RNA干扰LncRNA GIHCG表达通过负调控miR-204-5p对肺癌细胞吉非替尼耐药性的影响

目的探讨RNA干扰长链非编码RNA GIHCG(LncRNA GIHCG)表达通过调控微小RNA-204-5p(miR-204-5p)参与肺癌细胞对吉非替尼耐药性的分子机制。方法构建肺癌吉非替尼耐药细胞株(HCC827 GR),用不同浓度的吉非替尼处理HCC827 GR细胞与肺癌HCC827细胞,采用细胞计数试剂盒(CCK)-8法检测细胞增殖抑制率及计算吉非替尼的半数抑制浓度(IC50)以此评估其耐药性。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HCC827 GR细胞中GIHCG与miR-204-5p的表达;双荧光素酶报告基因验证GIHCG与miR-204-5p的靶向关系。分别将si-GIHCG、si-NC、miR-204-5p、miR-NC转染至HCC827 GR细胞,随后使用吉非替尼处理。CCK-8法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、p21、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达量。结果HCC827 GR细胞中GIHCG的表达水平显著高于HCC827细胞(P<0.05),而miR-204-5p的表达水平显著低于HCC827细胞(P<0.05),与pcDNA组HCC827 GR细胞中miR-204-5p表达水平相比,pcDNA-GIHCG组显著降低(P<0.05);与si-NC组HCC827 GR细胞中miR-204-5p表达水平相比,si-GIHCG组显著升高(P<0.05)。相较于吉非替尼+si-NC组,吉非替尼+si-GIHCG组HCC827 GR细胞中GIHCG的表达水平显著降低(P<0.05),细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2、蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),p21、Bax蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),相较于吉非替尼+miR-NC组,吉非替尼+miR-204-5p组HCC827 GR细胞中miR-204-5p的表达水平显著升高(P<0.05),细胞增殖抑制率与细胞凋亡率均显著升高(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),p21、Bax蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),与吉非替尼+si-GIHCG+anti-miR-NC组相比,吉非替尼+si-GIHCG+anti-miR-204-5p组HCC827 GR细胞中miR-204-5p的表达水平显著降低(P<0.05),细胞增殖抑制率与细胞凋亡率均显著降低(P<0.05),CyclinD1、Bcl-2蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),p21、Bax蛋白相对表达量显著降低(P<0.05)。结论LncRNA GIHCG通过调控miR-204-5p增强肺癌细胞对吉非替尼的耐药性。

沉默lncRNA GIHCG通过上调miR-146a-3p增加胶质瘤细胞放射敏感性

目的探讨lncRNA GIHCG对胶质瘤细胞放射敏感性的影响及作用机制。方法qRT-PCR实验检测人脑正常胶质细胞HEB和胶质瘤细胞系U251、A172、SHG139、U87中GIHCG和miR-146a-3p表达水平。以U251和SHG139细胞为研究对象,沉默GIHCG表达或过表达miR-146a-3p后,MTT检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,克隆形成实验检测细胞放射敏感性,蛋白印迹法检测CDK1、CyclinD1、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。生物信息学软件预测GIHCG与miR-146a-3p存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR实验验证GIHCG与miR-146a-3p的靶向关系。结果与HEB细胞比较,胶质瘤U87、U251、A172和SHG139细胞中GIHCG表达升高(P<0.05),miR-146a-3p表达降低(P<0.05)。沉默GIHCG表达或过表达miR-146a-3p,U251和SHG139细胞存活率、存活分数、CDK1、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率和Bax蛋白表达升高(P<0.05)。GIHCG在U251和SHG139细胞中靶向负调控miR-146a-3p表达,抑制miR-146a-3p表达逆转了沉默GIHCG对胶质瘤细胞增殖、凋亡及放射敏感性的影响。结论沉默GIHCG表达可促进miR-146a-3p表达,从而增强胶质瘤细胞的放射敏感性。

lncRNA GIHCG通过调节miR-429在原发性肝癌发生发展中的作用

目的探讨lncRNA GIHCG通过调节miR-429在原发性肝癌发生发展中的作用。方法选择宁波市第七医院2017年1—12月60例原发性肝癌手术患者的肝癌组织及相应的癌旁组织。将HepG2细胞根据随机数字法分为空白对照组、阴性对照组和lncRNA GIHCG-siRNA组。采用RT-PCR测定肝癌组织和细胞中lncRNA GIHCG mRNA和miR-429水平,采用WST-1测定细胞增殖,采用Transwell法测定细胞侵袭和迁移能力。结果肝癌组织中lncRNA GIHCG mRNA水平高于癌旁组织(P<0.05),miR-429水平低于癌旁组织(P<0.05)。肝癌细胞中lncRNA GIHCG mRNA水平高于正常肝细胞(P<0.05),miR-429水平低于正常肝细胞(P<0.05)。肝癌组织及肝癌细胞中lncRNA GIHCG mRNA和miR-429呈负相关(P<0.05)。第3天和第5天,GIHCG-siRNA组细胞OD值低于空白对照组和阴性对照组(均P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组比较,lncRNA GIHCG-siRNA组HepG2细胞中lncRNA GIHCG mRNA水平、细胞侵袭和迁移能力降低(均P<0.05),miR-429水平升高(均P<0.05)。结论原发性肝癌组织中lncRNA GIHCG水平升高,lncRNA GIHCG可能通过调节miR-429促进肝癌细胞增殖和侵袭迁移。

长链非编码RNA GIHCG在胆管癌组织中表达及其临床意义

目的:通过分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库,筛选胆管癌预后相关长链非编码RNA(lncRNA)GIHCG,检测其在胆管癌组织中的表达水平,探讨其临床意义。方法:使用R语言的limma包分析TCGA中31例胆管癌组织和9例癌旁组织的数据,后用survival包及survival ROC包筛选与患者生存相关的差异基因表达lncRNA。通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)和免疫荧光原位杂交技术(FISH)检测lncRNA的表达水平,分析其与患者临床特征的相关性。采用小干扰RNA敲低lncRNA GIHCG表达水平,通过Transwell检测其对胆管癌细胞系迁移能力的影响。结果:共筛选到2970个差异表达lncRNAs,其中上调1852个,下调1118个。生存分析、受试者工作特征(ROC)曲线[显示lncRNA GIHCG、ROC曲线下与坐标轴围成的面积(AUC)值最大,为0.684]及与临床资料的相关性分析结果表明,lncRNA GIHCG表达与胆管癌患者淋巴结转移具有明显相关性,P<0.001。lncRNA GIHCG在胆管癌组织中的表达显著升高,与肿瘤大小和淋巴结转移密切相关。Transwell实验结果表明,lncRNA GIHCG可促进胆管癌细胞的迁移。结论:lncRNA GIHCG的表达水平在胆管癌组织中显著升高,且与患者生存、淋巴结转移密切相关,有望成为新的胆管癌诊断或治疗分子标志物。