0.05)。结论枢经推拿手法对神经病理性疼痛大鼠起到一定的镇痛效果,初步推测镇痛作用机制可能是通过升高LncRNA-GAS5的表达来吸附miR-21介导TLR8/ERK通路相关蛋白抑制神经元凋亡,虽然其具体机制未明确证实,但LncRNA-GAS5有望成为以后治疗神经病理性疼痛的新靶点。

血清lncRNA-GAS5及miR-451在重症肺炎患儿中的表达水平及临床意义

目的 探讨lncRNA-GAS5及miR-451在重症肺炎患儿血清中的表达及临床意义。方法 选取2017年1月至2020年1月西北妇女儿童医院收治的89例重症肺炎患儿为研究组,另选取同期健康体检儿童92例作为对照组。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测血清lncRNA-GAS5和miR-451水平;通过免疫比浊法检测血清载脂蛋白E(ApoE)及C-反应蛋白(CRP)水平;通过化学发光法检测血清降钙素原(PCT)水平;通过Pearson相关分析lncRNA-GAS5、miR-451表达与ApoE、CRP、PCT水平的相关性;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析lncRNA-GAS5及miR-451对重症肺炎的诊断价值。结果 与对照组相比,研究组血清lncRNA-GAS5水平明显降低,miR-451、ApoE、CRP、PCT水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);重症肺炎患儿血清中lncRNA-GAS5表达与ApoE、CRP、PCT水平呈负相关(r=-0.493、-0.526、-0.477,P<0.05),miR-451表达与ApoE、CRP、PCT水平呈正相关(r=0.547、0.446、0.454,P<0.05);lncRNA-GAS5与miR-451联合检测诊断重症肺炎的曲线下面积(AUC)高于二者单项检测。结论 lncRNA-GAS5及miR-451可作为早期诊断重症肺炎的分子标志物。